膠體金實(shí)驗(yàn) 酶標(biāo)法對(duì)人類(lèi)免疫缺陷病毒抗體檢測(cè)的準(zhǔn)確性分析

【摘要】 目的 探究膠體金實(shí)驗(yàn)與酶標(biāo)法在人類(lèi)免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗體檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取2021年1月—2023年12月在資溪縣疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)的2 000例患者，對(duì)初篩陽(yáng)性的25例患者血清標(biāo)本分別進(jìn)行膠體金實(shí)驗(yàn)與酶標(biāo)法檢測(cè)，初篩陽(yáng)性標(biāo)本送市疾控確診。將免疫印跡（western blot，WB）診斷結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，分析上述2種檢測(cè)方法診斷效能，對(duì)陽(yáng)性樣本帶型分布情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 在初篩陽(yáng)性的25例患者中，WB診斷顯示陽(yáng)性14例、陰性11例；酶標(biāo)法與WB有著良好一致性，酶標(biāo)法診斷靈敏度、準(zhǔn)確率、陰性預(yù)測(cè)值高于膠體金實(shí)驗(yàn)（Plt;0.05）；在酶標(biāo)法診斷的HIV陽(yáng)性患者中，gP120、gP160出現(xiàn)率最高，P55出現(xiàn)率最低。結(jié)論 在HIV抗體檢測(cè)中，酶標(biāo)法有著比膠體金實(shí)驗(yàn)更高的診斷效能，能為陽(yáng)性樣本帶型分布提供指導(dǎo)。

【關(guān)鍵詞】 膠體金實(shí)驗(yàn)；酶標(biāo)法；人類(lèi)免疫缺陷病毒；抗體檢測(cè)

文章編號(hào)：1672-1721（2024）25-0052-03" " "文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A" " "中國(guó)圖書(shū)分類(lèi)號(hào)：R446.62；R512.91

獲得性免疫缺陷綜合征即艾滋病，因感染HIV所致。HIV主要作用于機(jī)體靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞。隨著HIV感染時(shí)間延長(zhǎng)，患者免疫功能會(huì)遭到嚴(yán)重破壞，最終可出現(xiàn)多種感染性疾病而死亡[1]。目前，臨床尚缺乏治愈艾滋病的有效手段，但如果能盡早發(fā)現(xiàn)病情并展開(kāi)抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療，可延緩病情進(jìn)展，減少病毒傳播。想要盡早確診病情，臨床需要做出及時(shí)、準(zhǔn)確的診斷。WB試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單且靈敏度較高，被認(rèn)為是HIV抗體初篩后的首選補(bǔ)充試驗(yàn)，但需要花費(fèi)較長(zhǎng)的檢測(cè)時(shí)間且價(jià)格較高，很難大范圍推廣[2]。膠體金實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，可迅速得到檢驗(yàn)結(jié)果，但容易受到外界因素影響且特異度較低。近年來(lái)，價(jià)格低廉且診斷準(zhǔn)確率高的酶標(biāo)法被應(yīng)用于HIV抗體檢測(cè)中[3]。本研究將2 000例接受HIV抗體檢測(cè)的人員作為研究對(duì)象，就膠體金實(shí)驗(yàn)與酶標(biāo)法的診斷價(jià)值進(jìn)行對(duì)比分析，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年1月—2023年12月在資溪縣疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)的2 000例患者，其中男性1 249例，女性751例；年齡20～75歲，平均（41.28±7.54）歲；文化程度，小學(xué)/初中1 124例、高中/中專(zhuān)748例、大專(zhuān)及以上128例。本研究經(jīng)資溪縣疾病預(yù)防控制中心批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料完整；年齡≥18歲，具備生活自理能力；認(rèn)知正常，可配合完成研究；簽署知情同意書(shū)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：存在免疫系統(tǒng)疾病，正接受免疫治療者；妊娠期或哺乳期女性；存在精神系統(tǒng)疾病者；合并血液系統(tǒng)疾病者。

