縮宮素中醋酸含量對有關物質的影響

摘 要 目的：研究縮宮素中醋酸含量對縮宮素有關物質的影響。方法：采用液相色譜和質譜法對6批醋酸含量不同的縮宮素進行穩定性研究，分析有關物質種類、降解趨勢和降解量。結果：鑒別出縮宮素降解產生的4種主要有關物質為雜質Ac-Oxy、Oxy[Trisulfide]、Oxy[Cis-dimer]和Oxy[Trans-dimer]。這4種雜質的降解趨勢和降解量與縮宮素中醋酸含量密切相關，縮宮素中醋酸含量越高，得到的成品雜質數量和總雜含量越低，穩定性試驗過程越不易降解產生雜質；但雜質Ac-Oxy降解速度越快，降解量越高。結論：縮宮素中醋酸含量的變化，對縮宮素成品質量和儲存期間穩定性、雜質降解趨勢和降解量都具有重要影響。

關鍵詞 縮宮素 醋酸 有關物質 高效液相色譜法 質譜法

中圖分類號：R917； R984 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2024）11-0116-04

引用本文 王振平， 賈存宇， 張議方. 縮宮素中醋酸含量對有關物質的影響[J]. 上海醫藥， 2024， 45（11）： 116-119.

Effect of acetic acid content in oxytocin on related substances

WANG Zhenping， JIA Cunyu， ZHANG Yifang

（Shanghai Pharmaceutical NO.1 Biochemical & Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 200240， China）

ABSTRACT Objective： To study the effect of acetic acid content in oxytocin on related substances. Methods： Stability of six batches of oxytocin with different acetic acid contents was studied by liquid chromatography and mass spectrometry to analyze some kinds of substances， their degradation trend and degradation amount. Results： Four main substances related to the degradation of oxytocin were identified as impurities Ac-Oxy， Oxy[Trisulfide]， Oxy[Cis-dimer] and Oxy[Trans-dimer]. Their degradation trend and degradation amount were closely related to the acetic acid content in oxytocin， the higher the acetic acid content in oxytocin， the lower the amount of impurities and total impurity content in oxytocin， and the less likely it is to degrade and produce impurities during the stability test process. However， the faster degradation rate of impurity Ac-Oxy， the higher the degradation amount. Conclusion： The change of acetic acid content in oxytocin has an important effect on the quality of oxytocin， the stability during storage， the tendency of impurity degradation and the amount of degradation.

KEY WORDS oxytocin； acetic acid； related substances； high performance liquid chromatography； mass spectrometry

縮宮素又名催產素，是由8種氨基酸組成的九肽藥物[1]，易降解生成多種雜質，如乙酰化雜質、三硫化物、聚合物、脫酰胺雜質等[2-5]，從而影響產品質量。除了易受環境因素如溫度、pH的影響外，縮宮素自身性質也是產品質量的重要影響因素。本公司采用固相合成法制備縮宮素，得到的成品為醋酸鹽，歐洲藥典[6]與美國藥典[7]對縮宮素中醋酸含量均有收載，限度均為6.0%～10.0%。在此規定范圍內，醋酸含量的不同，將會對縮宮素成品質量及穩定性產生重要影響。

本研究選擇6批次中試放大批量生產的縮宮素（3批低醋酸含量，約為6.0%，3批高醋酸含量，約為10.0%）進行長期和加速穩定性研究，通過高效液相色譜法[8～11]、質譜法分析不同醋酸含量的縮宮素產生的雜質種類、降解量和降解趨勢。為縮宮素質量設計提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1260 Infinity高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；XS205DU分析天平、AL204分析天平、S210酸度計（瑞士Mettler-Toledo公司）；HPP1400恒溫恒濕試驗箱（德國Memmert公司）。

縮宮素雜質對照品Ac-Oxy和Oxy[Cis-dimer]（純度均大于95.0%，批號分別為16A200603和16A190811）、縮宮素工作對照品（純度大于99.0%，批號160190204）、6批工藝驗證批縮宮素純度均大于99.0 %，批號分別為160190301、160190502、160190603、160200911、160200912、160200913，醋酸含量分別為6.0%、6.2%、6.0%、9.7%、9.7%、9.4%，均由上海上藥第一生化藥業有限公司自制；縮宮素雜質對照品Oxy[Trisulfide]和Oxy[Trans-dimer]（純度均大于95.0%，批號分別為OP021919YH-021和OP021919YH-020）購于浙江昂拓萊司生物技術有限公司；乙腈、磷酸、乙酸銨、冰醋酸為市售色譜純；水為經孔徑0.22 mm濾膜過濾自制的注射用水。

1.2 色譜條件

高效液相色譜法色譜條件：采用Xbridge C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 mm），流動相A為100 mmol/L磷酸二氫鈉水溶液（pH 5.4）-乙腈（90∶10），流動相B為乙腈，梯度洗脫（0～7 min，A 95%→88%；7～10 min，A 88%→85%；10～12 min，A 85%→75%；12～15 min，A 75%；15～15.1 min，A 75%→95%；15.1～18 min，A 95%）；流速1.5 mL/min；柱溫32 ℃；檢測波長220 nm；進樣體積100 mL。

