人參組織培養物護膚品緊致抗皺功效的研究

本研究綜合了人體體驗功效評價、斑馬魚功效評價以及生物實驗功效評價三類評價方法，結合主觀感受滿意度調研結果，對含人參組織培養物的柔膚水、精華液及面霜產品的緊致、抗皺功效進行研究。首先通過對篩選出的30位平均年齡38.8歲的體驗者進行使用產品前后皮膚彈性R2值、面部紋理數量、眼周皺紋數量改善效果測試及數據分析。結果顯示，體驗者使用4周各指標平均改善率為20.81%、8.40%、13.8%，顯著性分析p值＜0.01。同時對精華液進行自由基DPPH清除、彈性蛋白酶抑制以及斑馬魚抗皺功效實驗；結果均顯示產品具有清除DPPH自由基、抑制彈性蛋白酶活性、促進斑馬魚體內膠原蛋白生成基因表達的作用，各實驗數據顯著性分析p值＜0.05，表示產品具有顯著的緊致、抗皺功效。

關鍵詞：人參組織培養物；化妝品功效評價；皮膚彈性；皺紋；紋理；緊致；抗皺

人參作為珍貴的美容護膚化妝品原料植物，含有人參皂苷、多糖等功效活性成分，不僅能夠提高皮膚細胞抗氧化酶活性、增加膠原蛋白表達、減緩皮膚皺紋產生，還能減少紫外線對細胞損傷，并且能抑制酪氨酸酶活性，達到美白作用[1]。

人參組織培養物是指從野生山參的部分組織中分離出來，以無菌狀態導入培養反應器內，誘導出愈傷組織、分化培養形成不定根；再通過篩選種源、三級培養、清潔、干燥、提取等步驟制得；利用生物反應器生產人參不定根， 可以使人參生產不受氣候、病蟲害等外界環境影響，且具有規模大、質量穩定、生產周期短等優點[2]。母本野山參年限越長，其含有的人參皂苷、人參多糖等生物活性成分也就更加豐富。

人參中的皂苷成分主要包括原型人參皂苷和稀有人參皂苷2類，天然的稀有人參皂苷主要由原型人參皂苷經過生物活性酶轉化或代謝得到次生衍生物；隨著人參生長年限增長，而逐漸富集積累；目前已經發現了多種稀有人參皂苷，其中包括Rg3、Rh2、Rg5、Rk1、Rk3、Rk2、Rh1、Rh3、CK、Rg6、aPPD等，與原型人參皂苷相比，稀有人參皂苷的生物活性更高，也更容易被人體吸收利用[3]。

化妝品的功效評價方法目前主要包括人體功效實驗、體外的生物化學實驗、動物實驗、斑馬魚實驗等測評方法。生物化學實驗有著簡單快捷，重復性好等優勢，動物實驗存在種間差異及倫理問題等；在體的消費者主觀使用評價是化妝品功效評價的主要方式之一，但易受消費者主觀因素的影響[4]。化妝品在體功效測試能更直接地反映出化妝品的實際使用效果，可作為化妝品的功效評價及宣稱最有參wM8bgGb3JUeBzzAqxPElU9p3X/KkWPxS08GRZWhm8QM=考價值的信息[5]。因此化妝品功效需要進行綜合、系統評價，以提高了化妝品功效評價的全面性、準確性和可靠性。

Part 1實驗部分

1.1 主要材料、試劑及儀器

潔面乳、含人參組織培養物的護膚樣品（包括柔膚水、精華液、面霜樣品），空白組護膚樣品（人參組織培養物用純化水代替）自制；除潔面乳外，柔膚水、精華、面霜功效均為保濕、緊致、抗皺。人參組織培養物（山東安然納米實業發展有限公司）。

皮膚彈性測試儀（Cutometer dual MPA580，德國CK 公司）和VISIA 面部圖像分析儀（Canfield公司，美國）。

1.2 實驗方法

1.2.1 體驗者篩選

體驗者知悉本次測試全部內容，且自愿參加體驗測試并簽閱知情同意書。知情同意書中，明確說明了參與測試相關的可能存在風險、益處、權利及責任的所有必要信息內容。

（1）納入標準

30位－40位年齡在30歲－55歲具有健康皮膚的女性；體驗者面部眼周或額頭有明顯皺紋，其在功效測試期間能夠保持正常的生活作息規律；應具有一定語言表達能力，可閱讀并理解知情同意書的內容，以便真實反饋樣品使用感受；在測試期間同意停止使用其他具有抗皺功效的護理或保健產品。

