?發(fā)酵五子衍宗方對(duì)產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞血清生化指標(biāo)和盲腸微生物的影響

摘要：為了評(píng)估發(fā)酵五子衍宗方對(duì)產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞的影響，設(shè)置5組試驗(yàn)，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組分別飼喂在基礎(chǔ)日糧中添加0.50%未發(fā)酵五子衍宗方和0.25%、0.50%、0.75%的發(fā)酵五子衍宗方，檢測(cè)血清生化指標(biāo)和盲腸微生物。結(jié)果表明：與對(duì)照組相比，在產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞基礎(chǔ)日糧中添加0.25%的發(fā)酵五子衍宗方可以顯著提高血清球蛋白和總蛋白含量，且顯著高于未發(fā)酵五子衍宗方處理；添加0.25%和0.50%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低血清低密度脂蛋白、尿素氮和肌酐含量；添加0.75%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低血清低密度脂蛋白、尿素氮含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、總膽紅素和直接膽紅素含量。在盲腸微生物菌群中，添加0.25%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低Prevotellaceae_UCG_001的相對(duì)豐度；添加0.50%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低unclassified_Lachnospiraceae的相對(duì)豐度；補(bǔ)充0.75%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低unclassified_Bacteroidales的相對(duì)豐度。綜上發(fā)現(xiàn)，在蛋雞基礎(chǔ)日糧中添加0.25%和0.50%的發(fā)酵五子衍宗方可以改善蛋雞肝腎功能和盲腸菌群組成。

關(guān)鍵詞：五子衍宗方；發(fā)酵；產(chǎn)蛋后期；蛋雞；腸道微生物

中圖分類號(hào)：S831.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-060X（2024）08-0023-06

Fermented Wuzi Yanzong Prescription Affects Serum Biochemical Indexes and Cecal Microflora of Roman Laying Hens at the Late Laying Stage

ZHOU Xiao-ling1，2，ZENG Fa-jiao1，2，SHU Yan1，2，WANG Bin1，ZHOU Ying-hua1，2，DENG Zhong-rong1，

CHENG Gang-yi1，WANG Sheng-ping1，2

（1. Hunan Institute of Microbiology， Changsha 410009， PRC; 2. Feeding Probiotics Engineering Laboratory of Hunan Province， Changsha 410009， PRC）

Abstract： The objective of this study was to investigate the effects of fermented Wuzi Yanzong prescription on the serum biochemical indexes and cecal microflora of Roman laying hens at the late laying stage. Roman laying hens were allocated into 5 groups. The control group was fed with the basal diet， while those in other groups received the basal diet supplemented with 0.50% unfermented Wuzi Yanzong prescription and 0.25%， 0.50%， and 0.75% fermented Wuzi Yanzong prescription， respectively. The results indicated that compared with the control group， supplementing 0.25% fermented Wuzi Yanzong prescription elevated the serum levels of globulin and total protein， which surpassed those in the group supplemented with 0.50% unfermented Wuzi Yanzong prescription. Supplementing 0.25% and 0.50% fermented Wuzi Yanzong prescription lowered the serum levels of low-density lipoprotein， urea nitrogen， and creatinine. Supplementing 0.75% fermented Wuzi Yanzong prescription lowered the serum levels of low-density lipoprotein， urea nitrogen， glutamic-pyruvic transaminase， total bilirubin， and direct bilirubin. Furthermore， supplementing 0.25%， 0.50%， and 0.75% fermented Wuzi Yanzong prescription decreased the relative abundance of Prevotellaceae_UCG_001， unclassified_Lachnospiraceae， and unclassified_Bacteroidales， respectively， in cecal microflora. In conclusion， this study suggests that supplementing 0.25% and 0.50% fermented Wuzi Yanzong prescription in the diet of laying hens can enhance the liver and kidney functions and improve the cecal microflora.

