超高效液相色譜法測定消炎止咳膠囊中槲皮素和山柰素的含量

【摘要】目的：建立消炎止咳膠囊中槲皮素和山柰素的UPLC含量測定方法，提高該制劑質量控制標準。方法：采用UPLC含量測定方法。色譜條件：以BEH C18（2.1 mm×150 mm，1.7μm）為分離柱；以乙腈-0.4磷酸溶液（25∶75）為流動相；檢測波長：370 nm；柱溫：30℃；流速：0.3 mL/min，進樣體積：2μL。結果：槲皮素在1.7365～17.3620μm/mL內呈良好的線性關系（R2= 0.9999，n=5）；加樣回收率為99.5%，RSD為1.0%。山柰素在2.4516～24.5154μm/mL內呈良好的線性關系（R2=0.9999，n=5）；加樣回收率為98.2%，RSD為1.2%。結論：建立了消炎止咳膠囊中槲皮素和山柰素的UPLC測定方法，可有效控制該制劑的質量。

【關鍵詞】消炎止咳膠囊；胡頹子葉；槲皮素；山柰素（酚）；超高效液相色譜

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.05.002

【基金項目】貴州省2022年度省級藥品探索性研究課題。

Determination of Quercetin and Kaempferol in Xiaoyan Zhike Capsules by UPLC

LIU Zhihai， PENG Qili*， WANG Dandan， JIN Zhao

（Guizhou Province Qianxinan Institution for Inspection and Testing Center， Xingyi 562400， China）

Abstract： Objective： To develop a UPLC method for simultaneous determination of quercetin and kaempferol in Xiaoyan Zhike Capsules and enhancing the quality control standard of the preparation. Methods： The UPLC content determination method is employed. Chromatographic conditions： BEH C18 （2.1 mm×150 mm， 1.7μm） column is used for separation； acetonitrile -0.4 phosphoric acid solution（25∶25） served as the mobile phase； the detection wavelength is 370 nm； the column temperature is 30℃； the flow rate is 0.3 mL/min， and the injection volume is 2μL. Results： The linear ranges of quercetin is 1.7365～17.3620μg/mL （R2=0.9999， n=5） ； the recoveries are 99.5% with an RSD of 1.0%. The linear ranges of kaempferol is 2.4516～24.5154μg/mL （R2=0.9999， n=5） ； the spiked recoveries are 98.2% and the RSD is 1.2%. Conclusion：AUPLC method for determining quercetin and kaempferol in Xiaoyan Zhike capsules is established， effectively contributing to the quality control of this preparation.

Keywords： Xiaoyan Zhike capsules； folium elaeagni； quercetin； kaempferol； UPLC

消炎止咳膠囊為貴州省黔西南州特色苗族醫藥制劑，其處方由胡頹子葉、麻黃、桔梗、黃荊子、太子參、南沙參、百部、穿心蓮、罌粟殼組成。功能主治：消炎，鎮咳，化痰，定喘。對該藥品進行探索性研究發現，該制劑質量標準較為單一，僅對處方中的穿心蓮[1]進行了含量測定控制。該制劑的君藥為貴州民族藥胡頹子葉[2]。胡頹子葉具有止咳平喘，消腫止血的功能，對整個制劑的療效起著至關重要的作用。查詢文獻資料可知，胡頹子葉指標性成分為黃酮類[3-5]，其中以槲皮素、山柰素為代表。為有效地控制該制劑的質量，筆者通過超高效液相色譜（UPLC）測定消炎止咳膠囊中槲皮素和山柰素的含量。

1材料

1.1實驗儀器

Waters ACQuity型高效液相色譜儀，Empower色譜數據工作站（沃特世公司）；AUW220D電子天平（日本島津公司，十萬分之一）；AUY220電子天平（日本島津公司，萬分之一）；電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2實驗藥品

槲皮素對照品（中國食品藥品檢定研究院10081-201610）、山柰素（酚）（中國食品藥品檢定研究院110861-201812）、消炎止咳膠囊（批號：20211206、20210501、20211107、20220102、20220103、20220106、20220107、20220202、20220203、20220205）均由貴州省德良方藥業有限公司生產并提供；乙腈為色譜純（德國默克），水為超純水，其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（柱長為150 mm，內徑為2.1 mm，粒徑為1.7μm）；乙腈-0.4磷酸溶液（25∶75）為流動相；檢測波長為370 nm，體積流量為0.3 mL/min；柱溫為30℃，進樣體積為2μL。

2.2對照品溶液的制備

取槲皮素對照品、山柰素對照品適量，精密稱定，加乙醇溶解稀釋制成混合溶液。在該混合溶液中，槲皮素的質量濃度為5μg/mL，山柰素的質量濃度為10μg/mL。

2.3供試品溶液的制備

取供試品的內容物1 g，精密稱定，精密加入5%鹽酸乙醇溶液25 mL，稱定重量，加熱回流1.5 h，取出，放冷，再稱定重量，用5%鹽酸乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4專屬性實驗