（2）排除標準

皮膚極度敏感、過敏體質、有皮膚疾病或有嚴重其它疾病而可能會影響測試結果判斷的體驗者；處于妊娠、哺乳、備孕期等特殊期的女性；近期有使用過可能對測試結果有影響的美容產品、不能堅持并配合定期數據采集等其他不適合參加的體驗者。

1.2.2 測試及評價方法

體驗者每天早晚各使用一次樣品，按照潔面乳、水、精華液、面霜的順序進行皮膚護理，其中左側臉頰及眼周使用的水、精華液、面霜中添加人參組織培養物，右側臉頰及眼周使用空白組樣品（不含人參組織培養物）；共體驗測試8周，分別在0、4、8周各回訪一次，進行測試VISIA面部圖像分析測試及皮膚彈性測試。

使用VISIA圖像分析儀主要測試分析體驗者使用產品前后面部紋理及眼周細紋特征數量的變化趨勢，數值越小，表明皺紋及紋理越少，皮膚越細膩，則效果也就越好。

使用皮膚彈性測試儀測量臉頰的皮膚總彈性參數值R2，連續測試3次取平均值；其表示皮膚的回彈量與皮膚的最大拉伸量之比，其被認為是最接近皮膚真實彈力狀態的參數值，比值越大（極限最大值為1），表明皮膚彈性越好[6]。

測試條件：體驗者使用統一的潔面產品對面部進行清潔，然后在測試環境中穩定靜坐30 分鐘，期間保持心態放松，盡量避免不必要的活動。隨后研究者分別對體驗者臉部兩側臉頰、眼周皮膚進行測試，測試全程在溫度為（22.0±2.0）℃，相對濕度為50%±10%的恒溫恒濕環境中進行。

1.2.3 DPPH自由基清除率

采用紫外-可見分光光度法同時對50%濃度的實驗組精華液及空白對照組進行DPPH自由基清除檢測實驗；得到精華液樣品的DPPH自由基清除率[7]。

1.2.4 彈性蛋白酶抑制率

采用紫外-可見分光光度法同時對50%濃度的實驗組精華液及空白對照組進行彈性蛋白酶抑制檢測實驗；得到精華液樣品的彈性蛋白酶抑制率的實驗數據[8]。

1.2.5 斑馬魚實驗測試

將0.5%濃度的精華液實驗組和不添加精華液的空白對照組，給予30～90尾AB系斑馬魚，28℃條件下孵育24小時；提取實驗組和對照組斑馬魚的RNA，檢測實驗組精華液促進斑馬魚體內I型膠原蛋白基因（collala基因）相對表達量[9]。

Part 2結果與討論

本研究共篩選出33名年齡在30歲至50歲女性體驗者，最終有效體驗者30例，平均年齡38.8歲。使用產品前，測試體驗者左右臉皮膚各項指標數據對比均無顯著性差異（p>0.05），排除左右臉皮膚初始狀態影響。

2.1 皮膚彈性測試

使用產品前后體驗者左右臉頰皮膚彈性變化見圖1。使用產品后，左臉頰處的皮膚彈性R2平均值呈上升趨勢。皮膚彈性在第4周顯著提升至0.599 （p<0.001）；使用產品8周后，臉頰彈性R2平均值與第0周相比，其變化率為20.81%，具有極顯著性改變（p<0.001），右側對照組皮膚彈性提升效果不太明顯。說明人參組織培養物具有顯著提升皮膚的彈性，緊致肌膚的效果。

