血漿miRNA在子宮內膜異位癥中的診斷價值

[摘要]目的探討血漿微小核糖核酸（microRNA，miR）-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p在子宮內膜異位癥（endometriosis，EMT）中的診斷價值。方法選取2021年12月至2023年2月就診于福建中醫藥大學附屬人民醫院婦科的子宮內膜異位癥患者35例作為病例組，同期選取30名健康體檢無異常的育齡女性作為對照組。采用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應技術檢測兩組納入者的miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p表達水平，并通過受試者操作特征曲線（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC曲線）評價其在EMT診斷中的價值。結果①病例組患者血漿中miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p的表達水平均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。②病例組中輕中度（Ⅱ～Ⅲ期）患者及重度（Ⅳ期）患者間miRNA表達水平比較差異無統計學意義（P>0.05），血漿中的糖類抗原125（carbohydrateantigen125，CA125）表達水平差異有統計學意義（P<0.05）。③通過ROC分析miRNA對EMT的診斷效能，miR-451a的敏感度為85.7%，特異性為40.0%；miR-3613-5p的敏感度為60.0%，特異性為90.0%；miR-125b-5p的敏感度為60.0%，特異性為76.7%；三者聯合診斷的敏感度為48.6%，特異性為96.7%。結論相較于健康女性，miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p在EMT患者血漿中表達水平升高，且不受臨床分期影響，有望作為EMT無創診斷的候選標志物。

[關鍵詞]子宮內膜異位癥；微小核糖核酸-451a；微小核糖核酸-3613-5p；微小核糖核酸-125b-5p

[中圖分類號]R711.71[文獻標識碼]A?;[DOI]10.3969/j.issn.1673-9701.2024.21.007

DiagnosticvalueofplasmamiRNAinendometriosis

HANChunlong，CHENJie，PENGZijie

DepartmentofGynecology，theAffiliatedPeople’sHospitalofFujianUniversityofTraditionalChineseMedicine，Fuzhou350004，Fujian，China

[Abstract]ObjectiveToexplorethediagnosticvalueofmicroRNA（miR）-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pinendometriosis（EMT）.MethodsAtatolof35patientswithEMTintheDepartmentofGynecology，theAffiliatedPeople’sHospitalofFujianUniversityofTraditionalChineseMedicinewereselectedasthecasegroupfromDecember2021toFebruary2023，30healthywomenofchildbearingagewereselectedasthecontrolgroupoverthesameperiod.TheexpressionlevelsofmiR-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pintheplasmaoftwogroupsweremeasuredusingreal-timequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction，thediagnosticvalueofthesemiRNAsinEMTwasevaluatedbyusingreceiveroperatingcharacteristic（ROC）curve.Results①TheexpressionlevelsofmiR-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pincasegroupwerehigherthanthoseincontrolgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（P<0.05）.②Incasegroup，therewasnosignificantdifferenceinmiRNAexpressionlevelsbetweenmild-moderatepatients（stageⅡ-Ⅲ）andseverepatients（stageⅣ）（P>0.05）.Theexpressionlevelsofcarbohydrateantigen125（CA125）inplasmawassignificantlydifferent（P<0.05）.③ThediagnosticefficacyofmiRNAforEMTwasevaluatedthroughROCanalysis，withasensitivityof85.7%andspecificityof40.0%formiR-451a，asensitivityof60.0%andspecificityof90.0%formiR-3613-5p，andasensitivityof60.0%andspecificityof76.7%formiR-125b-5p.Combinedwithasensitivityof48.6%andspecificityof96.7%.ConclusionComparedtohealthywomen，theexpressionlevelsofmiR-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pinplasmaofEMTareincreased，whicharenotaffectedbyclinicalstage，andareexpectedtobecandidatemarkersforthenon-invasivediagnosisofEMT，andarenotaffectedbyclinicalstaging，makingthempromisingcandidatebiomarkersfornon-invasivediagnosisofEMT.

