NAP染色在慢性粒細胞白血病和細菌感染中的應用

【摘要】 目的 分析中性粒細胞堿性磷酸酶（neutrophil alkaline phosphatase，NAP）染色在慢性粒細胞白血病和細菌感染中的應用價值。方法 選取2010年1月—2022年12月尤溪縣總醫院收治的30例慢性粒細胞白血病患者與30例細菌感染患者作為研究對象，均進行血常規檢測和血涂片NAP染色，用油鏡分類計算出NAP陽性的百分數及積分，并分析其結果。結果 細菌感染時NAP平均陽性率（86.77±4.22）%，高于慢性粒細胞白血病時NAP平均陽性率（11.96±4.83）%，差異有統計學意義（P＜0.05）。細菌感染時NAP平均積分（305.67±30.40）分，高于慢性粒細胞白血病時NAP平均積分（15.92±7.05）分，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 NAP染色用于慢性粒細胞白血病與細菌感染的鑒別有重要的意義。

【關鍵詞】 NAP染色；血像；慢性粒細胞白血病；細菌感染

文章編號：1672-1721（2024）31-0060-03" " "文獻標志碼：A" " "中國圖書分類號：R512.62

近年來隨著環境變化，慢性粒細胞白血病患者和細菌感染患者越來越多。血常規檢測有時難以區分慢性粒細胞白血病患者和細菌感染患者。對于慢性粒細胞白血病與細菌感染，可通過血片NAP染色的陽性率和積分的不同加以區別。本研究分析NAP染色在慢性粒細胞白血病和細菌感染中的應用價值，為NAP染色用于慢性粒細胞白血病與細菌感染的鑒別提供參考，報告如下。

1 一般資料

選取2010年1月—2022年12月尤溪縣總醫院收治的30例慢性粒細胞白血病患者與30例細菌感染患者作為研究對象。慢性粒細胞白血病患者30例，血常規檢查中白細胞數10×109/L～50×109/L的12例，血常規檢查中白細胞數50×109/L～100×109/L的18例；肝脾腫大21例，肝脾無腫大9例。細菌感染患者30例，血常規檢查中白細胞數10×109/L～50×109/L的23例，血常規檢查中白細胞數50×109/L～100×109/L的7例；中性分葉核細胞占80%～90%的21例，中性分葉細胞占90%以上的9例。2組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），可進行比較。本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準。

2 方法

2.1 儀器及試劑

XN-1000自動細胞分析儀、溶血劑、清洗液、稀釋及室內質控品由希森美康株式會社提供。血常規抗凝血采用福州長庚醫療器械有限公司生產的EATD-K2真空采血管。NAP染液采用珠海貝索有限公司生產的瑞氏染液。鏡檢采用OLYMPUS顯微鏡。

2.2 檢測方法

儀器每天清洗保養及質量控制，保證儀器正常運行及結果準確。消毒患者手臂靜脈血管，用采血針抽取患者2 mL血液至EATD-K2抗凝真空管。抽完顛倒混勻，防止血液凝固。用XN-1000自動細胞分析儀測現結果，最好在2 h內檢測完畢。

2.3 未梢血涂片用NAP試劑染色

偶氮偶聯法染色原理：中性粒細胞中的堿性磷酸酶在pH值9.2～9.8緩沖液中，能水解磷酸萘酚鈉，并釋放磷酸與萘酚，再以重氮鹽與奈酚偶聯生成不溶性的有色偶氮染料沉于胞質中。

試劑組成：（1）固定劑（A液），主要成分甲醛；（2）偶氮溶液（B液），主要成分永固桃紅FBB；（3）亞硝酸鈉溶液（C液），主要成分亞硝酸鈉溶液；（4）磷酸萘酚鈉AS-BI溶液（D液），主要成分磷酸萘酚鈉AS-BI；（5）中性紅溶液（E液），主要成分中性紅。

