PDE1B 表達(dá)與胃癌預(yù)后和腫瘤微環(huán)境的生物信息學(xué)分析

［摘 要］ 目的：通過生物信息學(xué)方法篩選胃癌中具有差異預(yù)后意義的調(diào)節(jié)性細(xì)胞死亡和衰老基因，分析磷酸二酯酶1（PDE1）B對胃癌患者生存預(yù)后的影響。方法：自TCGA公共數(shù)據(jù)庫下載胃癌基因表達(dá)數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù)，本地數(shù)據(jù)庫中隨機抽取50 例胃癌患者，收集其臨床信息和石蠟樣本，包括胃癌組織和癌旁正常組織。采用R 軟件“l(fā)imma”程序包篩選差異表達(dá)基因（DEGs），單因素COX 分析和Kaplan-Meier 生存分析篩選有預(yù)測生存價值的DEGs，獲取影響胃癌患者生存預(yù)后的交集基因，篩選與臨床病理特征最具關(guān)聯(lián)的基因PDE1B。TCGA 數(shù)據(jù)庫和Kaplan-Meier 生存分析檢測胃癌患者癌旁正常組織和胃癌組織中PDE1B mRNA 表達(dá)水平及其與胃癌患者生存期的關(guān)系，采用基因本體論（GO） 功能和京都基因與基因組百科全書（KEGG） 信號通路富集分析PDE1B 生物學(xué)功能，CIBERSORT 算法、腫瘤免疫數(shù)據(jù)庫（TISIDB） 和GSCA 在線網(wǎng)站分析PDE1B 與腫瘤微環(huán)境、免疫特征分子和藥物敏感性的相關(guān)性。實時熒光定量PCR （RT-qPCR） 法檢測胃癌患者胃癌組織和癌旁正常組織中PDE1B mRNA 表達(dá)水平。結(jié)果：共篩選 716 個 DEGs，其中 505 個 DEGs 表達(dá)上調(diào) （Plt;0. 05），211 個DEGs 表達(dá)下調(diào)（Plt;0. 05），獲得10 個影響生存預(yù)后的交集基因，PDE1B mRNA 表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理特征關(guān)系最為密切，其與年齡、腫瘤分級、腫瘤分期和腫瘤T、N 及M 期有關(guān)聯(lián)（Plt;0. 05）； 與G1-G2、Stage Ⅰ 、T1-T2、N0 和M0 期胃癌患者比較， G3-G4、StageⅡ -Ⅳ 、T3-T4、N1-N3 和M1 分期胃癌患者胃癌組織中PDE1B mRNA 表達(dá)水平均明顯升高（Plt;0. 05）。與癌旁正常組織比較，胃癌患者胃癌組織中PDE1B mRNA 表達(dá)水平明顯降低（Plt;0. 05）；與PDE1B低表達(dá)胃癌患者比較，PDE1B 高表達(dá)胃癌患者總體生存率明顯降低（Plt;0. 01）。PDE1B 表達(dá)、年齡和腫瘤分期是胃癌患者預(yù)后的危險因素（Plt;0. 05）。在調(diào)整了性別、年齡、腫瘤分級和腫瘤分期后，PDE1B 表達(dá)是影響胃癌患者預(yù)后的獨立危險因素（Plt;0. 05）。PDE1B 主要富集于免疫球蛋白產(chǎn)生、鈣離子轉(zhuǎn)運、第二信使介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等生物過程（BP），T 淋巴細(xì)胞受體復(fù)合體、細(xì)胞膜信號受體復(fù)合體和含膠原蛋白的細(xì)胞外基質(zhì)等細(xì)胞成分（CC），抗原結(jié)合、糖胺聚糖結(jié)合和細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分等分子功能（MF）；PDE1B 主要參與了神經(jīng)活性配體-受體相互作用、鈣信號通路、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP） -蛋白激酶G （PKG） 信號通路及細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體的相互作用等途徑。PDE1B 與調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞（r=0. 488）、髓源性抑制細(xì)胞（r=0. 474） 和巨噬細(xì)胞（r=0. 617） 呈正相關(guān)關(guān)系（Plt;0. 01）；與PDE1B 低表達(dá)胃癌患者比較，PDE1B 高表達(dá)胃癌患者促進(jìn)腫瘤的調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和M2 型巨噬細(xì)胞浸潤均明顯增加（Plt;0. 05）。PDE1B mRNA 表達(dá)水平與免疫抑制劑轉(zhuǎn)化生長因子β （TGF-β） 1 （r=0. 535）、集落刺激因子1 受體（CSF1R）（r=0. 519）、免疫激活劑外核苷三磷酸二磷酸水解酶1 （ENTPD1）（r=0. 593） 和CXC 趨化因子配體12 （CXCL12）（r=0. 646） 呈正相關(guān)關(guān)系（Plt;0. 01）。PDE1B高表達(dá)的胃癌組織對氟尿嘧啶（-0. 3癌患者胃癌組織中PDE1B mRNA 表達(dá)水平明顯升高（Plt;0. 01）。 結(jié)論：PDE1B是胃癌患者預(yù)后的獨立危險因素，可作為胃癌預(yù)后不良的有效指標(biāo)。