[Keywords]Endometriosis;miR-451a;miR-3613-5p;miR-125b-5p

子宮內膜異位癥（endometriosis，EMT）作為常見的婦科病癥，在育齡期女性中的發病率約為10%，其可導致痛經、慢性盆腔痛、性交痛及不孕等一系列癥狀，嚴重影響女性的身心健康和生活質量[1]。EMT的發病機制目前仍未完全明確，也缺乏準確的診斷方法[2]，由于早期可能缺乏典型癥狀，患者癥狀明顯時病情往往已經較為嚴重。因此，對EMT的早期診斷顯得尤為關鍵[3]。目前，糖類抗原125（carbohydrateantigen125，CA125）是輔助診斷EMT的常用生物標志物，但其特異性在單獨使用時并不理想。腹腔鏡檢查可作為診斷EMT的“金標準”，但其高昂的成本和侵入性操作使其在臨床上的應用受到限制。鑒于此，研究者們一直在尋找具有高特異性和敏感度的非侵入性診斷標志物。微小核糖核酸（microRNA，miR）是一類由大約22個核苷酸組成的單鏈RNA分子，并在多種細胞過程中發揮關鍵調節作用[4]。研究表明miRNA在EMT的發生和發展過程中扮演重要角色，并有可能成為EMT的無創診斷標志物[5]。本研究旨在通過分析EMT患者與健康女性血漿中miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p的表達差異，并采用受試者操作特征曲線（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC曲線）評估其在EMT診斷中的應用價值，期望能為EMT的早期診斷提供新的策略。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2021年12月至2023年2月就診于福建中醫藥大學附屬人民醫院婦科的35例EMT患者作為病例組，同期選取30名健康體檢無異常的育齡女性作為對照組。病例組患者的年齡（32.23±5.07）歲，體質量指數（21.38±2.31）kg/m2，對照組納入者的年齡（32.50±4.45）歲，體質量指數（21.26±2.85）kg/m2，兩組納入者的一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）。病例組按術中所見以美國生殖醫學會（AmericanSocietyforReproductiveMedicine，ASRM）修正的子宮內膜異位癥分期法[6]進行分期：Ⅱ期患者4例，Ⅲ期患者11例，Ⅳ期患者20例。病例組納入標準：①接受腹腔鏡手術且術后病理確診EMT；②既往月經規律；③本人及其家屬同意加入本研究，并簽署知情同意書。排除標準：①術前3個月內接受促性腺激素釋放激素激動劑類似物或激素類藥物治療；②同時患有其他婦科疾病或嚴重器質性疾病者。本研究經福建中醫藥大學附屬人民醫院倫理委員會批準（倫理審批號：2021-051-02）。

1.2試劑與設備

mRNA逆轉錄試劑盒及miRNA逆轉錄試劑盒均購自北京康為世紀生物科技有限公司。Trizol試劑購自美國Thermo公司，CA125酶聯免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）試劑盒購自南京博研生物科技有限公司。miR-451a、miR-3613-5p、miR-125b-5p及U6（內參）引物由北京擎科合成。熒光定量聚合酶鏈反應儀購自美國Thermo公司，型號PIKOREAL96；多功能酶標分析儀購自瑞士Tecan公司，型號Infinite200Pro。

1.3實驗方法

1.3.1標本收集所有納入者在清晨空腹狀態下抽取5ml靜脈血，靜置于含抗凝劑的試管中，常溫3000轉/min離心15min取血漿，存于無菌離心管并冷凍于–80℃待測。

1.3.2miRNA檢測Trizol法提取細胞總RNA，分光光度計測定濃度并計算純度。先利用反轉錄試劑盒逆轉錄成cDNA，以cDNA為模板進行擴增，再進行實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應。選用U6作為內參，以Ct值為基礎，采用2-△△Ct法計算血漿miR-451a、miR-3613-5p及miR-125b-5p的相對表達量。引物序列見表1。

1.3.3CA125檢測使用ELISA試劑盒進行測定，嚴格遵守試劑盒說明書的規范步驟進行操作。

1.4統計學方法

采用SPSS26.0統計學軟件對數據進行處理分析。符合正態分布的計量資料以均數±標準差（）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；不符合正態分布的計量資料以中位數（四分位數間距）[M（Q1，Q3）]表示，兩組間比較采用Mann-WhitnelyU檢驗。診斷價值的比較采用ROC曲線分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1病例組與對照組的血漿miRNA指標比較

病例組患者的血漿miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p水平均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.2病例組不同分期患者血漿miRNA和CA125的比較

輕中度（Ⅱ～Ⅲ期）患者及重度（Ⅳ期）患者血漿miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p的相對表達量差異無統計學意義（P>0.05）；輕中度與重度CA125對比差異有統計學意義（P<0.05），見表3。

