RP－HPLC法同時測定冠心丹參膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量

羅 鐳，唐登峰，祝 明

（浙江省食品藥品檢驗所，浙江 杭州310004）

冠心丹參膠囊是中醫臨床上常用于活血化瘀、理氣止痛的方藥，由丹參、三七和降香油三味藥材組成，收載于中國藥典2010年版一部，用于氣滯血瘀所致的胸痹，癥見胸悶刺痛、心悸氣短；冠心病心絞痛見上述證候者［1］。2010版藥典制定了丹參中丹參酮IIA 的含量測定控制指標，而對方中三七藥材無含量測定控制指標。三七丹參均為該方的主要藥味，并且近年來隨著三七價格的不斷上漲，冠心丹參膠囊生產過程中在三七投料方面存在減少投藥量和三七藥材以次充好的現象，故有必要對冠心丹參膠囊中三七的3個總皂苷的含量制定含量測定控制指標［2－3］。本文建立了RP－HPLC法同時測定冠心丹參膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200 系 列 高 效 液 相 色 譜 儀（G1322A 脫 氣 機，G1311A 四元泵，G1313A 自動進樣儀，G1316A 柱溫箱，Chemstation色譜工作站）。

1.2 試藥

三七皂苷R1對照品（批號：110745－200517）、人參皂苷Rg1對照品（批號：110703－200424）和人參皂苷Rb1對照品（批號：110704－200420），對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，為含量測定用。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑為分析純。冠心丹參膠囊樣品3 批，批號：090603、090607、090609，由國藥控股深圳中藥有限公司提供，批號090603的樣品作為方法學考察的樣品。

2 方法與結果

2.1 試液制備

2.1.1 混合對照品溶液

分別取三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品和人參皂苷Rb1對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL 分別含三七皂苷R1 0.0655mg、人參皂苷Rg1 0.198mg和人參皂苷Rb1 0.1802mg的混合對照品溶液，搖勻，即得。

2.1.2 供試品溶液

取裝量差異項下的本品內容物，混勻，研細，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，稱定重量，放置過夜，置水浴中加熱回流2h，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱Kromasil－C18（250mm×4.6mm，5μm），流動相乙腈（A）－水（B），梯度洗脫（0～12min 19% A；12～35min 19%A→25%A；35～60min 25%A→40%A）；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：23℃；檢測波長為203nm；進樣量：10μL。在此色譜條件下，樣品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1與其他雜質峰可達到較好分離，缺味無干擾。結果見圖1。

圖1 缺味、對照品及樣品的色譜

2.3 方法學驗證

2.3.1 線性關系考察

分別精密吸取對照品溶液（三七皂苷R1 0.065 5mg／mL，人 參 皂 苷 Rg1 0.1980mg／mL、人 參 皂 苷 Rb1 0.180 2mg／mL的混合溶液）1、3、5、10μL；（三七皂苷R1 0.109 2mg／mL，人參皂苷Rg1 0.330 0mg／mL、人參皂苷Rb1 0.300 3mg／mL的混合溶液）10μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的峰面積，以峰面積（Y）對進樣量（X）進行線性回歸，線性方程分別為：三七皂苷R1：Y＝278.81X＋2.656 7，r＝0.999 8；人 參 皂 苷Rg1：Y ＝281.83X ＋8.666 1，r＝0.999 8；人 參 皂 苷Rb1：Y ＝218.09X＋4.641 3，r＝0.999 9。結果表明：三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1 進 樣量分別在0.065 5～1.092μg／mL、0.198 0～3.299 7μg／mL、0.180 2～3.003 2μg／mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.3.2 精密度試驗

取混合對照品溶液（三七皂苷R1 0.0655mg／mL，人參皂苷Rg1 0.1980mg／mL、人參皂苷Rb1 0.1802mg／mL 的混合溶液），按上述色譜條件，重復進樣6次，測定峰面積，結果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為1.1%，0.9%，1.1%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復性試驗

取同一批供試品（批號：090603）制備6份供試品溶液，按“2.1～2.2”項下方法測定，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量的平均值（n＝6）分別為3.44，19.87，17.39mg／g，RSD分別為0.1%，0.2%，0.2%，結果表明該方法重復性良好。

2.3.4 穩定性試驗

取供試品溶液，室溫下放置，分別于0，1.5，4，7，13，23h進樣測定，記錄色譜峰面積。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1色譜峰面積的RSD 分別為0.5%、0.8% 、0.2%，表明供試品溶液在23h內穩定。

2.3.5 回收率實驗

取已知含量的樣品（批號：090603，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量分別為3.44、19.87、17.39mg·g－1）6份，每份取約0.12g精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入0.4094mg·mL－1三七皂苷R1 1mL，1.2828mg·mL－1三七皂苷Rg1 3mL ，1.1262mg·mL－1三七皂苷Rb1 2mL，按“2.1～2.2”項下方法測定，計算回收率。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1 的平均回收率（n＝6）分別為98.8%、100.3%、100.4%；RSD 分 別 為0.9% 、3.1% 、0.5%。

2.4 樣品測定

取各批次冠心丹參膠囊樣品0.5g，精密測定，按“2.1～2.2”項下方法測定，以外標法計算含量，結果見表1。

表1 冠心丹參膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量測定結果 （mg／粒）

3 討論

3.1 提取條件的選擇

分別考察了加熱回流、超聲提取法對3種成分的提取效率，結果表明回流提取法提取效率更高；提取溶劑考察了甲醇、70%甲醇、乙醇、70%乙醇，結果表明70%甲醇對3種成分提取效率較高；同時對70%甲醇用量25、50、100倍量進行考察，結果表明50倍量即可提取完全；對回流提取1h、2h、3h進行考察，結果表明回流提取2h即可提取完全。

3.2 柱溫的考察

三七中人參皂苷Rg1與其附近的人參皂苷Re色譜峰分離比較困難，通過降低柱溫，可使分離度達到1.5以上，故在分離人參皂苷Rg1和人參皂苷Re時，可適當降低柱溫，選擇23℃為宜。

4 結論

本法操作簡便，測定結果正確，重復性好，可用于冠心丹參膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的含量測定。

［1］ 中國藥典委員會.中國藥典［S］.一部.2010：433.

［2］ WAN XIAOQING，XIA BOHOU.Determination of saponnins in different processed products of Panax Notoginseng［J］.CJTCMP，2011，26（4）：841－843.

［3］ QIU MINGMING.HPLC－ELSD determination of notoginsenoside Rl，ginsenoside Rgl and ginsenoside Rb1in Sanqi Xueshangning Capsules［J］.Chin J Pharm Anal，2010，30（4）：629－631.