雙酚A 對子宮內膜間充質干/基質細胞干性的影響及人臍帶間充質干細胞源性上清對細胞損傷的改善作用

［摘 要］ 目的：探討雙酚A（BPA）對子宮內膜間充質干/基質細胞（eMSCs）增殖活性和干性特征的影響，闡明人臍帶間充質干細胞源性上清（hUCMSC-Sup）對細胞損傷的改善作用。方法：體外培養eMSCs，以0、200、250、300、350、400 μmol·L－1 BPA 處理。將eMSCs 分為對照組（僅培養液培養）、BPA 組（含200 μmol·L－1 BPA 的等體積培養液培養）、BPA+hUCMSC-Sup 組（含200 μmol·L－1 BPA 及50% 體積比hUCMSC-Sup 的等體積培養液培養） 和BPA+CHIR-99021 組（含200 μmol·L－1 BPA 及10 μmol·L－1 CHIR-99021 的等體積培養液培養），使用干細胞成球培養液培養eMSCs 干細胞球，其余細胞均使用DMEM/F12 完全培養基培養。噻唑藍（MTT） 法檢測各組eMSCs 存活率，球體形成實驗檢測各組eMSCs干細胞球數和直徑，CCK-8法檢測各組eMSCs干細胞球中細胞增殖活性，流式細胞術檢測各組eMSCs中CD73+細胞百分率，實時熒光定量PCR（RT-qPCR）法檢測各組eMSCs中性別決定區Y框蛋白2（Sox2）、八聚體結合轉錄因子4 （Oct4） 和Nanog mRNA 表達水平，Western blotting 法檢測各組eMSCs中β-連環蛋白（β-catenin）蛋白表達水平。結果：MTT法檢測，BPA作用24和48 h，與0 μmo·l L－1 BPA 組比較，200、250、300、350 和400 μmol·L－1 BPA 組eMSCs 存活率均明顯降低（Plt;0. 01）。藥物作用24 h時，與對照組比較，BPA組eMSCs存活率明顯降低（Plt;0. 01）；藥物作用48 h時，與對照組比較，BPA 組eMSCs 存活率明顯降低（Plt;0. 01）；與BPA 組比較，BPA+hUCMSC-Sup 組eMSCs 存活率明顯升高（Plt;0. 05）。球體形成實驗檢測，與培養3 d 組比較，培養4 和5 d 組eMSCs 干細胞球數和直徑均明顯增加（Plt;0. 05 或Plt;0. 01）；與對照組比較，培養48 h 時BPA 組eMSCs 干細胞球數和直徑均明顯減少（Plt;0. 05或Plt;0. 01）。CCK-8法檢測，處理24和48 h時，與對照組比較，BPA 組eMSCs 干細胞球中細胞增殖活性均明顯降低（Plt;0. 01）；與BPA組比較，BPA+hUCMSC-Sup組eMSCs干細胞球中細胞增殖活性均明顯升高（Plt;0. 01）。流式細胞術檢測，與對照組比較，BPA 組eMSCs中CD73+細胞百分率明顯降低（Plt;0. 01）；與BPA 組比較，BPA+hUCMSC-Sup組eMSCs中CD73+細胞百分率明顯升高（Plt;0. 01）。RT-qPCR法檢測，與對照組比較，BPA組eMSCs中Sox2、Oct4和Nanog mRNA表達水平均明顯降低（Plt;0. 01）；與BPA 組比較，BPA+hUCMSC-Sup組和BPA+CHIR-99021組eMSCs中Sox2、Oct4及NanogmRNA 表達水平均明顯升高（Plt;0. 01）。……