CPNE1、ZWILCH在肺腺癌進(jìn)展及預(yù)后中的臨床意義

[摘要]目的分析鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白1（calciumdependentphospholipidbindingprotein1，CPNE1）、ZWILCH表達(dá)與肺腺癌進(jìn)展及預(yù)后的相關(guān)性。方法收集2020年1月至2021年3月湖州市中心醫(yī)院首次確診的125例肺腺癌患者的癌組織、癌旁組織標(biāo)本，免疫組織化學(xué)法檢測CPNE1、ZWILCH陽性表達(dá)強(qiáng)度，分析其在肺腺癌中的表達(dá)差異。隨訪并記錄肺腺癌患者的生存情況，分析影響其預(yù)后的危險因素，明確CPNE1、ZWILCH預(yù)測肺腺癌患者預(yù)后的效能。結(jié)果肺腺癌組織患者的CPNE1、ZWILCH陽性率均顯著高于癌旁組織（P<0.05）。臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有胸膜侵犯、有脈管癌栓、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌患者的CPNE1、ZWILCH陽性率顯著升高（P<0.05）。CPNE1、ZWILCH陽性表達(dá)的肺腺癌患者的總生存率顯著低于CPNE1、ZWILCH陰性表達(dá)者（P<0.05）。Cox多因素分析顯示，家庭人均月收入、貧血、低蛋白血癥、臨床分期、分化程度、營養(yǎng)免疫與系統(tǒng)炎癥指標(biāo)、免疫功能、CPNE1、ZWILCH均是影響肺腺癌患者預(yù)后的危險因素（P<0.05）。CPNE1聯(lián)合ZWILCH預(yù)測肺腺癌患者預(yù)后的曲線下面積為0.934，敏感度為91.09%，特異性為87.89%。結(jié)論CPNE1、ZWILCH表達(dá)隨肺腺癌進(jìn)展逐漸升高，是影響患者生存的危險因素，或可作為預(yù)測患者預(yù)后的參考指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞]肺腺癌；鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白1；ZWILCH；預(yù)后

[中圖分類號]R734.2[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A[DOI]10.3969/j.issn.1673-9701.2024.25.001

ClinicalsignificanceofCPNE1andZWILCHintheprogressionandprognosisoflungadenocarcinoma

YEBei，LIUShunlin

DepartmentofRespiratoryandCriticalCareMedicine，HuzhouCentralHospital，AffiliatedCentralHospitalofHuzhouUniversity，Huzhou313000，Zhejiang，China

[Abstract]ObjectiveToanalyzecorrelationofcalciumdependentphospholipidbindingprotein1（CPNE1）andZWILCHexpressionintheprogressionandprognosisoflungadenocarcinoma.MethodsCancertissueandparacancertissuespecimensof125patientsdiagnosedwithlungadenocarcinomaforthefirsttimeinHuzhouCentralHospitalfromJanuary2020toMarch2021werecollected.ThepositiveexpressionofCPNE1andZWILCHinlungadenocarcinomawasdetectedbyimmunohistochemistry，anddifferenceofitsexpressioninlungadenocarcinomawasanalyzed.Thesurvivaloflungadenocarcinomapatientswasfollowedupandrecorded，theriskfactorsaffectingtheprognosisofpatientswereanalyzed，andtheefficacyofCPNE1andZWILCHinpredictingtheprognosisoflungadenocarcinomapatientswasclarified.ResultsThepositiveratesofCPNE1andZWILCHinlungadenocarcinomatissuesweresignificantlyhigherthanthoseinparacancertissues（P<0.05）.ThepositiveratesofCPNE1andZWILCHwereincreasedinlungadenocarcinomapatientswithstageⅢ-Ⅳ，lowdifferentiation，pleuralinvasion，vascularcancerthrombus，andlymphnodemetastasis（P<0.05）.TheoverallsurvivalrateofpatientswithCPNE1andZWILCHpositiveexpressionwassignificantlylowerthanthatofpatientswithCPNE1andZWILCHnegativeexpression（P<0.05）.Coxmultivariateanalysisshowedthatpercapitamonthlyincome，anemia，hypoalbuminemia，clinicalstage，degreeofdifferentiation，nutritionalimmunityandsystemicinflammationindicators，immunefunction，CPNE1，andZWILCHwereriskfactorsaffectingtheprognosisoflungadenocarcinomapatients（P<0.05）.TheareaunderthecurveofCPNE1combinedwithZWILCHpredictedtheprognosisoflungadenocarcinomapatientswas0.934，thesensitivitywas91.09%，andthespecificitywas87.89%.ConclusionCPNE1andZWILCHexpressiongraduallyincreasewiththeprogressionoflungadenocarcinoma，whichareriskfactorsaffectingthesurvivalofpatients，andmaybeusedasareferenceindicatortopredicttheprognosisofpatients.