皮膚彈性測試儀得到的皮膚總彈性值R2，用于表征皮膚彈性狀態，已有廣泛的應用及良好的市場認可度，可客觀評價皮膚緊致功效[8]。

2.2 皮膚VISIA測試

使用產品前后體驗者臉部皮膚紋理變化見圖2；眼周皺紋變化見圖3。使用產品后，臉部的皮膚紋理及眼周皺紋的平均值均呈下降趨勢。臉部紋理及眼周皺紋在第4周有顯著降低，臉部紋理降低率為8.40% （p<0.01）；眼周皺紋降低率為13.8% （p<0.01）；使用產品8周后，臉部紋理降低率為19.38%，眼周皺紋降低率為20.47%，均具有極顯著性改變（p<0.001），說明含有人參組織培養物的護膚品具有顯著平滑紋理、減少眼周可見皺紋的作用。與右側對照組相比，可見人參組織培養物在平滑紋理及減少眼周可見皺紋方面均具有較明顯的提升效果。

VISIA面部圖像分析具有非常好的可視化效果，同時能夠精確的定量的診斷分析皮膚檢測項目狀態；皮膚的紋理及皺紋通過使用前后圖像對比分析，非常直觀地反映出產品給皮膚帶來的變化。

2.3 生物實驗功效測試

通過紫外分光光度計法測試50%含有人參組織培養物精華液產品對自由基DPPH自由基清除率為27.5%±0.11%以及彈性蛋白酶抑制率12.8%±0.66%；并與空白值比較，進行顯著性差異p值分析，統計分析結果顯示p＜0.05；測試結果具有顯著意義；測試對比圖見圖4、圖5。通過生物實驗功效測試結果說明產品也具有較顯著的抗氧化、緊致、抗皺效果。

生物實驗室評價方法是通過測試產品對細胞衰老因子自由基清除、彈性蛋白酶抑制作用，間接證明產品具有皮膚緊致、抗皺效果。該兩種檢測方法是目前化妝品功效評價中比較常用的實驗室評價方法，能夠客觀反映化妝品緊致、抗皺功效，具有較高的參考價值。

2.4 斑馬魚功效測試

通過斑馬魚測試含有人參組織培養物精華液產品對collala基因相對表達量，在0.5%濃度下，基因相對表達量為1.26與正常對照組相比，表達量有明顯增加，增加量約在26%左右；通過顯著性分析p值＜0.05，測試對比圖見圖6；說明產品具有較明顯促進膠原蛋白表達作用，進而證明產品具有顯著的抗皺效果。

斑馬魚作為一種模式生物，其在分子水平上與人類相似程度超過85%，已廣泛應用于醫藥行業進行原料功效篩選評估；斑馬魚測試的科學性和實用性得到了充分驗證[10]。通過測試產品促進斑馬魚體內膠原蛋白基因的表達，進而間接證明具有促進人體膠原蛋白生成的作用及抗皺功效。化妝品抗皺功效評價方面，其對哺乳動物實驗及人體實驗具有很好的互補性及一定替代性。

2.5 體驗者主觀感受統計

30位體驗者分別在第0、4、8周隨訪時進行自我評價問卷填寫，問卷內容主要包含使用產品前后皮膚的彈性、緊實度、皺紋改善程度、皮膚光滑程度、皮膚滋潤度是否有變化，產品膚感、延展性、吸收性、溫和性以及功效結果等是否滿意，最后對產品整體滿意度進行評價。根據體驗者的個人主觀感受對產品進行評價，評價結果為：針對緊致、抗皺、保濕有效率均大于85.71%；產品整體膚感、吸收速度及使用效果均比較滿意，體驗過程無明顯紅腫、刺癢或過敏現象；整體滿意度為100%。由此可見，含人參組織培養物護膚產品具有較明顯的保濕、抗皺、緊致的效果。

Part 3結論

使用含有人參組織培養物護膚產品體驗測試8周，進行了人體面部皮膚彈性、VISIA圖像分析測試，并結合自由基DPPH清除率、彈性蛋白酶抑制率以及斑馬魚膠原蛋白基因表達量測試，結果均顯示產品具有顯著緊致、抗皺功效（p＜0.05）。

綜合人體體驗功效評價、斑馬魚功效評價以及生物實驗功效評價三類評價方法，并結合體驗者主觀感受滿意度調研統計結果，表明含有人參組織培養物的護膚產品具有顯著的緊致、抗皺功效；且不同的功效評價方法與體驗者主觀評價結果一致。

作者介紹

劉金坤，房凡仁，李 曉，高 帥，何演焱，李麗迪：供職于山東安然納米實業發展有限公司

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