［關(guān)鍵詞］ 胃腫瘤； 生存預(yù)后； 磷酸二酯酶1B； 腫瘤微環(huán)境； 藥物敏感性

［中圖分類號］ R735. 2 ［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ A

胃癌是全球第五大常見癌癥及第四大癌癥死亡病因，嚴(yán)重威脅人類健康［1］。近些年來，中國胃癌患者5 年生存率由27. 4% 提高至35. 1%， 但仍顯著低于韓國（75. 4%） 和日本（81. 0%）， 因此，如何繼續(xù)提高胃癌生存率是當(dāng)前研究的重點［2-3］。

調(diào)節(jié)性細(xì)胞死亡（regulated cell death， RCD）和衰老與腫瘤發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)聯(lián)。RCD 是指受特定基因調(diào)控的細(xì)胞為了維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)選擇自主有序的死亡方式，主要包括細(xì)胞凋亡、自噬、鐵死亡和壞死性凋亡等途徑。近年來“自噬受損”被納入衰老的新標(biāo)志［4-5］。衰老的細(xì)胞可以通過旁分泌衰老相關(guān)分泌表型（senescence-associatedsecretory phenotype，SASP） 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移［6］。本研究基于生物信息學(xué)分析，篩選胃癌中差異表達(dá)且具有預(yù)后意義的RCD 和衰老相關(guān)基因，分析其與臨床性狀的關(guān)系及磷酸二酯酶1（phosphodiesterase 1，PDE1） B 與腫瘤微環(huán)境和免疫治療的關(guān)系，為胃癌患者的個體化治療提供新的方案。

1 資料與方法

1. 1 公共數(shù)據(jù)庫資料 于腫瘤基因組圖譜 （Thecancer Genome Atlas， TCGA） 數(shù)據(jù)庫（https：//portal. gdc. cancer. gov/） 中按順序篩選“stomach”“TCGA-STAD”“transcriptome profiling”“GeneExpression Quantification”和“clinical”，并依次下載胃癌轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)及對應(yīng)的臨床數(shù)據(jù)，包含375 例胃癌樣本和32 例正常樣本。

1. 2 本地數(shù)據(jù)庫資料和實驗樣本 本地數(shù)據(jù)庫資料來源于本課題組自2007 年起建立的“ 石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院胃癌患者隨訪數(shù)據(jù)庫”，采取打電話和上門訪問等方式進(jìn)行患者隨訪， 截至2023 年10 月，隨訪時間共計16 年。納入標(biāo)準(zhǔn)：①接受胃切除手術(shù)；②經(jīng)組織病理學(xué)診斷確診為胃癌；③術(shù)前未接受過放化療及其他輔助治療。本研究從本地數(shù)據(jù)庫中采用簡單隨機抽樣方法抽取50 例胃癌患者，收集其臨床信息和石蠟樣本，包含胃癌組織和癌旁正常組織（距癌組織切緣5 cm 或以上）。本研究由石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（倫理審批號：2018-067-02）。

1. 3 RCD 和衰老相關(guān)基因的獲取及差異分析由Ferrdb 數(shù)據(jù)庫（http：//www. zhounan. org/ferrdb）、HADb 數(shù)據(jù)庫（http：//www. autophagy.lu/clustering/） 和既往文獻(xiàn)［7-8］ 中共收集了4 392 個基因，包括295 個鐵死亡、19 個NETosis 相關(guān)死亡、1 972 個壞死性凋亡、57 個細(xì)胞焦亡、222 個自噬和18 個擠壓死亡相關(guān)基因及1 809 個衰老相關(guān)基因。使用R 軟件“l(fā)imma” 程序包標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)，并篩選胃癌組織和癌旁正常組織樣本中的差異表達(dá)基因（differentially expressed genes，DEGs）。篩選標(biāo)準(zhǔn)為|log2FC| gt;1 且假陽性率（1 discoveryrate，F(xiàn)DR） lt;0. 05。