[Keywords]Lungadenocarcinoma;Calciumdependentphospholipidbindingprotein1;ZWILCH;Prognosis

肺癌是一種常見惡性腫瘤，具有高發(fā)病率、高死亡率的特點(diǎn)，是人類惡性腫瘤死亡的首要原因[1]。肺腺癌為肺癌的主要組織學(xué)亞型，發(fā)病率逐年升高，極易出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差[2-3]。Copines蛋白家族是新近發(fā)現(xiàn)的保守鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白（calciumdependentphospholipidbindingprotein，CPNE），CPNE1作為此家族的重要蛋白定位于第20號染色體，被認(rèn)為是肺癌的原癌基因，其表達(dá)升高可引起細(xì)胞癌變、腫瘤細(xì)胞增殖、遷移，顯著縮短患者的生存期[4]。另外，肺腺癌的發(fā)生與腫瘤免疫微環(huán)境相關(guān)基因改變密切相關(guān)，Zhang等[5]基于癌癥基因組圖譜數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)，ZWILCH高表達(dá)所介導(dǎo)的肺腺癌免疫微環(huán)境改變與低存活率相關(guān)。現(xiàn)階段對CPNE1、ZWILCH在肺腺癌發(fā)展過程中的表達(dá)變化報(bào)道較少。本研究擬探討CPNE1、ZWILCH在肺腺癌組織中的表達(dá)及與疾病發(fā)展、預(yù)后的相關(guān)性，以期為改善患者預(yù)后提供參考。

1資料與方法

1.1臨床資料

收集2020年1月至2021年3月湖州市中心醫(yī)院首次確診的125例肺腺癌患者的癌組織、癌旁組織標(biāo)本，患者男68例，女57例，年齡33～75歲，臨床分期：ⅠA期24例、ⅠB期20例、Ⅱ期35例、Ⅲ期27例、Ⅳ期19例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理證實(shí)為肺腺癌，為原發(fā)性病灶；②未接受任何抗腫瘤治療；③美國東部腫瘤協(xié)作組（EasternCooperativeOncologyGroup，ECOG）評分0～1分。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肺鱗癌；②既往惡性腫瘤治療史；③合并其他類型惡性腫瘤；④重要臟器功能不全；⑤合并心腦血管疾病；⑥合并全身感染性疾病、自身免疫性疾病。所有患者均簽署知情同意書，本研究經(jīng)湖州市中心醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（倫理審批號：202209022-01）。

1.2免疫組織化學(xué)檢測

癌組織、癌旁組織石蠟包埋后切片，常規(guī)脫蠟，使用95%、85%、75%乙醇水化，0.01mol/L枸櫞酸鈉緩沖液（pH6.0）抗原修復(fù)，磷酸鹽緩沖液洗滌后加1∶2000的CPNE1、ZWILCH兔抗人單克隆抗體，4℃下過夜。磷酸鹽緩沖液洗滌加二抗孵育，30min后二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹脂封片，在顯微鏡下觀察。CPNE1陽性：胞質(zhì)或胞膜為棕褐色或棕黃色；ZWILCH陽性：胞質(zhì)棕黃色。進(jìn)一步根據(jù)陽性細(xì)胞占比、細(xì)胞染色強(qiáng)度判斷CPNE1、ZWILCH陽性表達(dá)強(qiáng)度，陽性細(xì)胞占比≤5%計(jì)0分，6%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，>75%計(jì)4分；細(xì)胞染色強(qiáng)度：不著色0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3分；兩項(xiàng)乘積<2分為陰性，2～3分為弱陽性，4～9分為中等陽性，10～12分為強(qiáng)陽性。

