2023年湖南部分地區(qū)豬場(chǎng)CSFV、PRRSV、PRV的抗體檢測(cè)與分析

摘要：為研究我國(guó)湖南部分地區(qū)豬場(chǎng)豬瘟（CSF）、豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS）和豬偽狂犬?。≒R）的疫苗免疫狀況和病毒感染狀況，2023年上半年，對(duì)湖南不同豬場(chǎng)隨機(jī)采集的221份血清樣品，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）分別對(duì)該三種疫病進(jìn)行抗體檢測(cè)。結(jié)果表明，CSF、PR的免疫情況較好，抗體陽(yáng)性率均高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)；豬瘟病毒（CSFV）平均抗體陽(yáng)性率為89.1%；豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）平均抗體陽(yáng)性率為65.2%；豬偽狂犬病毒（PRV）gB的抗體陽(yáng)性率為87.3%、gE的抗體陽(yáng)性率為10.4%，存在野毒感染的情況；綜上所述，建議定期合理地對(duì)豬群進(jìn)行抗體檢測(cè)，并通過(guò)檢測(cè)結(jié)果來(lái)調(diào)整免疫程序，進(jìn)而提高豬群疫病的防控水平。

關(guān)鍵詞：抗體檢測(cè)；豬瘟；豬繁殖與呼吸障礙綜合征；豬偽狂犬病

豬瘟（CSF），是由豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）引起豬的一種以高熱和出血為主要癥狀的重要傳染病，其暴發(fā)時(shí)嚴(yán)重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[1]，已被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH）列為法定通報(bào)疾病[2]，目前應(yīng)對(duì)該病最好的方法是疫苗免疫。豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS），又稱豬藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一種高度傳染性疾病，主要引起豬呼吸道疾病和母豬流產(chǎn)[3]，該病于1987年首先暴發(fā)于美國(guó)，隨后在歐洲國(guó)家相繼暴發(fā)，我國(guó)于1996年在國(guó)內(nèi)首次分離到PRRSV并命名為CH-1a株[4]；此外近年也有研究結(jié)果表明，國(guó)內(nèi)毒株的基因重組進(jìn)一步加劇了PRRSV的防控難度[5-6]。豬偽狂犬?。≒R），是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病，其臨床癥狀常表現(xiàn)為母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎等；公豬生殖衰竭；育肥豬生長(zhǎng)停滯；仔豬表現(xiàn)嚴(yán)重的神經(jīng)癥狀及腹瀉等癥狀。2011年?yáng)|北地區(qū)規(guī)?；呙缑庖邎?chǎng)暴發(fā)的高致病性PRV突變毒株使其又在國(guó)內(nèi)豬群中呈流行趨勢(shì)[7]，給國(guó)內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失及新的挑戰(zhàn)。

為了解2023年上半年湖南部分地區(qū)CSFV、PRRSV、PRV免疫抗體水平，本試驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)湖南4個(gè)地區(qū)（瀏陽(yáng)、株洲、邵陽(yáng)、婁底）的中小型豬場(chǎng)的221份血清樣品進(jìn)行抗體檢測(cè)及分析，以期為湖南部分地區(qū)豬場(chǎng)疫病防控工作提供參考。

1 材料與方法

1.1" 材料

1）樣品來(lái)源。2023年上半年分別對(duì)湖南4個(gè)地區(qū)（瀏陽(yáng)、株洲、邵陽(yáng)、婁底）中小型豬場(chǎng)隨機(jī)采集221份血液樣品，樣品主要以懷孕中期母豬為主。待血液樣品凝固后吸取血清5 000 r/min離心2 min進(jìn)一步分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2）主要試劑。CSFV、PRRSV、PRV-gB、PRV-gE抗體檢測(cè)試劑盒，均為北京金諾診斷（金諾百泰生物科技有限公司）。

3）主要儀器。酶標(biāo)儀，型號(hào)Infinite？誖 200 PRO，瑞士帝肯集團(tuán)公司；高速離心機(jī)，型號(hào)5424，德國(guó)Eppendoft；移液器，德國(guó)Eppendoft；微孔板恒溫振蕩器，型號(hào)Leopard 70-2A，普萊特科學(xué)儀器（北京）有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，型號(hào)SPX-250BIII，天津泰斯特。

