蔬菜葉象甲為害苗期煙草在我國的首次報道

摘要為鑒定最近在貴州省黔西南州興仁市烤煙育苗大棚里陸續發現為害煙苗的未知象甲，通過查詢文獻并測定該害蟲的COⅠ基因片段序列進行鑒定。結果表明，該未知象甲鑒定為蔬菜葉象甲Listroderes difficilis Germain，國內首次報道為害煙草。描述了蔬菜葉象甲的形態特征、寄主植物與分布、習性與為害特點及防控措施等，對該蟲害的識別與科學防控具有重要的參考價值。

關鍵詞蔬菜葉象甲;煙草;分子鑒定

中圖分類號：S 435.72文獻標識碼：ADOI：10.16688/j.zwbh.2023508First report on damage caused by Listroderes difficilis to seedlings

tobacco in ChinaLI Wenhong SUN Zhirong LI Jinmeng YANG XIN HE Yueping YANG Can MU Qing GAO Gui（1. Institute of Plant Protection， Guizhou Academy of Agricultural Sciences， Guiyangn1MkXsjcXUzgiBCSjfOWsw==550006， China;

2. Qianxinan Tobacco Branch of Guizhou Tobacco Company， Xingyi562400， China; 3. College of Agriculture，

Yangtze University， Jingzhou434025， China; 4. College of Plant Science & Technology， Huazhong

Agricultural University， Wuhan430072， China）AbstractRecently， damage symptom was found on seedling tobacco leaves in the greenhouse in Xingren city of Qianxinan of Guizhou province. Our investigation indicated that the damage was caused by an unknown weevil pest， which has not been reported previously. The damaged symptom of tobacco leaves caused by this pest was described. Based on COⅠ fragment sequence， the pest was identified as Listroderes difficilis Germain. Morphology characteristics of L.difficilis， its host plants and distributions， biological characteristics and damage and the control measures were described， which will provide references for recognition and management of L.difficilis.

Key wordsListroderes difficilis;tobacco;molecular identification

烤煙是我國重要的經濟作物，種植區域涉及我國17個主產煙葉省市區。2021年，全國烤煙種植面積88.6萬hm2。貴州省是煙草種植面積全國第二大省份，種植烤煙10.67萬hm2。煙草整個生育期，會受不同害蟲的為害，嚴重影響著煙葉產量和質量，故害蟲的調查與防治是煙草種植中重要的田間作業［14］。常見的為害煙草的害蟲有斜紋夜蛾Spodoptera litura Fabricius、煙青蟲Helicoverpa assulta Guenée、煙蚜Myzus persicae Sulzer、煙粉虱Bemisia tabaci （Gennadius）及象甲科Curculionidae害蟲等［14］。已有的研究發現，在中國為害煙草的象甲有7種，包括福泉灰象Sympiezomias sp.［56］、鞍象Neomylloeerus hedini Marshall［56］、棉尖象Phytoscaphus gossypii Chao［7］、大灰象甲Sympiezomias velatus Chevrolat［89］、綠鱗象甲Hypomeces squamosus Fabricius［89］、毛束象Desmidophorus hebes Fabricius［10］、呈貢灰象甲Sympiezomias chenggongensis Chao［11］。

2022年12月至2023年3月，在貴州省黔西南州進行害蟲調查時多次發現興仁市育苗大棚內一未知象甲為害煙草。該未知象甲與上述報道的7種為害煙草的象甲均存在形態差異。為此，運用分子生物學方法對該未知象甲進行了鑒定，并對其形態特征、寄主植物與分布、習性與為害特點及防控措施做了介紹，以期為煙草生產上對該害蟲的防控提供參考。

1材料與方法

1.1樣品采集

2023年4月，采集貴州省黔西南州興仁市雨樟鎮冬瓜寨烤煙育苗大棚里（25°21′N，105°06′E）被象甲為害的煙草葉片及15頭象甲高齡幼蟲樣品。將受害煙葉樣品放入自封袋，象甲樣品放入無菌試管中，帶回實驗室。煙葉樣品于雙目體視顯微鏡（江南永新JSZ6）下進行癥狀觀察，象甲樣品保存在-80℃冰箱以供形態學觀察和DNA提取。