1. 4 雙重預(yù)后分析 使用R軟件“l(fā)imma”程序包將患者的生存狀態(tài)和生存時間與DEGs 表達(dá)量進(jìn)行合并。R 軟件“survival” 和“survminer” 程序包對合并數(shù)據(jù)集分別進(jìn)行Kaplan-Meier 生存分析和單因素COX 分析，以Plt;0. 01 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。R 軟件“VennDiagram”程序包對已獲取的基因取交集，獲取影響胃癌患者生存預(yù)后的交集基因。

1. 5 目的基因篩選 基于TCGA數(shù)據(jù)庫提供的胃癌患者臨床資料，使用R 軟件“l(fā)imma”程序包分析交集基因表達(dá)水平在不同臨床病理特征分組間的差異。根據(jù)顯著性基因的數(shù)量，篩選與臨床病理特征最具關(guān)聯(lián)性的基因， 為PDE1B。TCGA 數(shù)據(jù)庫和Kaplan-Meier 生存分析檢測胃癌患者胃癌組織和癌旁正常組織中PDE1B mRNA 表達(dá)水平及其與胃癌患者生存期的關(guān)系。

1. 6 PDE1B 相 關(guān) 通 路 富 集 分 析 使 用 R 軟 件“org. Hs. eg. db” 和“clusterProfiler” 程序包對PDE1B 進(jìn)行基因本體論（Gene Ontology， GO）功能和京都基因與基因組百科全書（KyotoEncyclopedia of Genes and Genomes，KEGG） 信號通路富集分析，分析PDE1B 可能涉及的分子機制和生物學(xué)功能，以Plt;0. 05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

1. 7 腫瘤微環(huán)境、免疫特征和藥物敏感性分析采用CIBERSORT 算法計算胃癌組織中PDE1B高和低表達(dá)胃癌患者腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（tumorinfiltrating lymphocytes，TILs） 的相對豐度，迭代次數(shù)為1 000 次，以Plt;0. 05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。使用腫瘤免疫數(shù)據(jù)庫（Integrated Repository Portalfor Tumor-immune System Interactions，TISIDB）（http：//cis. hku. hk/TISIDB/）分析胃癌樣本中PDE1B 與TILs、免疫抑制劑和免疫激活劑的相關(guān)性。篩選條件： ① 登錄在線網(wǎng)站， 選擇“GeneSymbol” 和 “PDE1B” 輸 入 查 詢； ②在“Lymphocyte” 和“Immunomdulator” 模塊， 選擇“STAD” 并尋找相關(guān)分子； ③ 相關(guān)系數(shù)（r） gt;0為正相關(guān)，rlt;0 為負(fù)相關(guān)，以Plt;0. 05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。利用基因集癌癥分析平臺（Gene SetCancer Analysis， GSCA） 在線網(wǎng)站（https：//guolab. wchscu. cn/GSCA/）分析PDE1B 對藥物的敏感性。篩選條件：選擇“Drug”和“CTRP drugsensitivity and expression correlation”。

1. 8 實 時 熒 光 定 量 PCR（real-time fluorescencequantitative PCR，RT-qPCR） 法 檢 測 PDE1BmRNA表達(dá)水平 使用 TRIzol試劑提取癌旁正常組織和胃癌石蠟樣本中總RNA， NanoDrop 2000分光光度計（美國Thermo Scientific 公司） 檢測RNA 濃度和質(zhì)量。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京康為世紀(jì)公司） 將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用RT-qPCR試劑盒（北京康為世紀(jì)公司） 進(jìn)行RT-qPCR 反應(yīng)，按照試劑盒說明書操作。以甘油醛-3- 磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH） 為內(nèi)參，每組設(shè)置3 個復(fù)孔，采用2-ΔΔCt法計算目的基因表達(dá)水平。引物由生工生物工程（上海） 股份有限公司合成設(shè)計。引物序列：GAPDHF 5'-GTCTCCTCTGACTTCAACAGCG-3'，R 5'-ACCACCCTGTTGCTGTAGCCAA-3'； PDE1B F5'-CTGCGCTACATGGTGAAGCA-3'， R 5'-CAAGATTTGCCGTGTCTCATCTA-3'。