2.4 工作液配制

1份43 mL浸染工作液至少可以同時放置8～10張涂片。以50 mL容積的染缸配制為例，浸染工作液的配制方法如下：（1）重氮鹽的準備。取B液1 mL與C液1 mL徹底混勻，靜置2 min。（2）染缸（自備染液缸）內加入40 mL蒸餾水。（3）將重氮鹽溶液倒入染缸內混勻。（4）取D液1 mL加入染缸內，輕輕混勻。

1份2.15 mL滴染工作液配制方法：試管內加入B液50 μL和C液50 μL，混勻，靜置2 min；加蒸餾水2 mL，加D液50 μL，混勻。

2.5 染色步驟

（1）末梢涂片充分干燥后，滴加固定劑A液（用前恢復室溫，并充分搖勻）固定30～60 s，蒸餾水沖洗、甩干。（2）滴加或浸入工作液15 min（冬天室溫低，用37℃水浴孵育），蒸餾水沖洗10～30 s，甩干。（3）E液（使用前一定要充分搖勻）復染1～2 min，蒸餾水稍沖（沖水時間不宜過長，否則核淡染），干后鏡檢。（4）計算和積分。反應結果以積分值報，油鏡下計算100個中性桿核、分葉粒細胞，分別記錄其分級情況，所有陽性細胞積分相加即為積分。參考范圍陽性反應主要見于成熟中性粒細胞（桿核及分葉核粒細胞）中，健康成人一般中性粒細胞堿性磷酸酶積分為35～100分。

2.6 結果判斷標準及注意事項

結果判斷標準為NAP陽性顆粒藍色。“-”，0分，細胞質中無陽性染色顆粒。“+”，1分，胞質中含少量顆粒呈彌漫淺藍色，不超過胞質總面積的1/4。“++”，2分，胞質中含中等量顆粒或呈彌漫藍色，占胞質總面積的1/2。“+++”，3分，胞質中含較多深顆粒或呈彌漫較深藍色。“++++”，4分，胞質中充滿粗大顆粒呈彌漫深藍色。分類100個中性分葉核粒細胞，計算出NAP陽性率及積分。

注意事項：（1）建議E液放于常溫儲存，其余試劑使用前恢復室溫，用前搖勻試劑；B液、C液充分混勻，所用容器必須潔凈，正常工作液顏色為淺黃色或金黃色，若工作液配制后液體呈棕色或暗棕色，說明B液、C液沒有充分混勻或試劑快失效，致使染色失敗。（2）應采用新鮮涂片做NAP染色，涂片放置過久會導致酶活性降低；使用抗凝血涂片染色，陽性結果不穩定。（3）工作液于臨用前新鮮配制，并在10 min內使用，以免影響染色效果。（4）需用感染發熱患者或正常人外周血涂片作為陽性對照。（5）血片經工作液染完后，用水充分沖洗，將片子上殘留的工作液沖洗干凈，否則影響E液對細胞核的復染效果。（6）工作液對染片有脫片的作用，可能導致涂片粘附不牢。建議沖水時注意力度，以免涂片脫落。（7）由專業人士使用及進行結果判讀。（8）使用前要詳細閱讀使用說明書，在有效期內使用，并做好個人防護。（9）注意生產早期、生產批號和有效期。

2.7 統計學方法

采用SPSS 10.0統計學軟件分析數據，計量資料以x±s表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

細菌感染時NAP平均陽性率（86.77%），高于慢性粒細胞白血病時NAP平均陽性率（11.96%），差異有統計學意義（P＜0.05）；細菌感染時NAP平均積分（305.67±30.40）分，高于慢性粒細胞白血病時NAP平均積分（15.92±7.05）分，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

4 討論

本研究結果顯示，細菌感染時NAP平均陽性率、平均積分均明顯高于慢性粒細胞白血病，差異有統計學意義（P＜0.05）。慢性粒細胞白血病患者血常規檢測時，有的患者血常規白細胞數很高、分類分葉細胞增多、嗜酸細胞與嗜堿細胞增多、血小板增多，與慢性粒細胞白血病患者血常規檢測接近；有的血常規白細胞不高，分類時分葉細胞增多，與細菌感染的血像相似很難區分，需做NAP染色進行區分。細菌感染時NAP陽性率達80%以上，NAP積分200以上；慢性粒細胞白血病時NAP陽性率低，有的甚至為0，NAP積分也低[1-4]。當NAP陽性率及積分小時，進一步做bcr/abl基因的檢測。bcr/abl p210由t（9；22）（q34；q11）易位形成，存在于95%的慢性粒細胞白血病患者中。