1.2分子生物學鑒定

采用CTAB法提取象甲樣品DNA。使用COⅠ基因通用引物LCO1490：5′-GGTCAACAAATCATA-AAGATATTGG-3′，HCO2198：5′-TAAACTTCA-GGGTGACCAAAAAATCA-3′進行PCR擴增。擴增采用50 μL體系，包含Top Taq DNA polymerase（北京全式金生物公司）1 μL、正反向引物各1 μL、2.5 mmol/L dNTPs 4 μL、DNA模板2 μL、10×Top Taq Buffer 5 μL、 ddH2O 36 μL。PCR反應條件：94℃預變性5 min;94℃變性40 s，54℃退火40 s，72℃延伸1 min，40個循環;72℃延伸10 min。PCR產物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。將凝膠中目的基因PCR產物進行回收，送至昆泰銳（武漢）生物技術有限責任公司進行測序。將測得的序列在GenBank（https：∥www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/）中進行比對分析。

1.3象甲形態特征與生物學習性

在明確象甲種類后，通過顯微鏡觀察和文獻查閱，對該害蟲的形態特征、寄主植物與分布、習性與為害特點及防控措施進行描述。

2結果與分析

2.1象甲的為害習性及特征

調查發現，象甲主要為害苗期煙草葉片（圖1），造成葉片缺刻。該害蟲主要以幼蟲取食為害煙葉，取食主要發生在夜晚。葉片受害初期，可見葉肉被取食痕跡。害蟲喜取食幼嫩葉肉和幼嫩支脈，很少取食煙葉主脈;嚴重時底部葉片被取食僅剩主脈。同時，幼蟲具有很強的假死性，受驚后會將軀體彎曲為“C”字形或直接從煙葉上掉落。

2.2分子生物學鑒定

鑒定結果表明，未知象甲COⅠ序列片段長度為651 bp （圖2），與NCBI比對發現其序列與GenBank中蔬菜葉象甲Listroderes difficilis （英文名vegetable leaf weevil）的COⅠ序列（MK890912.1）相似性高達99%，僅2個堿基不同（圖3）。因此，所鑒定的未知象甲種類為蔬菜葉象甲Listroderes difficilis。

2.3蔬菜葉象甲的形態特征與生物學習性

分類地位研究發現，蔬菜葉象甲隸屬于鞘翅目Coleoptera多食亞目Phytophaga象甲科Curculionidae［12］。Morrone在1993年認為蔬菜葉象甲L.difficilis同物異名有：L.costirostris Schoenherr、L.vicinus Hustache、L.hupocrita Hustache、L.lugubris Germain、L.obliquus Klug、L.paranensis Hustache［13］。由于蔬菜葉象甲L.difficilis之前常與其他命名混淆，2002年Morrone進行了修訂，確認其物種名稱為Listroderes difficilis Germain［1415］。

通過形態觀察和文獻查閱，蔬菜葉象甲成蟲：體長7.2～10.5 mm，體寬3.0～4.0 mm;體扁平，體背及頭部黑褐色，腹面棕色至暗棕色;剛羽化的個體色較淺，體背具灰白色、淡棕色、棕色、褐色或黑色的鱗片及柔毛組成的花紋，頭小，半球形;喙較短粗，復眼小，黑色，橢圓形，不突出。卵：呈橢圓球形，長徑約0.9～1.0 mm，短徑約0.5～0.6 mm;外表光滑發亮，初產卵乳白色，后變為淡黃白色到淡黃色、黃色最終為淡棕色。幼蟲：共有4齡，體乳白色或淡黃白色，無足;頭顯露，頭殼略圓形;下口式，口器粗短，略呈圓錐形，口器上顎基部上方各有1個觸角，如乳頭狀;有2對圓形黑色（剛蛻皮時為淡褐色）的單眼;體呈紡錘形，常彎曲為“C”形，分節明顯。蛹：離蛹，長約8.5～9.2 mm，初蛹乳白色，后變為棕色直至褐色;頭、胸部有稀疏的細刺毛，腹部1～8節背板后緣各有一列褐色端部為暗褐色細刺毛，末節背板兩側各有1枚暗褐色且較粗的長刺毛［1617］。

