超高效液相色譜-串聯質譜法測定黔產管花黨參中黨參炔苷含量

【摘要】目的：建立超高效液相色譜-串聯質譜測定黔產管花黨參中黨參炔苷含量的方法。方法：樣品經50%甲醇超聲提取，在流動相為乙腈-水（50∶50），流速為0.2 mL/min，柱溫為35℃的條件下，經Waters ACQUITY UPLC？BEH C18色譜柱分離；采用電噴霧離子源（ESI+）電離樣品，多反應監測（MRM）模式下采用標準曲線法進行定量分析。結果：在0.10889～1.0889 ng線性關系良好，平均加樣回收率為98.3%（n=6）。結論：該法結果準確可靠，具有高靈敏度和高選擇性，適用于黔產管花黨參中黨參炔苷化合物的分析和鑒定及含量測定研究。

【關鍵詞】超高效液相色譜-串聯質譜法；管花黨參；黨參炔苷；含量測定

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.05.001

【基金項目】畢節市科技創新平臺及人才團隊科技計劃項目（畢科合〔2023〕16號）：貴州黨參（管花黨參）質量控制方法研究。

Determination of Lobetyolin Content in Codonopsis Tubulosa from Guizhou by UPLC-MS/MS

LEI Lianwei， HE Yu*， LU Liya， ZHANG Luyao

（Inspection and Testing Center of Bijie Market Supervision andAdministration Bureau， Bijie 551700， China）

Abstract： Objective： To establish a method for determining the content of lobetyolin in Codonopsis tuberosa from Guizhou using ultrahigh performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS / MS）. Methods： The samples were extracted by ultrasonic extraction with 50% methanol. Under the conditions of acetonitrile-water （50∶50） as the mobile phase， a flow rate of 0.2 mL/ min， and a column temperature of 35℃， the samples were separated on a Waters ACQUITY UPLC？BEH C18 column. The samples were ionized using an electrospray ionization source （ESI+） and quantitative analysis was performed using a standard curve method under multiple reaction monitoring （MRM） mode. Results： The linear relationship was good in the range of 0.10889 to 1.0889 ng， and the average recovery rate of spiked samples was 98.3% （n=6）. Conclusion： This method is accurate and reliable， with high sensitivity and selectivity， and is suitable for the analysis， identification， and content determination of lobetyolin compounds in Codonopsis tuberosa from Guizhou.

Keywords： UPLC-MS/MS； codonopsis tubulosa； codonopsis lobetyolin； content determination

0引言

管花黨參[1]又名貴州黨參，被收錄于2023年版《貴州省中藥、民族藥材質量標準》和《貴州省中藥及民族藥材質量標準原植（動）物彩色圖鑒》中，是貴州省常用的中藥民族藥。其味甘、性平，具有補中益氣、健脾益肺之功效，常用于治療脾肺虛弱、氣短心悸、食少便溏、虛喘咳嗽、內熱消渴等癥。管花黨參主要含有糖類、甾體類、酚酸類、黃酮類、氨基酸等化學成分。筆者通過建立超高效液相色譜-串聯質譜（UPLC-MS/MS）法，確定黔產管花黨參中的主要化學成分黨參炔苷，并對其含量進行測定[2]，進而對藥材質量進行有效控制。

1儀器與試藥

ACQUITYTM UPLC超高效液相色譜和Xevo TQ-Smicro質譜儀；電子天平；超聲清洗器。

黨參炔苷對照品（成都格利普生物科技有限公司，批號23101910，含量：90.07%）；管花黨參藥材樣品（畢節市大方縣、威寧縣、赫章縣采挖野生）；甲醇、乙腈、水均為質譜級。

2方法與結果

2.1色譜、質譜條件

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC？BEH C18（150 mm×2.1 mm，1.7μm）[3]，流動相：乙腈-水（50∶50），流速：0.2 mL/min，柱溫：30℃，進樣量：1μL。以三重四極桿串聯質譜儀進行檢測，電噴霧離子源（ESI），掃描方式為正離子模式，檢測模式為多反應監測（MRM）模式；毛細管電壓：2.5 KV；錐孔電壓：30V；脫溶劑氣流速：1000 L/h；脫溶劑氣溫度：500℃；進樣錐氣體流速：50 L/h；離子源溫度：150℃。化合物檢測離子對和碰撞電壓（CE）如下：母離子397.019；子離子198.961，35 V（CE）；子離子127.99，38 V（CE）。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備

取黨參炔苷對照品約12.09 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度為1 mg/mL的貯備液；精密吸取0.1 mL置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度；再次精密吸取1、2、4、6、8、10 mL分別置于10 mL容量瓶中稀釋至刻度，得不同質量濃度的系列標準溶液，經0.22μm濾膜濾過，即得對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備

