膠體金法快速檢測食品中的米酵菌酸

米酵菌酸（Moniliformin）是一種由真菌產生的有毒物質，常見于多種糧食作物中，尤其是玉米。它屬于酸性環肽類化合物，具有強烈的毒性和致癌性。米酵菌酸的存在對食品安全構成潛在威脅，因此需要對食品中的米酵菌酸含量進行監測和控制。米酵菌酸的攝入對人體健康造成多種不良影響，包括肝臟損傷、腎臟損傷、免疫系統抑制以及神經系統毒性等。因此，對于食品中米酵菌酸的檢測和限制成為了食品安全監管的重要內容。目前，常用的米酵菌酸檢測方法包括高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和質譜法（MS）等。這些方法通常需要復雜的實驗操作和較長的分析時間，限制了其在大規模食品安全監測中的應用。近年來，一些新型的快速檢測方法也被開發出來，如膠體金免疫層析法和光學傳感器等。這些方法具有操作簡便、快速高效的特點，能夠實現對食品中米酵菌酸的快速篩查和定量分析。

1.材料與方法

1.1 材料與試劑

四川木耳、米漿、玉米饅頭：農貿市場、飯店、批發市場；膠體金檢測卡：山東美正生物科技有限公司；米酵菌酸檢測試紙卡：山東美正生物科技有限公司；米酵菌酸標準品（98%）：廣州化學試劑廠；乙腈（色譜級）：Fisher公司；實驗室用水：miili-QA10超純水機；二水合磷酸二氫鈉：山東凱米科新材料有限公司；十二水合磷酸氫二鈉（質譜級）：山東凱米科新材料有限公司。

1.2 儀器與設備

YPNSY-12攜式樣品濃縮儀：金壇區西城新瑞儀器廠；B114127491分析天平：美國梅特勒公司；LD-3離心機：德國艾本德股份公司。

1.3 實驗方法

1.3.1實驗原理

本方法采用膠體金法分析原理。將待測樣品中的米酵菌酸進行提取，比較檢測線（T線）與控制線（C線）的顏色變化。①檢測線的顏色較淺或者消失，樣品中存在米酵菌酸；②檢測線的顏色與控制線相似或者更深，樣品中不存在米酵菌酸。

1.3.2實驗方法

取四川木耳、米漿、玉米饅頭剪碎成<1cm碎片，倒入15mL離心管并稱取（2.00±0.05）g樣品，加入5mL的提取液，并蓋上離心管蓋，使用渦旋儀進行渦動振蕩1min。從原包裝袋中取出試紙條，使用一次性微型吸管吸取樣品提取液，并垂直緩慢滴加3滴（約100μL）到試紙條S孔中，確保滴加完畢后立即開始計時。10min后，根據顏色變化，確定樣品中所含物質的存在與否。

1.3.3判定結果

本文采用比色法，通過比較檢測線（T線）與控制線（C線）顏色。T線=C線顯色/T線>C線，判為陰性（-）；T線<C線/T=0，判為陽性（+）；C線=0，試紙條上的控制線沒有顯色，無法判斷樣品中是否含有待測物。

圖1 比色法判定

1.3.4評價方式

將取食品空白基質60份，用于建立快速檢測方法并進行驗證評價。為評估方法的性能，將設置0、7.5、15、30μg/kg樣品，每個濃度水平設置20個樣品進行驗證評價。將檢測不同濃度水平的樣品，并觀察檢測線（T線）與控制線（C線）的顏色變化。通過比較不同濃度水平樣品的檢測結果，確定方法的靈敏度，即能夠檢測到的最低濃度水平。使用建立的快速檢測方法對空白樣品進行測試，以確定是否存在誤報。通過將建立的快速檢測方法與已有的參考方法對比，評估兩種方法之間的一致性。