根據文獻報道，蔬菜葉象甲屬多食性害蟲，寄主植物包括十字花科、茄科、傘形科、菊科、莧科、石竹科、豆科、百合科（表1）［13，1819］。其最喜歡十字花科蔬菜，該害蟲大發生時，蟲口密度超過歷年為害嚴重的菜青蟲Pieris rapae和小菜蛾Plutella xylostella，平均每株達3.78頭［1617］。

在地理分布上，蔬菜葉象甲于1905年首次在維多利亞被發現，其起源于南美洲，后經人和車輛的運輸意外擴散到其他國家［2022］（表2）。在我國（除臺灣外），1992年2月在貴州省貴陽花溪地區白菜、青菜、蘿卜、油菜等十字花科作物上首次發現蔬菜葉象甲幼蟲為害［1617］。

蔬菜葉象甲在貴陽地區1年發生1代，以成蟲滯育越夏，屬于長日照滯育型害蟲，成蟲發生期一般為3月中旬到5月上旬，成蟲羽化后即會大量取食，5月下旬則進入越夏狀態，之后持續到12月依舊有活躍的成蟲出現;成蟲產卵期較長，可從9月一直延續到次年2月;幼蟲發生期在10月上旬至次年5月上旬，為害期有2個階段，分別是11月-12月及次年2月-3月;蛹最早出現在1月上旬，3月下旬至4月上旬為化蛹盛期［15］。低齡幼蟲一般3～5頭聚集在心葉處為害，具有集中取食和背光的習性，老熟幼蟲則喜食嫩葉柄;幼蟲在煙草上選好為害和棲息位置后很少活動。初孵幼蟲取食致煙葉呈透明的斑狀，到2齡及以后取食煙葉呈孔洞或缺刻，對葉片、葉柄、心葉、花蕾，老、嫩葉片均可取食［16］。

2.4防治方法

田間防控過程中可根據蔬菜葉象甲發生為害時期和程度，綜合農業措施、生物源農藥或高效低風險化學農藥進行綜合防控；例如采用良種壯苗，加強田間管理，通過精耕細作機械殺傷蔬菜葉象甲，破壞其生存環境，影響其個體發育，推遲出土時間，降低蟲口密度［23］。針對蔬菜葉象甲幼蟲的防控，可采用蘇云金芽胞桿菌進行葉面噴霧處理。若害蟲發生為害嚴重，可交替和輪換使用高效氯氟氰菊酯和溴氰蟲酰胺等化學農藥進行防治［22］。

3結論與討論

本文簡要描述了一種象甲對煙苗的為害特征，并基于害蟲的COⅠ基因片段序列分析，鑒定其為蔬菜葉象甲。這是該害蟲在我國取食為害煙草的首次報道。盡管蔬菜葉象甲目前并非煙草的主要害蟲，國內僅有該害蟲為害十字花科作物的報道，為寡食性害蟲［1618］。但是，國外已發現蔬菜葉象甲還可為害傘形科芹菜、胡蘿卜以及十字花科的獨行菜Lepidium apetalum和茄科的煙草［2324］。此次發現蔬菜葉象甲幼蟲近兩年取食育苗棚中的煙苗，且呈頻發趨勢，需要引起煙葉生產者的重視。由于蔬菜葉象甲蟲源不明，建議加強對煙草煙苗基質、育苗棚的檢測和管理，持續關注該蟲在煙苗、田間煙株及其他寄主植物上的發生與為害規律，特別是其最喜食的寄主如十字花科作物。本文描述了蔬菜葉象甲的形態特征、寄主植物與分布，簡要介紹了其習性與為害特點及防控措施等，以期對蔬菜葉象甲的識別與防控提供一定的參考。然而，由于采集蟲體樣品后，未在實驗室條件進行繼代飼養，也未及時到田間采集其他不同階段及不同蟲態如卵、蛹、成蟲等進行細致觀察，在煙草上的發生規律不夠詳盡，這些均有待進一步的研究和完善。

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（責任編輯：田喆）