1.2 方法

標(biāo)本采集：嚴(yán)格依照臨床技術(shù)要求采集患者5 mL空腹靜脈血，急診或特殊情況也可隨機(jī)采集。使用離心機(jī)以3 000 r/min離心處理15 min，分離血清后備用，盡快按照要求完成檢測(cè)。無(wú)法在24 h內(nèi)完成檢測(cè)的樣本，在2～8 ℃的冰箱內(nèi)保存。

篩查試驗(yàn)：（1）如果HIV篩查試驗(yàn)結(jié)果無(wú)反應(yīng)，則報(bào)告為陰性。（2）在篩查試驗(yàn)有反應(yīng)后，不直接報(bào)告為陽(yáng)性，需依據(jù)實(shí)驗(yàn)室規(guī)定進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。2次檢查結(jié)果均無(wú)反應(yīng)，報(bào)告為HIV陰性；至少1次結(jié)果為有反應(yīng)，報(bào)告為待確定。

對(duì)初篩陽(yáng)性患者分別進(jìn)行膠體金實(shí)驗(yàn)與酶標(biāo)法檢測(cè)。利用膠體金實(shí)驗(yàn)試劑盒以雙抗原夾心法測(cè)定樣本中是否存在HIV抗體，觀(guān)察有無(wú)紅色反應(yīng)線(xiàn)產(chǎn)生，在檢測(cè)區(qū)與指控區(qū)均出現(xiàn)紅色反應(yīng)線(xiàn)為陽(yáng)性。使用酶標(biāo)儀，應(yīng)用HIV抗體診斷試劑盒進(jìn)行酶標(biāo)法檢測(cè)，依據(jù)抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物在酶標(biāo)儀上顯示出的吸光度（optical density，OD）值判斷有無(wú)HIV抗體存在。

WB診斷：未出現(xiàn)特異性條帶，診斷為陰性；有特異性條帶，同時(shí)出現(xiàn)2條及以上的env帶或出現(xiàn)1條及以上的env帶及1條及以上的gag帶或pol帶，診斷為陽(yáng)性。對(duì)于出現(xiàn)特異性條帶但不具備判定陽(yáng)性條件的人員，2～4周后隨訪(fǎng)，進(jìn)行綜合判斷分析，得出結(jié)論。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)

（1）診斷效能。依據(jù)WB結(jié)果，對(duì)膠體金實(shí)驗(yàn)與酶標(biāo)法的診斷一致性進(jìn)行分析，計(jì)算膠體金實(shí)驗(yàn)與酶標(biāo)法的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確率、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值與陰性預(yù)測(cè)值。靈敏度=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）×100%。特異度=真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）×100%。準(zhǔn)確率=（真陽(yáng)性+真陰性）/總?cè)藬?shù)×100%。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陽(yáng)性）×100%。陰性預(yù)測(cè)值=真陰性/（真陰性+假陰性）×100%。（2）陽(yáng)性樣本帶型分布情況。統(tǒng)計(jì)酶標(biāo)法中不同HIV陽(yáng)性樣本的帶型分布情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，行χ2檢驗(yàn)，一致性進(jìn)行Kappa檢驗(yàn)，Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 診斷效能

25例初篩陽(yáng)性樣本中，WB診斷顯示陽(yáng)性14例、陰性11例，見(jiàn)表1。酶標(biāo)法診斷一致性Kappa值=

0.754，Plt;0.05。膠體金實(shí)驗(yàn)診斷一致性Kappa值=

0.116，P=0.561。酶標(biāo)法診斷靈敏度、準(zhǔn)確率、陰性預(yù)測(cè)值高于膠體金實(shí)驗(yàn)（Plt;0.05），見(jiàn)表2。

2.2 陽(yáng)性樣本帶型分布情況

在酶標(biāo)法診斷為真陽(yáng)性的13例患者血清樣本中，gP120、gP160出現(xiàn)率最高，P55出現(xiàn)率最低，見(jiàn)表3。