1.3.5交叉反應

制備各500g四川木耳、米漿、玉米饅頭的空白基質樣品，①分別添加脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）、玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZOf798b559384ab20cb0d259a0346de73cfd6a6f085a4e0c314a9c559530cc74daN）、黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFTB1）和赭曲霉毒素A（OchratoxinA，OTA）毒素類物質。②分別添加十二烷酸、十六烷酸、十四烷酸、油酸脂肪酸類結構類似物7.5μL。對樣品進行前處理使提取物與檢測卡上的抗體發生特異性反應，觀察檢測線（T線）和控制線（C線）的顯色變化，判斷是否存在交叉反應。計算公式如下：

交叉反應率=目標物質檢出限×100%/干擾物質檢出陽性時的最小濃度

2.結果與分析

2.1 制樣方式優化

取四川木耳、米漿、玉米饅頭，將其分成兩份。一份將被剪碎成<1cm碎片，另一份使用組織搗碎機勻漿。稱取2g樣品進行實驗。將樣品剪碎成小碎片，減少米粉、米漿和玉米饅頭的內容物，并降低對顯色結果的干擾。此外，剪碎樣品的方式也將避免加樣孔堵塞的問題，確保實驗的順利進行。

2.2 提取時間優化

提取時間對陰性樣品幾乎沒有影響。在1min、2min、5min、10min和30min內范圍內，目標物的提取效果較好。30min后長時間的提取導致目標物的穩定性下降。最佳的提取時間范圍是2-5min，目標物被有效地提取且受到環境因素影響較小。如提取時間超過30min，需重新取樣處理，以確保準確的結果。

2.3 提取劑優化

提取劑提取結果如表1所示。甲醇會提取出更多的雜質，從而導致假陰性結果的產生。水的存在可以改善乙腈的溶解性，使其更好地溶解目標物。因此，采用80%乙腈-水溶液作為提取溶劑可以提高提取效果。

2.4 加樣量優化

加樣量結果如表2所示。當加樣量為50μL時，加樣量較少待測液無法充分地在層析過程中擴散和分離。當加樣量為150μL時，加樣量超過層析過程所需的最佳量，導致一些待測液的殘留。當加樣量為80μL-100μL時，80μL加樣孔相比于100μL加樣孔微干燥，加樣量較少，待測液在層析過程中更快地擴散和分離，故選擇加樣量為100μL。

2.5 檢出限測定

在米酵菌酸含量為0μg/kg濃度下，膠體金免疫層析法未能檢測到任何米酵菌酸的存在。當濃度達到7.5μg/kg時米酵菌酸濃度未達足夠水平，T線顯示相對較弱。當濃度達到15μg/kg時米酵菌酸濃度達足夠水平，T線明顯淺于C線。表明膠體金法能夠有效檢測到米酵菌酸。

2.6 交叉反應

在進行交叉反應試驗時，添加結構類似物和真菌毒素類物質標準品，并將其濃度設置為15μg/kg。使用膠體金檢測卡和米酵菌酸檢測卡來進行結果判定，如表3所示。結果表明，膠體金檢測卡與米酵菌酸檢測卡無陽性反應。

2.7 與參比方法檢測結果的比對

如表4所示，兩種方法的檢測結果基本一致。膠體金法在檢測米酵菌酸方面具有與傳統方法相媲美的準確性和可靠性。與GB5009.189-2013標準中的高效液相色譜法相比，本文膠體金法檢測結果與之符合（100%）。

結論

本研究基于膠體金法技術原理，針對食品中風險較高的米酵菌酸建立一種快速檢測方法。該方法米酵菌酸檢出限為15μg/kg，符合國家標準要求。膠體金免疫層析法具有操作簡便、快速高效的特點，適用于大規模食品安全監測。本研究的結果為食品行業提供了一種可靠的方法來檢測食品中的米酵菌酸含量，有助于保障公眾的食品安全。未來，將進一步優化該方法，并探索其在其他有害物質檢測中的應用，以提高食品安全監測的效率和準確性。

作者簡介

王倩倩（1986.11-），女，漢族，山東榮成人，本科，中級；研究方向：食品、農產品檢測，食品質量與安全。