1.3臨床特征及預(yù)后判斷

臨床特征包括腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、有無胸膜侵犯、有無脈管癌栓、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。患者術(shù)后定期隨訪，以電話或門診復(fù)查等方式連續(xù)隨訪3年，第1年每3個月隨訪1次，而后每6個月隨訪1次，以隨訪截止日期及全因死亡或失訪作為隨訪終點(diǎn)，評價患者的生存情況。統(tǒng)計(jì)不同預(yù)后患者的臨床資料，包括性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、受教育程度、家庭人均月收入、腫瘤家族史、吸煙史、飲酒史、有無貧血、有無低蛋白血癥、腫瘤臨床特征、營養(yǎng)免疫與系統(tǒng)炎癥指標(biāo)[中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值（neutrophiltolymphocyteratio，NLR）、血小板與淋巴細(xì)胞比值（platelettolymphocyteratio，PLR）、預(yù)后營養(yǎng)指數(shù)（prognosticnutritionalindex，PNI）、全身免疫炎癥指數(shù)（systemicimmuneinflammation，SII）]、免疫功能[T淋巴細(xì)胞亞群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）、免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）A、IgG、IgM]等。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS25.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；繪制受試者操作特征曲線（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC曲線）分析CPNE1、ZWILCH判斷預(yù)后的截?cái)嘀担郧€下面積（areaunderthecurve，AUC）表示預(yù)測效能，AUC>0.7為預(yù)測效能較好。Kaplan-Meier法繪制生存曲線，采用log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析。單因素及多因素Cox回歸分析模型驗(yàn)證影響患者預(yù)后的危險因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1肺腺癌組織、癌旁組織的CPNE1、ZWILCH表達(dá)比較

肺腺癌組織的CPNE1、ZWILCH陽性率均顯著高于癌旁組織（P<0.05），見表1、圖1。

2.2CPNE1、ZWILCH在不同臨床特征肺腺癌中的表達(dá)

臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有胸膜侵犯、有脈管癌栓、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌患者的CPNE1、ZWILCH陽性率顯著升高（P<0.05），見表2。

2.3肺腺癌中CPNE1、ZWILCH陽性表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

根據(jù)肺腺癌患者的CPNE1、ZWILCH陽性表達(dá)情況將其分為CPNE1陽性組（n=89）、CPNE1陰性組（n=36）、ZWILCH陽性組（n=76）、ZWILCH陰性組（n=49）。進(jìn)一步分析CPNE1、ZWILCH與肺腺癌患者預(yù)后的相關(guān)性，結(jié)果顯示CPNE1陽性組患者的總生存率顯著低于CPNE1陰性組[60.67%（54/89）vs.88.89%（32/36），χ2=8.942，P<0.05]，ZWILCH陽性組患者的總生存率顯著低于ZWILCH陰性組[59.21%（45/76）vs.83.67%（41/49），χ2=7.439，P<0.05]，見圖2、圖3。

2.4影響肺腺癌患者預(yù)后的危險因素分析

Cox單因素分析顯示，體質(zhì)量指數(shù)、受教育程度、家庭人均月收入、貧血、低蛋白血癥、臨床分期、分化程度、胸膜侵犯、脈管癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NLR、PLR、PNI、SII、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgA、IgG、IgM、CPNE1、ZWILCH均是肺腺癌患者預(yù)后的影響因素（P<0.05），見表3。Cox多因素分析顯示，家庭人均月收入、貧血、低蛋白血癥、臨床分期、分化程度、NLR、PLR、PNI、SII、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgA、IgG、IgM、CPNE1、ZWILCH均是影響肺腺癌患者預(yù)后的危險因素（P<0.05），見表4。

2.5CPNE1、ZWILCH預(yù)測肺腺癌患者預(yù)后的效能分析

ROC曲線顯示，CPNE1聯(lián)合ZWILCH預(yù)測肺腺癌患者預(yù)后的AUC為0.934，敏感度為91.09%、特異性為87.89%，見表5、圖4。