慢性粒細胞白血病是造血干細胞克隆性增生疾病，表現外周血白細胞進行性增高，中幼、晚幼、桿狀核粒細胞增生為主，伴有嗜酸、嗜堿粒細胞增多，脾腫大。90%以上的慢性粒細胞白血病患者骨髓細胞中有Ph染色體或bcr/abl基因[5]。慢性粒細胞白血病發病率高，占成人白血病的40%左右，多發于20～50歲人群。

慢性粒細胞白血病病因未明。電離輻射是公認的慢性粒細胞白血病致病因素之一，暴露于電離輻射有較高的發病率。90%以上慢性粒細胞白血病患者粒細胞中出現Ph染色體。Ph染色體是9號與22號染色體長臂末端相互易位形成。分子生物研究證明，9號染色體長臂q34帶的斷裂使abl基因位點轉移到22號染色體q11帶上bcr基因位點，產生新的bcr/abl融合基因，表達新的雜合mRNA，進而編碼翻譯出新的融合蛋白，具有很強的酪氨酸激酶活性，觸發細胞增生失常而致病。bcr/abl融合基因還有抗細胞凋亡的功能，造成粒細胞在體內聚集。

慢性粒細胞白血病在各年齡均可發病，中老年人多見，男性多于女性。大多數慢性粒細胞白血病發病在慢性期，患者自覺癥狀不明顯。有的患者在體檢或其他疾病就醫發現血常規白細胞異常增高或脾大而被發現。有的患者只有白細胞高，肝脾并不腫大。有的患者表現為低熱、多汗、食欲減退等癥狀。脾臟腫大是慢性粒細胞白血病最為突出的特征，就醫時已達到臍或臍以下，質硬、無壓痛。肝可輕度至中度腫大，部分患者胸骨中下段有壓痛。當白細胞極度增高至大于200×109/L時，可發生“白細胞淤滯癥”，表現為呼吸困難、語言不清、中樞神經出血等癥狀。疾病后期可有貧血、出血等癥狀，表現為皮膚出血、鼻衄、月經過多等出血癥狀。多數慢性粒細胞白血病患者最終轉化為急性白血病。該病中位生存期為3～5年。通過造血干細胞移植，可使部分患者得到治愈。

慢性粒細胞白血病時白細胞總數顯著增高，常超過30×109/L，多數在50×109/L～300×109/L；分類時，出現大量未成熟細胞，以中性中幼、晚幼粒增多尤為突出；桿狀分葉粒細胞增多；嗜酸性粒細胞增多，嗜堿性粒細胞增多可達10%～20%；NAP陽性率及積分低。嗜堿性粒細胞的增多是慢性粒細胞白血病特征之一。90%～95%的慢性粒細胞白血病患者處于慢性期，持續1～4年，表現為貧血和脾大，可能有出血、疲乏無力等癥狀。隨著病情發展，原粒細胞可增多；加速期原粒細胞多于10%，可出現發熱、乏力、納差、淋巴結突然腫大等癥狀，持續數月或數年；急變期原粒細胞大于20%。慢性粒細胞白血病終未期可能危及生命，可發生急粒變、急淋變和急單變。在疾病早期，紅細胞數和血紅蛋白正常，以后逐漸減少，出現貧血。初診病例血小板正常或增多，增多時可達