1.2 方法

1）三種病毒Elisa抗體檢測(cè)及結(jié)果判定。按照CSFV、PRRSV、PRV-gE 和 PRV-gB 病毒抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作?；静僮鬟^(guò)程如下：加入稀釋血清、陰性血清和陽(yáng)性血清孵育→洗滌→加入酶標(biāo)抗體孵育→洗滌→加入底物孵育→加入終止液→ OD 值測(cè)定與分析。3種病毒抗體檢測(cè)結(jié)果按說(shuō)明書(shū)標(biāo)準(zhǔn)判定（表 1）。注意所有檢測(cè)試劑盒組分在使用前需恢復(fù)至 18～25 ℃條件下操作。

2 結(jié)果

2.1 總體檢測(cè)情況

在采集的湖南省四個(gè)市州共221份樣品中，CSFV抗體陽(yáng)性率為89.1%，變異系數(shù)為0.32%，免疫水平較高且抗體水平整齊度高，達(dá)到國(guó)家規(guī)定的免疫標(biāo)準(zhǔn)免疫（抗體合格率保持在70%以上）；PRRSV抗體陽(yáng)性率為65.2%，變異系數(shù)為0.91%，免疫水平較差，未達(dá)到國(guó)家規(guī)定的免疫標(biāo)準(zhǔn)；PRV-gB的陽(yáng)性率為87.3%，變異系數(shù)1.15%，免疫效果較好但整齊度不高；PRV-gE抗體陽(yáng)性率為10.4%，其結(jié)果表明該地區(qū)存在一定的野毒感染。具體結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 不同病原抗體檢測(cè)情況

1）CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果。CSFV不同地區(qū)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表3）表明：湖南瀏陽(yáng)、株洲、邵陽(yáng)、婁底在四個(gè)地區(qū)中抗體陽(yáng)性率最高為婁底94.7%，最低為瀏陽(yáng)78.6%，其結(jié)果表明，湖南部分地區(qū)CSF抗體陽(yáng)性率均在70%以上，且變異系數(shù)較低，總體免疫狀態(tài)良好。

2）PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果。PRRSV不同地區(qū)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表4）表明：湖南四個(gè)地區(qū)的PRRSV免疫水平差異較大且只有邵陽(yáng)地區(qū)符合國(guó)家規(guī)定免疫標(biāo)準(zhǔn)，其余三個(gè)地區(qū)免疫效果均未達(dá)到免疫標(biāo)準(zhǔn)，免疫水平較低，其中株洲地區(qū)抗體合格率不到50%。

3）PRV抗體檢測(cè)結(jié)果。PRV不同地區(qū)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表5、表6）表明：婁底市PRV-gB抗體陽(yáng)性率最高，為95.7%；其次是株洲、邵陽(yáng)和瀏陽(yáng)。同時(shí)株洲、邵陽(yáng)、婁底地區(qū)存在一定比例的PRV-gE抗體陽(yáng)性，提示存在一定程度的野毒感染。

3 討論

根據(jù)中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部制定的《國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》的相關(guān)規(guī)定，存欄豬群體免疫密度應(yīng)保持在90%以上，且同時(shí)抗體陽(yáng)性率≥70%判定為合格。CSF、PRRS、PR作為豬場(chǎng)基礎(chǔ)免疫指標(biāo)，其免疫效果關(guān)乎整個(gè)豬群的健康狀況和生產(chǎn)效益，目前由于該三類疫病的商品化疫苗眾多，進(jìn)而導(dǎo)致不同地區(qū)不同豬場(chǎng)的免疫效果存在較大差異，因此通過(guò)血清學(xué)技術(shù)第一時(shí)間掌握豬群抗體水平并制定相應(yīng)措施，對(duì)這三類疫病的防控甚至凈化具有重要的生產(chǎn)意義。