分別取對照品溶液和供試品溶液各2μL，注入液相色譜儀，按照上述色譜條件測定。如圖1所示，供試品溶液色譜圖中均有槲皮素和山柰素的吸收峰。

2.5線性關系考察

取槲皮素對照品（中檢院10081-201610）適量，精密稱定，置于容量瓶中，加乙醇溶液制成質量濃度為1.7365、3.4725、8.6812、13.0217、17.3620μg/mL的對照品溶液，分別精密吸取對照品溶液2μL，注入液相色譜儀，測定，即得。線性回歸方程為y=18754x-7595.7，R2=0.9999。取山柰素對照品（中檢院100081-201812）適量，精密稱定，置于容量瓶中，加乙醇溶液制成質量濃度為2.4516、4.9031、9.8062、18.3865、24.5154μg/ mL的對照品溶液，分別精密吸取對照品溶液2μL，注入液相色譜儀，測定，即得。線性回歸方程為y=9737.2x–4170.5，R2= 0.9999。結果表明，槲皮素在1.7365～17.3620μg/mL，山柰素（酚）在2.4516～24.5154μg/mL內線性關系良好。

2.6精密度實驗

精密吸取質量濃度為8.6812μg/mL的槲皮素對照品溶液2μL，注入液相色譜儀，連續測定6次，峰面積的RSD為0.3%；精密吸取質量濃度為9.8062μg/mL的山柰素對照品溶液2μL，注入液相色譜儀，連續測定6次，峰面積的RSD為0.4%。兩項RSD值均小于2.0%，表明精密度較好。

2.7重復性實驗

取消炎止咳膠囊（20211201-1）內容物6份，按2.3項同法操作，制備供試品溶液，分別吸取供試品溶液2μL，注入液相色譜儀，測定，即得。計算其制劑中槲皮素和山柰素（酚）的總量，測定結果見表1。結果為：重復6次測定制劑中槲皮素和山柰素（酚）的總量平均值204.2μg/g，RSD值為1.4%，RSD值小于2.0%，表明該方法重現性好。

2.8加樣回收率實驗

分別取消炎止咳膠囊（20211201-1）內容物6份，混勻，研細，取約0.5 g（約相當于含槲皮素40.76μg、山柰素61.32μg），置于具塞容量瓶中，精密加入8.68μg/mL的槲皮素對照品溶液5 mL和12.2577μg/mL的槲皮素對照品溶液5 mL，其余步驟按2.3項同法操作，制備供試品溶液，分別吸取6份供試品溶液2μL，注入液相色譜儀，測定，即得。計算其制劑中槲皮素和山柰素的加樣回收率，測定數據見表2、表3。結果為：槲皮素的加樣回收率平均值為101%，RSD值為1.8%；山柰素的加樣回收率平均值為101%，RSD值為1.8%。結果表明，槲皮素和山柰素的回收率較好。

2.9含量測定

取10批樣品按2.3項同法操作制備供試品溶液，分別吸取供試品溶液2μL，注入液相色譜儀，測定，即得。槲皮素線性回歸方程為y=18754x–7595.7，山柰素線性回歸方程為y=9737.2x–4170.5，計算其制劑中槲皮素、山柰素的含量，測定結果見表4。

3討論

本實驗經過反復比較供試品提取方法和色譜條件，優選了槲皮素和山柰素（酚）的含量測定方法，并做了相應的方法學考察。結果表明，該方法專屬性強、重現性好、操作簡便。

3.1含量測定方法考察

3.1.1檢測波長選擇

通過紫外-可見分光光度法，在200～400 nm波長范圍內對槲皮素和山柰素（酚）對照品溶液進行全波長掃描，最大吸收波長為370 nm，故選擇370 nm為檢測波長。在此波長處供試品溶液各組分色譜峰達到完全分離。

3.1.2流動相選擇

參考了相關文獻[6]在含量測定時所選擇的流動相，即乙腈-0.4磷酸（30∶70）。結果表明，在該條件下槲皮素和山柰素對照品的色譜峰較好，但供試品中槲皮素和山柰素色譜峰與其他相鄰雜峰分離度較差。將乙腈比例降低，流動相調整為乙腈-0.4磷酸（25∶75）后，供試品中槲皮素和山柰素與其他相鄰雜峰達到分離要求，且主成分峰峰形較好，單針運行時間較短，能有效地提高含量測定時間效率。

4結束語

消炎止咳膠囊處方藥味較多，但該制劑的君藥為貴州民族藥胡頹子葉，胡頹子葉指標性成分為黃酮類成分，以槲皮素、山柰素為代表。為有效地控制該制劑的量，筆者建立消炎止咳膠囊中槲皮素和山柰素的UPLC測定方法。該測定方法操作簡便、高效快捷、重現性好、專屬性強，結果科學準確。

【參考文獻】

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2020年版四部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2020.

[2]貴州省藥品監督管理局.貴州省中藥材民族藥材質量標準：2019年版第二冊[S/OL].（2022-10-31）[2024-1-23]http：//yjj. guizhou. gov. cn / gsgg / ypzctg / 202210 / t20221031_ 76961850.html.

[3]黃麗杰，劉偉，崔永霞.胡頹子葉化學成分的研究[J].中成藥，2015，37（4）：796-800.

[4]郭明娟，江洪波，田祥琴，等.胡頹子葉的化學成分[J].華西藥學雜志，2008（4）：381-383.

[5]付義成，王曉靜，賈獻慧，等.胡頹子葉化學成分研究[J].中草藥，2008（5）：671-672.

[6]劉志海，范紅梅，金昭，等.興仁金線蓮中槲皮素、異鼠李素的薄層鑒別及不同部位的含量測定[J].中國民族民間醫藥，2016，25（24）：25-27.

【作者簡介】

劉志海，男，1982年出生，副主任藥師，學士，研究方向為中藥、民族藥、中成藥質量控制。

通信作者：彭啟麗，女，1993年出生，中藥師，碩士，研究方向為中藥、民族藥、中成藥質量控制，2295421815@qq.com。

（編輯：李鈺雙）