1 000×109/L以上，加速期或急變期可減少。骨髓涂片檢查時，有核細胞增生極度活躍，粒系增生為主，紅系或其他系相對減少或受抑，粒紅比例可達（10～50）∶1；中幼、晚幼及桿狀核粒細胞明顯增多，原始粒細胞＜10%，嗜酸、嗜堿性粒細胞增多；巨核細胞正常或增多，晚期可減少。該病晚期可發生急變[6]，50%～60%發展為急粒變，20～30%為急淋變，少數患者為急單變。急粒變時，骨髓中原粒細胞＞20%；急淋變時，骨髓中原淋+幼淋＞20%；急單變時，骨髓中原單+幼單＞20%。

感染反應是機體受某些疾病或外界因素刺激后，造血組織出現的一種異常反應，血象類似白血病但非白血病的表現。微生物或內毒素進入機體被巨噬細胞吞噬后，巨噬細胞和T細胞被激活，產生各種造血生長因子，如G-CSF、GM-CSF、M-CSF，并釋放細胞因子，如IL-1、IL-3、TNF。G-CSF、GM-CSF、IL-3等可刺激骨髓造血干細胞和前細胞的增生、分化，促使貯存池中的中性粒細胞大量釋放至邊緣池、循環池，使外周白細胞計數明顯增高（少數正常或減少）。血常表現為白細胞總數明顯增高，同時出現一些桿狀粒細胞及少數的晚、中幼粒細胞，C-反應蛋白、降鈣素原、白細胞介素-6增高[7-9]。有些患者伴有貧血和血小板減少。大多數感染反應有明確的病因，以細菌感染及惡性腫瘤多見，其次是某些藥物的毒性作用或中毒，還有變態反應性疾病，急性出血、溶血性貧血、組織損傷、大面燒傷等都可以引起白細胞增高。當原發病好轉，類白反應迅速恢復，一般愈后良好。

當血常規白細胞明顯增高，以中性分葉核粒細胞為主，出現核左移時，進行NAP染色。如NAP陽性率及積分明顯增高，細菌感染概率更大；如NAP陽性率及積分減低，慢性粒細胞白血病的概率更大[10]。NAP染色對細菌感染與慢性粒細胞白血病的診斷有重要的意義。

參考文獻

[1] 胡曉麗，郝東升，胡軍，等.中性粒細胞堿性磷酸酶染色在白血病治療中的臨床意義[J].中西醫結合心血管病電子雜志，2016，4（25）：192.

[2] 董仁康，劉輝，湯瓊健.中性粒細胞堿性磷酸酶檢驗的應用及診斷價值評估[J].中外醫療，2021，40（36）：9-12.

[3] 高英杰.部分白血病治療中中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色的治療價值分析[J].世界最新醫學信息文摘，2015，15（34）：48.

[4] 葉筱穎.中性粒細胞堿性磷酸酶染色在部分白血病治療中的應用價值[J].基層醫學論壇，2015，19（31）：4387-4388.

[5] 溫莉娟，劉利明，孟昭彥，等.53例慢性髓系白血病細胞遺傳學和bcr/abl融合基因檢測[J].中國優生與遺傳雜志，2006（3）：28-29.

[6] 劉亞琳，王曉寧，雷秀麗，等.慢性粒細胞白血病急變期與急性白血病細胞形態學特征差異分析[J].現代腫瘤醫學，2013，21（10）：2332-2333.

[7] 宋俊平，樊新艷.全血CRP聯合血常規檢驗在細菌感染性疾病患兒診斷中的應用[J].臨床研究，2023，31（9）：123-125.

[8] 丁紅，朱星成，遲錦瑜，等.NAP、PCT、hs-CRP檢測在鑒別感染類型中的價值[J].檢驗醫學，2017，32（10）：894-897.

[9] 李程.降鈣素原聯合血常規相關指標在血流感染中的應用價值[J].檢驗醫學與臨床，2023，20（11）：1573-1576，1582.

[10] 李仕福.外周血中性粒細胞堿性磷酸酶染色對急性化膿性闌尾炎診斷價值的探討[J].世界最新醫學信息文摘，2017，17（46）：31，34.

（編輯：張興亞）

作者簡介：張立佑（1973—），男，福建尤溪人，本科，副主任技師，主要從事血常規血液病骨髓檢查方面的研究。