1. 9 統(tǒng) 計 學(xué) 分 析 采 用 SPSS 26. 0、 GraphPadPrism 8. 0 和R 4. 3. 2 統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析并繪制圖像。胃癌患者胃癌組織和癌旁正常組織中PDE1B mRNA 表達(dá)水平比較采用Wilcoxon 秩和檢驗，胃癌組織不同病理特征組間PDE1B 表達(dá)水平比較采用Wilcoxon 和Kruskal-Wallis H 檢驗，PDE1B與免疫細(xì)胞和免疫因子的相關(guān)性采用Spearman 相關(guān)性分析。以Plt;0. 05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2. 1 胃 癌 差 異 預(yù) 后 基 因 篩 選 共 篩 選 716 個DEGs， 其中505 個DEGs 表達(dá)上調(diào)（Plt;0. 05），211 個DEGs 表達(dá)下調(diào)（Plt;0. 05）。對DEGs 分別進(jìn)行單因素COX 分析和Kaplan-Meier 生存分析，獲得36 和27 個影響生存預(yù)后的基因（Plt;0. 01），二者取交集后共獲得半胱氨酸雙加氧酶1（cysteine dioxygenase type CDO1）、脂 氧 合 酶（lipoxygenase， LOX）、A 激酶PRKA 錨定蛋白12（A kinase anchor protein 12， AKAP12）、γ-谷氨?；D(zhuǎn)氨酶5 （gamma-glutamyltransferase 5，GGT5）、生長激素受體（growth hormone receptor，GHR）、PDE1B、多功能蛋白聚糖（recombinant versican，VCAN）、血小板衍生生長因子受體β （plateletderived growth factor receptor beta，PDGFRB）、絲氨酸蛋白酶抑制劑家族E 成員1 （serine proteaseinhibitor family E member 1，SERPINE1） 和跨膜蛋 白 200A （transmembrane protein 200A，TMEM200A） 共10 個交集基因。見圖1。

2. 2 PDE1B mRNA 表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系 10個交集基因中PDE1B mRNA表達(dá)水平與臨床病理特征關(guān)系最為密切，其與患者年齡、腫瘤分級、腫瘤分期和腫瘤T、N 及M 期有關(guān)聯(lián)（Plt;0. 05）。與G1-G2、Stage Ⅰ、T1-T2、N0和M0 期胃癌患者比較，G3-G4、StageⅡ-Ⅳ、T3-T4、N1-N3 和M1 期胃癌患者胃癌組織中PDE1B mRNA表達(dá)水平均明顯升高（Plt;0. 05）。見表1 和圖2。

2. 3 在胃癌組織中PDE1B高表達(dá)患者生存率 差異分析和配對差異分析結(jié)果顯示：與癌旁正常組織比較，胃癌患者胃癌組織中PDE1B mRNA 表達(dá)水平明顯降低（Plt;0. 05）。生存分析結(jié)果顯示： 與PDE1B 低表達(dá)胃癌患者比較，PDE1B 高表達(dá)胃癌患者總體生存率明顯降低（Plt;0. 01）。見圖3。

2. 4 胃癌患者生存預(yù)后的危險因素 單因素COX分析結(jié)果顯示： PDE1B 表達(dá)、年齡和腫瘤分期是胃癌患者預(yù)后的危險因素（Plt;0. 05）。在調(diào)整了性別、年齡、腫瘤分級和腫瘤分期后， PDE1B 表達(dá)是影響胃癌患者預(yù)后的獨立危險因素（Plt;0. 05）。見圖4。

2. 5 PDE1B的生物學(xué)功能 GO功能富集分析結(jié)果顯示： PDE1B 主要富集于免疫球蛋白產(chǎn)生、鈣離子轉(zhuǎn)運、第二信使介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等生物過程（biological process，BP），T 淋巴細(xì)胞受體復(fù)合體、細(xì)胞膜信號受體復(fù)合體，和含膠原蛋白的細(xì)胞外基質(zhì)等細(xì)胞成分（cellular component， CC）， 抗原結(jié)合、糖胺聚糖結(jié)合和細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分等分子功能（molecular function， MF）。KEGG 信號通路富集分析結(jié)果顯示： PDE1B 主要參與了神經(jīng)活性配體- 受體相互作用、鈣信號通路、環(huán)磷酸鳥苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP） -蛋白激酶G （protein kinase G，PKG） 信號通路及細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體的相互作用等途徑。見圖5 和6。