Key words： Wuzi Yanzong prescription; fermentation; late laying stage; laying hens; gut microbiota

我國(guó)蛋雞養(yǎng)殖規(guī)模世界第一，蛋雞養(yǎng)殖業(yè)在畜牧業(yè)中占有重要地位[1]。產(chǎn)蛋后期蛋雞因器官老化、生理機(jī)能下降，導(dǎo)致蛋雞生產(chǎn)性能和雞蛋品質(zhì)下降，對(duì)蛋雞養(yǎng)殖效益造成重要影響[2]。腸道菌群紊亂和肝功能降低是產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能下降的重要原因之一[3-5]。有研究表明，高產(chǎn)蛋雞腸道微生物和輸卵管微生物與低產(chǎn)蛋雞存在明顯差異，其微生物多樣性和益生菌豐度更高，有害菌豐度更低[6-8]。因此，調(diào)控腸道微生物可能是改善蛋雞生產(chǎn)性能的重要靶點(diǎn)。

我國(guó)中草藥資源豐富，因其含有大量營(yíng)養(yǎng)成分和活性物質(zhì)而被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖中[9-11]。五子衍宗方由五味子、菟絲子、枸杞子、覆盆子和車前子五味中藥組成，具有抗氧化、改善睪丸和卵巢功能、調(diào)節(jié)生殖激素等作用，在臨床中多被用以調(diào)理生殖功能[12-14]。經(jīng)前期研究發(fā)現(xiàn)，給蛋雞補(bǔ)充五子衍宗方可以改善蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)，同時(shí)改善蛋雞的血清生化指標(biāo)[15]。近年的研究表明，通過(guò)微生物發(fā)酵，可以進(jìn)一步改善中草藥藥效，并降低毒副作用[10，16]。因此，筆者考查發(fā)酵五子衍宗方對(duì)產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞血清生化指標(biāo)和盲腸微生物的影響，旨在為產(chǎn)蛋后期蛋雞健康養(yǎng)殖和中藥類飼料添加劑的開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

450日齡產(chǎn)蛋率相近的健康羅曼蛋雞由瀏陽(yáng)市生旺種養(yǎng)專業(yè)合作社蛋雞場(chǎng)提供。五子衍宗方的枸杞子、菟絲子、覆盆子、五味子和車前子購(gòu)自藥房，分別粉碎過(guò)60目篩，按質(zhì)量比4∶4∶2∶1∶1混勻組成。發(fā)酵五子衍宗方由五子衍宗方粉末加入按5%（v/w）的復(fù)合菌液，保持水分48.5%，發(fā)酵7 d制成，復(fù)合菌液由植物乳桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母等體積組成，每種菌液的活菌數(shù)大于3×108 CFU/mL。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)采用單因素設(shè)計(jì)，將180只蛋雞隨機(jī)分為5組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只雞。對(duì)照組（CON）飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組分別飼喂在基礎(chǔ)日糧中添加0.50%未發(fā)酵五子衍宗方（TCM）、0.25%發(fā)酵五子衍宗（FTCM1）、0.50%發(fā)酵五子衍宗（FTCM2）和0.75%的發(fā)酵五子衍宗（FTCM3），預(yù)飼7 d，試驗(yàn)周期60 d。基礎(chǔ)日糧參照NRC（1994）雞的營(yíng)養(yǎng)需要配制，日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。蛋雞飼養(yǎng)于3層A型籠，每籠5只。試驗(yàn)開(kāi)始前對(duì)籠舍進(jìn)行徹底消毒，蛋雞自由采食、飲水。試驗(yàn)期間每日觀察雞群健康狀況。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1 血清生化指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)束后，禁食12 h，每重復(fù)隨機(jī)選取1只接近平均產(chǎn)蛋率的雞，翼靜脈采血于普通采血管，室溫靜置30 min后，3 500 r/min離心10 min，收集上層血清，-80℃保存?zhèn)溆谩２捎萌詣?dòng)生化分析儀（美國(guó)IDEXX Catalyst One?）測(cè)定血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮、肌酐、尿酸、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量。

1.3.2 盲腸微生物 試驗(yàn)結(jié)束后，每重復(fù)隨機(jī)選取1只接近平均產(chǎn)蛋率的雞，頸靜脈放血致死后解剖，快速將盲腸內(nèi)容物取入2 mL無(wú)菌無(wú)酶凍存管中，由北京百邁客生物科技有限公司進(jìn)行腸道微生物多樣性測(cè)序。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用Excel 2023進(jìn)行整理，使用SPSS 26.0進(jìn)行單因素方差分析，采用鄧肯法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以平均值和平均標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵五子衍宗方對(duì)產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