3 討論

艾滋病是由HIV感染引起的傳染性極強(qiáng)的免疫缺陷性疾病。近年來(lái)艾滋病發(fā)生率持續(xù)上升是非常嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。HIV屬于反轉(zhuǎn)錄科慢病毒屬，進(jìn)入機(jī)體后會(huì)通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄形式形成雙鏈DNA并進(jìn)入到細(xì)胞核中。人體在感染HIV后的1～2周，HIV大量復(fù)制，此時(shí)血液出現(xiàn)高滴度的病毒載量，還會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的高濃度抗原。免疫系統(tǒng)識(shí)別HIV后，機(jī)體會(huì)啟動(dòng)體液免疫與細(xì)胞免疫，HIV抗體水平會(huì)逐漸升高，能在感染后幾周內(nèi)被檢測(cè)出來(lái)[4]。隨著抗原與抗體的結(jié)合，HIV抗原濃度逐漸下降，機(jī)體病毒滴度也會(huì)恢復(fù)至穩(wěn)定水平。在無(wú)任何治療情況下，HIV抗體會(huì)持續(xù)處于較高水平，同時(shí)由于CD4+ T淋巴細(xì)胞水平處于正常范圍內(nèi)，患者可能無(wú)任何癥狀表現(xiàn)。一旦CD4+ T淋巴細(xì)胞水平不足200個(gè)/μL時(shí)，病毒載量會(huì)持續(xù)增加，此時(shí)會(huì)進(jìn)入到艾滋病期，患者會(huì)因免疫下降而感染疾病。HIV會(huì)不斷破壞機(jī)體免疫系統(tǒng)中的輔助T淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致患者對(duì)外界環(huán)境失去抵抗能力，從而感染多種疾病，患者最終可因同時(shí)感染多種疾病而死[5]。HIV有著較多的傳播渠道，存在隱匿的窗口期，目前無(wú)法治愈，但通過(guò)早期治療能幫助患者恢復(fù)免疫功能，還能有效阻止病毒傳播。因此，如何做好疾病的早期診斷成為臨床關(guān)注的重點(diǎn)問(wèn)題之一。實(shí)驗(yàn)室診斷是識(shí)別與監(jiān)測(cè)HIV感染的重要方法。通過(guò)獲取患者血液或體液進(jìn)行檢測(cè)，可及早發(fā)現(xiàn)個(gè)體是否患病，從而展開(kāi)針對(duì)性治療，控制病情進(jìn)展，預(yù)防病毒傳播。

現(xiàn)階段，我國(guó)HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)依據(jù)樣本情況選擇合適的初篩試劑，對(duì)于有反應(yīng)的樣本進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)，根據(jù)2次試驗(yàn)結(jié)果決定是否要展開(kāi)確認(rèn)試驗(yàn)。如果確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果為陰性，但由于存在流行病學(xué)史或確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，需要在后續(xù)進(jìn)行隨訪(fǎng)，再次進(jìn)行檢驗(yàn)；如果確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，則判斷患者存在HIV感