2.3ROC曲線分析miRNA診斷效能

血漿miR-451a診斷EMT的截斷值為0.067，曲線下面積（areaunderthecurve，AUC）為0.653（95%CI：0.519～0.787），敏感度為85.7%，特異性為40.0%；血漿miR-3613-5p診斷EMT的截斷值為0.523，AUC為0.794（95%CI：0.688～0.900），敏感度為60.0%，特異性為90.0%；血漿miR-125b-5p診斷EMT的截斷值為0.671，AUC為0.694（95%CI：0.566～0.823），敏感度為60.0%，特異性為76.7%；三者聯合診斷EMT的截斷值為0.708，AUC為0.801（95%CI：0.697～0.905），敏感度為48.6%，特異性為96.7%，見圖1。

3討論

EMT是生育年齡婦女常見的婦科疾病，不僅對患者的生命質量產生負面影響，還給社會衛生資源造成重大負擔[1]。因此，實現EMT的早期診斷和干預對改善患者預后至關重要[3]。發現非侵入性、具有高敏感度和特異性的生物標志物對EMT的診斷、緩解患者的不適、減少醫療費用、提升診斷的精確度和迅速性進而優化患者的整體治療過程具有重要意義。

miRNA是一類由大約22個核苷酸組成的單鏈RNA分子，在真核生物中高度保守，可以多種方式調控基因的轉錄或翻譯，單個miRNA甚至可對一個靶基因進行雙重或多重調控[4]。近年來研究顯示miRNA在EMT的發生和發展中廣泛參與，包括細胞的增殖遷移、血管的生成、炎癥信號的傳導及激素的調節等多個方面，對EMT的進展具有決定性影響[5]。Bendifallah等[7]利用人工智能和機器學習技術開發基于miRNA的EMT診斷程序，其敏感度、特異性和AUC分別達96.8%、100.0%和98.4%，這表明miRNA作為診斷標志物具有巨大潛力。Moustafa等[8]采用miRNA檢測組合作為EMT的非侵入性診斷方法，發現miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p在EMT患者中的表達水平顯著高于健康對照者，而miR-3613-5p和let-7b水平則顯著低于健康對照者。Vanhie等[9]基于全基因組miRNA表達譜分析，識別包括miR-125b-5p、miR-451a和miR-3613-5p在內的42種具有區分潛力的血漿miRNA，并構建3種診斷模型。Gao等[10]的研究發現miR-451a在正常子宮內膜中的表達減少，其可能通過促進細胞增殖和減少凋亡促進EMT的發病。Li等[11]在小鼠EMT模型上使用miR-451a抑制劑治療后，觀察到EMT病變體積顯著減小。但根據Wang等[12]的研究，在患有EMT并伴有不孕癥狀的個體中，miR-451a在組織樣本及細胞系的表達水平顯著低于正常人群。Walasik等[13]的前瞻性研究也發現EMT患者血漿中的miR-451a和miR-3613-5p水平顯著降低，但miR-125b-5p和miR-199a-3p水平在EMT患者和健康對照者間沒有差異。Cosar等[14]研究發現在經過治療的狒狒EMT模型中，miR-451a和miR-150-5p水平顯著降低，而miR-3613-5p水平顯著升高。此外，研究發現miR-3613-3p在調節內皮細胞凋亡中發揮不可或缺的作用[15]。

盡管國內外已有許多研究致力于評估miRNA作為EMT診斷標志物的潛力，并采取多種策略標準化miRNA表達數據，但所得結果卻并不一致[16]。這種不一致可歸因于采血時的月經周期時間、患者的炎癥狀態、樣本儲存時間或樣本溶血等[17]。另外本研究還使用ROC曲線評價miRNA對EMT的診斷效能，其中miR-451a具有較高的敏感度但特異性不足；相反，miR-3613-5p具有較高的特異性而敏感度不高，miR-125b-5p的敏感度和特異性均一般，三者聯合診斷時雖敏感度不足但特異性極高，有望彌補CA125單獨診斷EMT時特異性不足的缺點。

綜上所述，本研究在探索miRNA作為EMT診斷生物標志物方面取得一定的進展，但同時也暴露一些局限性。首先，研究的樣本量相對較小，其次，主要集中于中重度EMT患者，這可能限制研究結果在更廣泛人群中的適用性。為克服這些局限性，未來的研究應考慮擴大樣本量，進行多中心研究，并涵蓋不同臨床分期的EMT患者，為miRNA在EMT診斷中的應用提供更堅實的科學基礎。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2024–01–08）

（修回日期：2024–07–08）