如表2所示，與對(duì)照組相比，在產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞基礎(chǔ)日糧中添加0.25%的發(fā)酵五子衍宗方可以顯著提高血清球蛋白和總蛋白含量（P＜0.05）；添加0.25%、0.50%和0.75%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低血清低密度脂蛋白和尿素氮含量（P＜0.05）；添加0.75%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、總膽紅素和直接膽紅素含量（P＜0.05）；添加0.25%和0.50%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低血清肌酐含量（P＜0.05）。與添加未發(fā)酵五子衍宗方相比，添加0.25%的發(fā)酵五子衍宗方可以顯著提高血清球蛋白和總蛋白含量（P＜0.05），添加0.75%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量（P＜0.05），其余指標(biāo)在數(shù)值上也有一定改善效果，但不顯著。

2.2 發(fā)酵五子衍宗方對(duì)產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞盲腸微生物多樣性的影響

如圖1所示，在產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞基礎(chǔ)日糧中添加發(fā)酵五子衍宗方對(duì)盲腸微生物的Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)較對(duì)照組和未發(fā)酵五子衍宗方有所提高，Chao1指數(shù)和ACE指數(shù)有所降低，但不顯著。然而，通過(guò)PLS–DA分析觀察到添加發(fā)酵五子衍宗方后產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞的盲腸微生物β多樣性發(fā)生了明顯變化。

2.3 發(fā)酵五子衍宗方對(duì)產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞盲腸菌群組成的影響

如圖2所示，產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞盲腸菌群在門水平上主要由Bacteroidota、Firmicutes、Desulfobacterota、Actinobacteriota、Spirochaetota、Proteobacteria、Synergistota、Verrucomicrobiota、Elusimicrobiota、Cyanobacteria和Campylobacterota組成；與對(duì)照組相比，添加0.25%和0.50%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低了Proteobacteria的相對(duì)豐度，添加0.50%的發(fā)酵五子衍宗方顯著提高了Elusimicrobiota的相對(duì)豐度。在屬水平上，產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞盲腸菌群主要由Rikenellaceae_RC9_gut_group、Bacteroides、unclassified_Bacteroidales、Prevotellaceae_UCG_001、Desulfovibrio、Christensenell-aceae_R_7_group、unclassified_Prevotellaceae、unclassified_Muribaculaceae、unclassified_Oscillospiraceae、Phascolarctobacterium、unclassified_Clostridia_vadinBB60_group、Alloprevotella、unclassified_Lachnospiraceae和Faecalibacterium組成；其中，與對(duì)照組相比，在補(bǔ)充0.25%的發(fā)酵五子衍宗方后Prevotellaceae_UCG_001的相對(duì)豐度顯著降低，在補(bǔ)充0.50%的發(fā)酵五子衍宗方后unclassified_Lachnospiraceae的相對(duì)豐度顯著降低，在補(bǔ)充0.75%的發(fā)酵五子衍宗方后unclassified_Bacteroidales的相對(duì)豐度顯著降低。

3 討論與結(jié)論

3.1 發(fā)酵五子衍宗方對(duì)產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)的檢測(cè)是臨床監(jiān)測(cè)雞群健康的重要的技術(shù)手段，通過(guò)檢測(cè)血清中的各種生化指標(biāo)，可以客觀地評(píng)估動(dòng)物的健康狀況，及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在的疾病或健康問(wèn)題[17]。血清總蛋白和白蛋白含量可以反映機(jī)體的蛋白質(zhì)代謝能力，球蛋白可以反映機(jī)體免疫能力，血清總蛋白、白蛋白和球蛋白水平的升高可以說(shuō)明雞群對(duì)飼糧中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用能力增強(qiáng)，有利于機(jī)體免疫和代謝功能[18-19]。在研究中，產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞基礎(chǔ)日糧中添加0.25%的發(fā)酵五子衍宗方顯著提高了血清球蛋白和白蛋白含量，優(yōu)于對(duì)照組和未發(fā)酵五子衍宗方處理組，說(shuō)明發(fā)酵五子衍宗方可以進(jìn)一步增強(qiáng)產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞的蛋白質(zhì)代謝能力和體液免疫能力。