3討論

肺癌是癌因性死亡的第一惡性腫瘤。目前，肺癌的致病機(jī)制尚未完全明確。CPNE1作為最先發(fā)現(xiàn)的Copines蛋白家族成員，可編碼537個氨基酸，在N端有一對C2結(jié)構(gòu)域，具有鈣離子依賴的磷脂結(jié)合活性，可影響鈣與磷酸結(jié)合，其C端有一個A結(jié)構(gòu)域，主要通過促進(jìn)CPNE1與多種細(xì)胞內(nèi)蛋白結(jié)合來發(fā)揮相應(yīng)生物學(xué)功能[6-8]。一旦組織癌變，CPNE1表達(dá)升高，經(jīng)多條信號通路參與包括肺癌、乳腺癌、骨肉瘤、前列腺癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生進(jìn)展[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn)，在肺腺癌發(fā)展過程中CPNE1陽性率逐漸升高，即CPNE1高表達(dá)于Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有胸膜侵犯、有脈管癌栓、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，提示CPNE1可能參與肺腺癌的進(jìn)展。研究證實(shí)CPNE1在泛素-蛋白酶體、自噬-溶酶體途徑中參與細(xì)胞癌變，認(rèn)為泛素連接酶神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)的發(fā)育下調(diào)樣基因4可通過介導(dǎo)CPNE1泛素化和降解來引起肺癌細(xì)胞異常增殖和轉(zhuǎn)移[11]。此外，CPNE1還可通過與活化蛋白激酶C受體1相互作用和激活上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化因子信號傳導(dǎo)來促進(jìn)肺癌進(jìn)展[12]。通過分析CPNE1影響非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖、遷移的機(jī)制，認(rèn)為其可能通過調(diào)節(jié)表皮生長因子受體信號通路、蛋白激酶B信號通路發(fā)揮作用[13]。以上均證實(shí)CPNE1參與肺腺癌進(jìn)展，或可作為肺腺癌患者預(yù)后的評估指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，CPNE1陽性患者總生存率處于較低水平，提示CPNE1與患者預(yù)后有一定關(guān)聯(lián)，CPNE1高表達(dá)經(jīng)上述信號通路誘導(dǎo)癌細(xì)胞增殖、遷移從而影響預(yù)后。

隨著對惡性腫瘤研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)有絲分裂異常是引起細(xì)胞癌變的主要原因，在有絲分裂過程中每對姐妹染色體著絲與兩極微管連接以保證遺傳信息平均分配，臨床認(rèn)為此過程由動粒蛋白中RZZ[Roughdeal（Rod）、Zeste-white10（Zw10）和ZWILCH]復(fù)合體等紡錘體組裝檢驗(yàn)點(diǎn)的重要組分實(shí)時監(jiān)控[14-16]。ZWILCH作為一種新發(fā)現(xiàn)的原癌基因，主要通過RZZ復(fù)合體將Mad1-Mad2、dynein/dynactin募集至著絲粒，以避免細(xì)胞提前退出有絲分裂，確保動粒-微管連接裝置的穩(wěn)定[17]。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)ZWILCH突變后紡錘體組裝檢驗(yàn)點(diǎn)失活，無法實(shí)時監(jiān)控有絲分裂過程，極易引起染色體錯誤分離，誘導(dǎo)細(xì)胞異常增殖癌變[18]。現(xiàn)階段對ZWILCH在肺癌中的作用機(jī)制尚不可知，但孫亞敏等[19]發(fā)現(xiàn)，ZWILCH升高可誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞異常增殖。Blatkiewicz等[20]研究證實(shí)ZWILCH上調(diào)不僅與腫瘤細(xì)胞有絲分裂率和患者生存率有關(guān)，還參與細(xì)胞增殖的基因激活和與免疫系統(tǒng)相關(guān)基因的抑制。本研究發(fā)現(xiàn)，ZWILCH在肺腺癌組織中陽性率升高，并隨著疾病的進(jìn)展而加劇，且ZWILCH陽性患者的總生存率明顯降低，提示ZWILCH可能通過某一途徑參與肺腺癌的進(jìn)展和預(yù)后轉(zhuǎn)歸。

本研究結(jié)果顯示，肺腺癌患者的預(yù)后受多種因素影響，除家庭人均月收入、貧血、低蛋白血癥、臨床分期、分化程度、營養(yǎng)免疫與系統(tǒng)炎癥指標(biāo)、免疫功能等因素外，CPNE1、ZWILCH同樣是影響肺腺癌患者預(yù)后的危險因素，提示CPNE1、ZWILCH陽性者死亡風(fēng)險更高，且二者聯(lián)合預(yù)測肺腺癌患者預(yù)后的效能較優(yōu)，臨床可通過檢測肺腺癌組織中CPNE1、ZWILCH的表達(dá)情況評估死亡風(fēng)險。

綜上所述，CPNE1、ZWILCH參與肺腺癌的進(jìn)展，其高表達(dá)是引起患者死亡的獨(dú)立危險因素，與患者預(yù)后密切相關(guān)。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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