通過(guò)本次調(diào)查對(duì)于湖南省部分地區(qū)2023年2—4月CSFV、PRRSV、PRV-gB、PRV-gE的血清檢測(cè)結(jié)果顯示，其抗體陽(yáng)性率分別為89.1%、65.2%、87.3%、10.4%。

本次調(diào)查的CSFV抗體結(jié)果表明湖南各地區(qū)CSFV抗體陽(yáng)性率均在70%以上，婁底地區(qū)陽(yáng)性率達(dá)到94.7%，各地區(qū)免疫效果較好且群體抗體水平整齊度高。近年來(lái)，我國(guó)市場(chǎng)上已有60余家企業(yè)獲得豬瘟疫苗的政府生產(chǎn)批文[8]，隨著CSFV疫苗的迭代創(chuàng)新，疫苗具有更高的安全性和穩(wěn)定性，這可能是大部分豬場(chǎng)CSFV免疫抗體相比于其他疫病抗體合格率高的原因，如于浩洋[9]于2017—2018年調(diào)查了湖南部分地區(qū)CSFV抗體陽(yáng)性率為82.2%，張振興等[10]調(diào)查了云南2016—2020年云南部分地區(qū)五年來(lái)CSFV抗體陽(yáng)性率為88.23%，孫建宏等[11]對(duì)2021—2022年規(guī)?；i場(chǎng)主要疫病抗體進(jìn)行統(tǒng)計(jì)CSFV抗體陽(yáng)性率為93.74%，根據(jù)以上調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)2018年后CSFV血清抗體陽(yáng)性率有逐年上升的趨勢(shì)，一方面原因可能是2018年新型豬瘟基因工程亞單位疫苗相繼研究成功并開(kāi)始推廣使用[12]，另一方面可能是2018年我國(guó)發(fā)生非洲豬瘟，豬場(chǎng)加大了生物安全防控措施的執(zhí)行力度。

本次調(diào)查經(jīng)ELISA檢測(cè)PRRSV血清樣本共221份，總體抗體陽(yáng)性率僅65.2%，且變異系數(shù)高，群體免疫效果差，從不同區(qū)域?qū)Ρ葋?lái)看，其中只有邵陽(yáng)地區(qū)抗體合格率達(dá)標(biāo)陽(yáng)性率為82.3%，株洲地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征陽(yáng)性率最低，導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因一方面可能是環(huán)境中存在PRRSV野毒，使免疫PRRSV 疫苗產(chǎn)生的保護(hù)性抗體與PRRSV野毒發(fā)生了中和，進(jìn)而導(dǎo)致整個(gè)抗體水平偏低，另一方面可能與采樣的隨機(jī)性有關(guān)。目前各地區(qū)豬場(chǎng)逐漸重視藍(lán)耳病的生物安全防控，并通過(guò)抗體檢測(cè)結(jié)果采取相應(yīng)的應(yīng)對(duì)措施降低損失提高生產(chǎn)效益[13-15]。

本次調(diào)查PRV-gB血清樣本陽(yáng)性率為87.3%，其中陽(yáng)性率最高的地區(qū)為婁底，其次為株洲、邵陽(yáng)、瀏陽(yáng)，陽(yáng)性率分別為94.7%、91.9%、77.45%和75%，同時(shí)除瀏陽(yáng)外，其他三個(gè)地區(qū)均檢測(cè)到不同程度的PRV-gE抗體，提示該地區(qū)存在野毒感染，分析該結(jié)果發(fā)現(xiàn)，野毒感染的陽(yáng)性率與疫苗抗體的陽(yáng)性率的高低趨勢(shì)相類似，造成這樣的原因可能是PRV疫苗與PRV野毒均能使PRV-gB抗體的滴度升高，同時(shí)這也說(shuō)明即使存在較高的gB抗體也不能完全保護(hù)豬群免受野毒感染，這也與段群鵬[16]和李海琴[17]調(diào)查的結(jié)果類似。通過(guò)本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，即便是存在高滴度疫苗抗體，也會(huì)存在野毒感染的情況，說(shuō)明PRV在豬群中普遍存在，因此對(duì)PRV的防控甚至凈化，還需要完善生物防控體系，同時(shí)使用對(duì)豬群使用保健產(chǎn)品以提高豬群非特異性免疫配合gE基因缺失苗及時(shí)淘汰感染豬以達(dá)到凈化PRV的目的。■

參考文獻(xiàn)：

[1] MOENNIG V. Introduction to classical swine fever： virus， disease and control policy [J]. Vet Microbiol，2000，73（2-3）：93-102.