2. 6 PDE1B mRNA表達(dá)水平與免疫微環(huán)境相關(guān)性 TISIDB在線網(wǎng)站分析結(jié)果顯示：PDE1B與調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（ r=0. 488）、 髓源性抑制細(xì)胞（ r=0. 474） 和巨噬細(xì)胞（ r=0. 617） 呈正相關(guān)關(guān)系（ Plt;0. 01）。CIBERSORT 法分析結(jié)果顯示：與PDE1B低表達(dá)胃癌患者比較， PDE1B 高表達(dá)胃癌患者促進(jìn)腫瘤的調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和M2 型巨噬細(xì)胞浸潤均明顯增加（Plt;0. 05）。見圖7 和8。

2. 7 PDE1B mRNA 表達(dá)水平與免疫抑制劑和藥物敏感性相關(guān)性 PDE1B mRNA表達(dá)水平與免疫抑制劑轉(zhuǎn)化生長因子β （transforming growth factor-β，TGF-β）1（ r=0. 535）、 集落刺激因子1受體（ colonystimulating factor-1 receptor，CSF1R）（r=0. 519）、免疫激活劑外核苷三磷酸二磷酸水解酶1（ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1，ENTPD1）（r=0. 593） 和CXC 趨化因子配體12（CXC chemokine ligand 12， CXCL12）（r=0. 646）呈正相關(guān)關(guān)系（Plt;0. 01）。PDE1B 高表達(dá)胃癌患者胃癌組織對氟尿嘧啶（-0. 3lt;r lt;-0. 1）、甲氨蝶呤（-0. 3lt;r lt;-0. 1）和地西他濱（-0. 3lt;r lt;-0. 1）等藥物較為敏感（Plt;0. 05）。見圖9 和10。

2. 8 PDE1B mRNA 表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理特征相關(guān)性 與癌旁正常組織比較，胃癌患者胃癌組織中PDE1B mRNA 表達(dá)水平明顯降低（Plt;0. 01）。與PDE1B 低表達(dá)胃癌患者比較， PDE1B高表達(dá)胃癌患者總體生存率明顯降低（Plt;0. 05）。與T1-T2 期胃癌患者比較， 腫瘤T3-T4 期胃癌患者胃癌組織中PDE1B mRNA 表達(dá)水平明顯升高（Plt;0. 01）。見圖11。

3 討 論

早期胃癌的診斷篩查并不困難，但因其晚期治療效果不佳，因此預(yù)后很差［9］。目前胃癌臨床綜合治療主要為手術(shù)及術(shù)后放化療，其效果并不理想，含鉑類藥物一線化療方案對治療進(jìn)展期胃癌已達(dá)到療效瓶頸［10-12］。因此，開發(fā)新的治療方法和藥物仍是當(dāng)前研究的重點。

本研究結(jié)果顯示： PDE1B 胃癌患者與臨床病理特征有密切關(guān)聯(lián)，與癌旁正常組織比較，胃癌患者胃癌組織中PDE1B mRNA 表達(dá)下調(diào)，與腎透明細(xì)胞癌［13］ 的報道結(jié)果一致。在不同分期和分級的胃癌樣本中，晚期和發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的胃癌組織中PDE1B mRNA 表達(dá)水平明顯升高，PDE1B 是胃癌患者預(yù)后的獨立危險因素。

PDE1B 是PDE1 的1 種亞型， 其可被細(xì)胞內(nèi)鈣/鈣調(diào)蛋白激活， 是一種雙底物環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate， cAMP） 和cGMP 酯酶［14］。研究［13］ 顯示：PDE1B 可以促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡。但PDE1B在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用尚不清楚。研究［15-16］ 顯示： 細(xì)胞內(nèi)cAMP/cGMP 信號通路的干擾與腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)聯(lián)。cGMP 表達(dá)上調(diào)可抑制腫瘤的生長［17-18］。YAMASHITA 等［19］ 發(fā)現(xiàn)： cGMP 可通過抑制線粒體功能抑制胰腺導(dǎo)管腺癌的腫瘤干性。PDE1B 對cGMP 的親和力高于cAMP［20］。本研究結(jié)果顯示：PDE1B 參與了cGMP-PKG 通路，提示PDE1B 可能通過降低細(xì)胞內(nèi)cGMP 水平，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，形成負(fù)向生存功能導(dǎo)致患者生存時間縮短。