染[6]。隨著臨床對(duì)HIV認(rèn)識(shí)的加深，實(shí)驗(yàn)室診斷方法也在改進(jìn)。WB檢測(cè)HIV抗體的試劑盒在20世紀(jì)80年代面世。WB檢測(cè)有著較高的靈敏度與特異度，目前被用于HIV抗體的確認(rèn)試驗(yàn)中。WB檢測(cè)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，是我國(guó)最常用的抗體確認(rèn)試驗(yàn)。WB有較長(zhǎng)的檢測(cè)窗口期，不利于發(fā)現(xiàn)早期HIV感染，不作為臨床初篩方法[7]。膠體金實(shí)驗(yàn)是以膠體金為追蹤標(biāo)志物進(jìn)行檢驗(yàn)的免疫層析方法，當(dāng)待檢測(cè)樣本中存在HIV或HIV抗原時(shí)，樣本墊的包被區(qū)就會(huì)出現(xiàn)顯色符合物線(xiàn)條。膠體金實(shí)驗(yàn)在質(zhì)控區(qū)顯色情況下才有意義，靈敏度與特異度都相對(duì)較低，更多被用于大數(shù)量、時(shí)間緊迫的檢查中。酶標(biāo)法通過(guò)將待檢血清加入到固體承載物中并與吸附的抗體或抗原反應(yīng)，酶標(biāo)記的抗體會(huì)出現(xiàn)顯色變化，能幫助臨床判斷HIV是否存在，而且顏色的深淺程度還能為臨床定量分析提供指導(dǎo)[8]。在20世紀(jì)80年代，臨床出現(xiàn)了第1代可用于HIV抗體檢測(cè)的酶標(biāo)法試劑，通過(guò)夾心法原理可在患者感染6～8周實(shí)現(xiàn)對(duì)抗體的檢測(cè)，但由于純度不高且?jiàn)A雜抗原，診斷準(zhǔn)確率較低。20世紀(jì)90年代后，臨床出現(xiàn)了第2代酶標(biāo)法試劑，對(duì)包被蛋白進(jìn)行改良后可更好檢測(cè)到HIV抗體，不僅提高了特異度與靈敏度，也可有效縮短檢測(cè)時(shí)間。1994年臨床出現(xiàn)了第3代酶標(biāo)法試劑，利用“三明治”原理進(jìn)一步縮短了獲得結(jié)果的時(shí)間，還進(jìn)一步提高了試劑靈敏度。第4代酶標(biāo)法試劑檢測(cè)方法采用雙抗原夾心與雙抗體夾心，能實(shí)現(xiàn)對(duì)抗原、抗體的一同檢測(cè)，但無(wú)法區(qū)分兩者的陽(yáng)性結(jié)果。這就導(dǎo)致酶標(biāo)法檢測(cè)雖然縮短了檢測(cè)時(shí)間，豐富了檢測(cè)信息，但由于抗體、抗原之間可能互相干擾出現(xiàn)多種假陽(yáng)性情況。故臨床建議使用2種試劑進(jìn)行聯(lián)合檢驗(yàn)，從而減少漏檢情況的出現(xiàn)。目前，臨床已經(jīng)基于化學(xué)發(fā)光技術(shù)開(kāi)發(fā)出了第5代酶標(biāo)法試劑，在充分利用多重流式免疫分析技術(shù)上，通過(guò)對(duì)總抗體與核心抗原進(jìn)行檢測(cè)，可有效完成對(duì)抗體和抗原的區(qū)分，能為臨床提供更加明確的診斷信息，縮短了確診時(shí)間，患者也能盡早接受抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療[9]。

本研究結(jié)果顯示，在WB結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)情況下，酶標(biāo)法診斷一致性Kappa值=0.836，Plt;0.05，提示酶標(biāo)法檢測(cè)有著良好的一致性；酶標(biāo)法診斷靈敏度、準(zhǔn)確率、陰性預(yù)測(cè)值高于膠體金實(shí)驗(yàn)（Plt;0.05），表明酶標(biāo)法有著較高的診斷效能，可減少漏診誤診情況。與膠體金實(shí)驗(yàn)相比，酶標(biāo)法有著較高穩(wěn)定性，在檢測(cè)過(guò)程中不會(huì)受到樣本中溶血及脂血等異常情況的影響，通過(guò)酶標(biāo)儀來(lái)獲得數(shù)據(jù)，能減少認(rèn)為因素對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響，提升診斷準(zhǔn)確率[10]。本研究結(jié)果還顯示，酶標(biāo)法診斷為真陽(yáng)性的13例樣本中，gP120、gP160出現(xiàn)率最高，P55出現(xiàn)率最低，提示該方法能幫助臨床了解抗體類(lèi)型，完成對(duì)疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估，為后續(xù)個(gè)體化治療方案的制定提供指導(dǎo)。

綜上所述，在HIV抗體檢測(cè)中，酶標(biāo)法有著比膠體金實(shí)驗(yàn)更高的診斷效能，能顯示陽(yáng)性樣本帶型分布情況，為患者后續(xù)治療提供精準(zhǔn)、全面的指導(dǎo)。需要注意的是，酶標(biāo)法在檢測(cè)中依舊會(huì)受到人為、環(huán)境、類(lèi)風(fēng)濕因子等干擾，可能導(dǎo)致假陽(yáng)性、假陰性的出現(xiàn)。在檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)質(zhì)控，結(jié)合受檢人員流行病史、HIV感染不同進(jìn)程，選擇合適的方法檢測(cè)，對(duì)反應(yīng)性篩選實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)，以減少誤診、漏診情況。

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