[2] 蔡光英.世界動(dòng)物衛(wèi)生組織最新法定通報(bào)性疾病名錄[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2008（6）：150-151.

[3] BENFIELD D A， NELSON E， COLLINS J E， et al. Characterization of swine infertility and respiratory syndrome （SIRS） virus （isolate ATCC VR-2332） [J]. J Vet Diagn Invest， 1992， 4（2）：127-133.

[4] 郭寶清，陳章水，劉文興，等.從疑似PRRS流產(chǎn)胎兒分離PRRSV的研究[J].中國(guó)畜禽傳染病，1996（2）：3-7.

[5] LI C， ZHUANG J， WANG J， et al. Outbreak Investigation of NADC30-Like PRRSV in South-East China [J]. Transbound Emerg Dis， 2016， 63（5）： 474-479.

[6] ZHAO J， XU L， XU Z， et al. Emergence and spread of NADC34-like PRRSV in Southwest China [J]. Transbound Emerg Dis， 2022， 69（5）： e3416-e3424.

[7] 彭金美，安同慶，趙鴻遠(yuǎn)，等.豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差異性分析[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，35（1）：1-4.

[8] 李利山，劉玉香，韓斌.豬瘟疫苗的研究進(jìn)展[J].中國(guó)動(dòng)物保健，2023，25（3）：116-118.

[9] 于浩洋.湖南部分地區(qū)CSFV、PRRSV、PRV、PCV2血清抗體的監(jiān)測(cè)[D].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2020.

[10] 張振興，王斌，朱麗華，等.2016年-2020年云南省部分豬場(chǎng)豬瘟免疫抗體檢測(cè)與分析[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2023，44（1）：141-144.

[11] 孫建宏，關(guān)野，陶啟蒙，等.2021-2022年規(guī)?；i場(chǎng)主要疫病抗體統(tǒng)計(jì)分析報(bào)告[J].豬業(yè)科學(xué)，2023，40（4）：100-101.

[12] 王遵寶，李俊輝，豆智華，等.豬瘟E2亞單位疫苗攻毒保護(hù)效力研究[J].中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2018，26（4）：18-23.

[13] 周宏超，賈佩，連星，等. 2017年-2019年陜西省部分豬場(chǎng)豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬偽狂犬病免疫抗體檢測(cè)分析[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2022，43（8）：118-121.

[14] 劉曉東，連世存，劉豐波，等.2015-2017年國(guó)內(nèi)部分豬場(chǎng)豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體監(jiān)測(cè)分析[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2020，40（1）：28-31.

[15] 蔡丙嚴(yán)，戴建華，田其真，等.2016～2018年江蘇省規(guī)模豬場(chǎng)PRRS血清學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2019，27（4）：92-97.

[16] 段群棚，趙碩，周英寧，等.2017-2020年廣西部分豬場(chǎng)送檢血清豬偽狂犬病抗體檢測(cè)[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2021，38（12）：5-11.

[17] 李海琴，康昭風(fēng)，譚美芳，等. 2016-2017年江西省部分地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)豬偽狂犬病血清流行病學(xué)調(diào)查[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，40（5）：1037-1041.

收稿日期：2023-10-07

基金項(xiàng)目：生豬重大疫病快速流動(dòng)檢測(cè)體系建立和應(yīng)用（2021-RD20）。

作者簡(jiǎn)介：范方程（1998.06— ），男，碩士，研究方向：獸醫(yī)傳染病診斷與防控。E-mail：fanfangcheng1998@126.com。

*通信作者：劉進(jìn)輝（1968.09— ），男，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：獸藥創(chuàng)制與臨床應(yīng)用，動(dòng)物疾病綜合防控與保健飼養(yǎng)。E-mail：13974803880@163.com。