取管花黨參藥材粉末，過三號篩備用。精密稱取約1 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，稱定重量，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）30 min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液。精密吸取0.1 mL置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度；再次精密吸取1 mL置于10 mL容量瓶中，經0.22μm濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.2.3陰性樣品溶液的制備

取質譜級甲醇作為陰性樣品溶液。

2.3專屬性試驗

取上述對照品、供試品和陰性樣品溶液，按照2.1項下的色譜、質譜條件進樣測定，記錄質譜圖。結果顯示，在管花黨參供試品溶液色譜圖中，黨參炔苷TIC離子峰形較好，黨參炔苷TIC離子峰周圍無雜峰，且空白溶劑無干擾。具體見圖1、圖2、圖3。

2.4方法學驗證

2.4.1線性關系考察

分別取2.2.1項下的系列對照品溶液，按2.1項下的色譜條件進樣1μL進行測定，記錄質譜圖，以定量離子對峰面積為縱坐標，以系列對照品溶液進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。結果顯示，黨參炔苷進樣量在0.10889～ 1.0889 ng內，峰面積呈良好線性關系。回歸方程為Y= 18479.9X-326.378，相關系數r=0.9995。

2.4.2精密度試驗

取質量濃度為0.43556 ng/μL的黨參炔苷對照品溶液1μL進樣測定，重復測定6次，記錄定量離子對峰面積。結果顯示，黨參炔苷峰面積RSD為0.2%，表明儀器精密度良好。

2.4.3穩定性試驗

取同一供試品溶液（ZP1），分別于0、6、12、24、36、48 h進樣測定，記錄各時間點黨參炔苷峰面積，48 h內測得黨參炔苷峰面積的RSD為0.2%，表明供試品溶液在48 h內穩定。

2.4.4重復性試驗

取同一供試品6份（ZP1），按2.2.2項同法制備供試品溶液，測定黨參炔苷含量。結果顯示，6份供試品黨參炔苷含量RSD為0.6%，表明該方法重復性良好。

2.4.5回收率試驗

取已知含量的管花黨參粉末（ZP1，2.909 mg/g）約0.5 g，精密稱定6份，置于具塞錐形瓶中，分別加入一定量的黨參炔苷對照品，按2.2.2項同法制備供試品溶液，測定黨參炔苷含量并計算回收率，平均回收率為98.3%，RSD為1.2%，具體結果見表1。

2.4.6檢測限和定量限

分別以S/N=3與S/N=10時的相應濃度確定檢出限和定量限。

將已知濃度的黨參缺苷對照品溶液采用逐步稀釋的方法，多次采集相關數據信噪比。結果顯示：當基線信噪比為4.28時，檢出限為0.005μg/kg；當信噪比為12.99時，定量限為0.0168μg/kg。

2.4.7樣品含量測定

取10批管花黨參樣品，編號ZP1～ZP10，按2.2.2項同法制備供試品溶液，測定樣品中黨參炔苷的含量。ZP1～ZP10的含量分別為：2.9、3.1、2.5、2.1、2.5、2.8、2.0、2.7、2.8、2.4 mg/g，平均值為2.6 mg/g。

3討論

采用質譜法依次對黔產管花黨參中的腺苷、色氨酸、紫丁香苷、黨參炔苷進行質譜分析。結果顯示，黨參炔苷對照品色譜峰的保留時間與供試品一致，且定量離子對峰面積較大，并且在扣除背景后的質譜圖中，所選擇的監測離子對均出現，而且所選擇的監測離子對峰面積比與對照品的監測離子對峰面積比一致（當相對比例>50%時，允許偏差為±20%；當20%<相對比例≤50%時，允許偏差為±25%；當10%<相對比例≤20%時，允許偏差為±30%；當相對比例≤10%時，允許偏差為±50%）。因此，后續選擇黨參炔苷進行含量測定研究。

【參考文獻】

[1]劉付松，張開弦，姚秋陽，等.貴州黨參資源現狀與研究進展[J].中華中醫藥雜志，2023，38（7）：3245-3251.

[2]孫慶文，何順志，黃敏.黔產管花黨參中黨參炔苷的含量測定[J].時珍國醫國藥，2007（8）：1931-1932.

[3]馬媛媛.液相色譜-質譜聯用技術在中藥分析中的應用[J].科技展望，2016，26（34）：133.

【作者簡介】

雷聯偉，男，1992年出生，主管藥師，學士，研究方向為藥物分析、藥品檢驗與質量評價。

通信作者：何羽，男，1978年出生，正高級工程師，學士，研究方向為藥品檢驗分析和質量標準，1142065867@qq.com。

（編輯：李鈺雙）