低密度脂蛋白膽固醇由極低密度脂蛋白膽固醇異化代謝轉(zhuǎn)變及肝臟合成分泌而來(lái)，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)源性膽固醇，其在動(dòng)脈粥樣硬化中起主要作用[20]。血清低密度脂蛋白膽固醇的升高意味著將更多的膽固醇從肝臟運(yùn)到細(xì)胞，不利于機(jī)體脂代謝健康[21]。在研究中，產(chǎn)蛋后期羅曼雞基礎(chǔ)日糧中添加0.25%、0.50%和0.75%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低了血清低密度脂蛋白，說(shuō)明發(fā)酵五子衍宗方可以改善產(chǎn)蛋后期蛋雞脂代謝。

肝臟參與了機(jī)體一系列的代謝和穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)過(guò)程，谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶是評(píng)估肝細(xì)胞是否受損及損傷嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)，當(dāng)細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)或細(xì)胞壞死時(shí)，血清中的酶活性會(huì)升高[22-23]。產(chǎn)蛋后期蛋雞由于代謝功能下降以及脂代謝紊亂，導(dǎo)致肝功能下降，因此肝功能損傷在產(chǎn)蛋后期蛋雞中相當(dāng)常見(jiàn)[24]。在研究中，補(bǔ)充發(fā)酵五子衍宗方處理后的蛋雞血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶均低于對(duì)照組，表明發(fā)酵五子衍宗方可以改善產(chǎn)蛋后期蛋雞的肝臟功能。

肌酐是由腎排泄的一種含氮的代謝產(chǎn)物，是肌氨酸的代謝產(chǎn)物，血液中肌酐濃度的變化只與肌酐的排泄有關(guān)，因此更能準(zhǔn)確地反映腎臟的功能[25-26]。在研究中，給產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞補(bǔ)充0.25%和0.50%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低了血清肌酐含量，并且添加發(fā)酵五子衍宗方處理均顯著降低了尿素氮含量，進(jìn)一步說(shuō)明發(fā)酵五子衍宗方可以改善產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞的腎臟功能。

3.2 發(fā)酵五子衍宗方對(duì)產(chǎn)蛋后期羅曼蛋雞盲腸微生物的影響

近年有研究表明，蛋雞的盲腸微生物和生殖道微生物穩(wěn)態(tài)與蛋雞的生產(chǎn)性能和健康狀態(tài)密切相關(guān)[3，8，27]。王鵬飛等[28]通過(guò)糞菌移植技術(shù)證明了腸道微生物可以改善蛋雞的生產(chǎn)性能和健康狀態(tài)。大多數(shù)關(guān)于補(bǔ)充益生菌的研究也觀察到了微生物對(duì)蛋雞的益生作用[29-30]。因此，調(diào)控腸道微生物是改善蛋雞產(chǎn)蛋性能的重要靶點(diǎn)。

研究表明，蛋雞腸道微生物主要由Bacteroidetes、Firmicutes和Proteobacteria組成[31-32]。在研究中，通過(guò)蛋雞盲腸微生物多樣性測(cè)序，發(fā)現(xiàn)添加0.25%和0.50%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低了Proteobacteria的相對(duì)豐度，添加0.50%的發(fā)酵五子衍宗方顯著提高了Elusimicrobiota的相對(duì)豐度。在屬水平上，添加0.25%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低了Prevotellaceae_UCG_001的相對(duì)豐度；補(bǔ)充0.75%的發(fā)酵五子衍宗方顯著降低了unclassified_Bacteroidales的相對(duì)豐度。Prevotellaceae_UCG_001中的成員大多數(shù)是腸道的常駐菌，幫助分解蛋白質(zhì)和碳水化合物食物，也可作為條件致病菌，具有促炎作用，引起牙周和牙齒、腸道炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、細(xì)菌性陰道炎等問(wèn)題[33-35]，由此證明發(fā)酵五子衍宗方可以提高產(chǎn)蛋后期羅曼雞盲腸益生菌豐度。

綜上可知，在羅曼蛋雞基礎(chǔ)日糧中添加0.25%和0.50%的發(fā)酵五子衍宗方可以改善蛋雞的肝腎功能和盲腸微生物組成，值得推廣。

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（責(zé)任編輯：肖彥資）