腫瘤免疫微環(huán)境的變化對癌癥的發(fā)生發(fā)展具有重要作用，腫瘤免疫微環(huán)境可能與胃癌患者的“生存功能” 有關(guān)。本研究結(jié)果顯示： PDE1B 高表達(dá)與M2 巨噬細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的高浸潤水平有關(guān)。粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子促使單核細(xì)胞分化轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞后，PDE1B mRNA 表達(dá)水平明顯升高，并參與病理性血管重塑［21］。腫瘤免疫微環(huán)境中M2 巨噬細(xì)胞百分率升高會損害CD8+T 淋巴細(xì)胞的抗腫瘤免疫功能，促使腫瘤發(fā)生免疫逃逸［22］。本研究結(jié)果顯示：PDE1B mRNA 表達(dá)水平與免疫激活劑CXCL12 和ENTPD1 水平呈正相關(guān)關(guān)系。CXCL12 是C-X-C 趨化因子受體4 （C-X-C chemokine receptor type 4，CXCR4） 唯一的配體， 能夠促進(jìn)血管生成， 減少細(xì)胞凋亡和腫瘤壞死［23］。CXCL12/CXCR4 軸不僅可以驅(qū)動卵巢癌細(xì)胞的增殖和侵襲，還能通過觸發(fā)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程誘導(dǎo)卵巢癌的順鉑耐藥［24-25］。研究［26］ 顯示：CXCL12 通過調(diào)控CXCR4/非典型趨化因子受體3（ atypical chemokine receptor 3， ACKR3）促使M2 型丙酮酸激酶（pyruvate kinase isozymetype M2， PKM2） 轉(zhuǎn)化為低酶活性的二聚體， 促進(jìn)磷酸戊糖途徑或有氧糖酵解（Warburg 效應(yīng)） 過程， 從而滿足腫瘤細(xì)胞的高能量需求。ENTPD1既可由免疫細(xì)胞表達(dá)，也可由部分腫瘤細(xì)胞表達(dá)，通過結(jié)合細(xì)胞外腺嘌呤核苷三磷酸（adenosinetriphosphate，ATP），將其轉(zhuǎn)化為細(xì)胞外腺苷從而發(fā)揮抑制免疫應(yīng)答的作用［27］。腫瘤微環(huán)境中ENTPD1 高表達(dá)與CD8+T 淋巴細(xì)胞耗竭有關(guān)［28］。調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞可能在腫瘤微環(huán)境中上調(diào)ENTPD1，從而導(dǎo)致免疫抑制和促進(jìn)腫瘤生長［29］。PDE1B 表達(dá)與免疫細(xì)胞和免疫分子呈正相關(guān)關(guān)系，提示PDE1B 積極參與腫瘤免疫微環(huán)境的形成。PDE1B 表達(dá)可能參與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞在微環(huán)境中的疏密分布， 其中部分免疫細(xì)胞也可能具有調(diào)節(jié)PDE1B 表達(dá)的能力，PDE1B 分子與相關(guān)免疫細(xì)胞互相作用，與部分細(xì)胞形成正反饋調(diào)節(jié)，而與另一部分細(xì)胞形成負(fù)反饋調(diào)節(jié)。因此， PDE1B 很可能是腫瘤微環(huán)境中的重要成員，通過參與調(diào)節(jié)腫瘤免疫微環(huán)境和促進(jìn)血管生成影響胃癌的發(fā)生發(fā)展。

本研究結(jié)果顯示： PDE1B 高表達(dá)的腫瘤組織對氟尿嘧啶、甲氨蝶呤和地西他濱等藥物較為敏感，且PDE1B 高表達(dá)對胃癌患者生存時間具有負(fù)向生存功能， PDE1B 可能成為胃癌免疫治療潛在的靶向性分子。

綜上所述， PDE1B 可獨立影響胃癌患者的不良生存預(yù)后， 胃癌組織中PDE1B 高表達(dá)與M2 巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞等免疫激活分子ENTPD1 及CXCL12 的高浸潤水平有關(guān)， PDE1B 可能參與腫瘤微環(huán)境的改變，而PDE1B 高表達(dá)的胃癌組織對氟尿嘧啶和甲氨蝶呤等藥物敏感。

利益沖突聲明：所有作者聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：楊希參與研究設(shè)計、數(shù)據(jù)分析和論文撰寫，袁琴和楊蘭參與論文撰寫指導(dǎo)，張文杰參與論文審校。

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