超高效液相色譜-質譜聯用條件：采用Acquity UPLC C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.7 mm），流動相A為20 mmol乙酸銨水溶液（pH 5.4）-乙腈（80∶20），流動相B為乙腈，梯度洗脫（0～15 min，A 80%→60%；15～15.1 min，A 60%→80%；15.1～20 min，A 80%）；流速0.2 mL/min；柱溫40 ℃；檢測波長220 nm；進樣體積10 mL。質譜檢測方式：正離子，離子掃描范圍500～4 000 m/z。

1.3 穩定性試驗條件

經色譜測定考察6批縮宮素中試放大批樣品在加速（25±2）℃、相對濕度（60±5）%條件分別放置0、1、2、3、6個月，長期（遮光，密封，2～8 ℃條件分別放置0、3、6、9、12個月的雜質降解情況。在進行0個月穩定性試驗時，樣品已于長期條件下放置5 d。

2 結果

2.1 高效液相色譜法考察縮宮素有關物質降解情況

加速條件放置6個月后，低醋酸含量縮宮素檢出0.3%以上雜質4種，高醋酸含量縮宮素檢出0.3%以上雜質1種（表1）。

2.2 有關物質鑒別

2.2.1 液相色譜-質譜

采用超高效液相色譜-質譜聯用法對降解量較高的雜質1、2和4進行質譜鑒別，根據m/z及縮宮素可能存在的降解產物對其進行歸屬（表2）。

2.2.2 液相色譜

根據質譜對有關物質的歸屬，制備Ac-Oxy、Oxy[Trisulfide]、Oxy[Cis-dimer]和Oxy[Trans-dimer]雜質對照品并進行色譜分析（圖1a）；并對加速6個月縮宮素（批號160190502）也進行色譜分析（圖1b）。綜合液相色譜-質譜結果與雜質對照品保留時間定位對各雜質的鑒別結果，推斷了雜質1～4的分類和結構式（表3）。

3 討論

雜質Ac-Oxy是縮宮素在醋酸的作用下乙酰化的產物，縮宮素半胱氨酸氨基端乙酰化形成雜質Ac-Oxy，可能的降解機理如圖2所示。雜質Oxy[Trisulfide]是縮宮素合成過程中經b消除和氧化作用形成的三硫化物。雜質Oxy[Cis-dimer]和Oxy[Trans-dimer]是兩種構型的縮宮素二聚體，雜質Oxy[Cis-dimer]是順式二聚體，雜質Oxy[Trans-dimer]是反式二聚體。

高醋酸含量縮宮素成品中雜質數量少，總雜量低，在加速和長期穩定性試驗過程中，不易降解產生新雜質。但是，醋酸含量越高，縮宮素乙酰化生成雜質Ac-Oxy越易發生，使加速過程中雜質Ac-Oxy的降解速度和降解量均明顯增加，總雜量快速增高。

由于不同種類的雜質引入藥物成品中，將會導致不同的潛在用藥安全性問題，提高縮宮素中醋酸含量，可以有效減少縮宮素中雜質數量，提高用藥安全性；而提高縮宮素中醋酸含量，會增加雜質Ac-Oxy降解速度，給已知單雜質和總雜質的控制帶來壓力。另一方面，降低縮宮素中醋酸含量，會減少雜質Ac-Oxy降解速度和總雜質降解量，增加縮宮素穩定性；但降低縮宮素中醋酸含量會增加縮宮素中雜質的數量，增加潛在的安全性風險。

鑒于縮宮素中醋酸含量對縮宮素成品質量和儲存期間穩定性、雜質降解趨勢和降解量都具有重要影響，因此，生產中可通過合成工藝及凍干條件對縮宮素中醋酸含量進行控制。本研究考察藥典規定的范圍內醋酸含量對有關物質的影響，可指導企業合理選擇、控制醋酸含量，從而為縮宮素質量設計增添一條有效途徑。

致謝：感謝上海交通大學分析測試中心幫助進行液相色譜-質譜分析。

參考文獻

[1] Lee HJ， Macbeth AH， Pagani JH， et al. Oxytocin： the great facilitator of life[J]. Prog Neurobiol， 2009， 88（2）： 127-151.

[2] Hawe A， Poole R， Romeijin S， et al. Towards heat-stable oxytocin formulations： analysis of degradation kinetics and identification of degradation products[J]. Pharm Res， 2009， 26（7）： 1679-1688.

[3] Ashenafi D， Van Hemelrijck E， Chopra S， et al. Liquid chromatographic analysis of oxytocin and its related substances[J]. J Pharm Biomed Anal， 2010， 51（1）： 24-29.

[4] Chaibva FA， Walker RB. Development and validation of a stability-indicating analytical method for the quantitation of oxytocin in pharmaceutical dosage forms[J]. J Pharm Biomed Anal， 2007， 43（1）： 179-185.

[5] 胡玉璽， 蔣煜， 韓天嬌， 等. 合成多肽藥物質控及雜質譜研究[J]. 中國新藥雜志， 2018， 27（5）： 502-508.

[6] European Pharmacopoeia 10.0th edition[M]. Strasbourg： European Directorate for the Quality of Medicines & Healthcare， 2020： 3464-3465.

[7] The United States Pharmacopeia： Official Monographs USP 43-NF 38[M]. Rockville： The United States Pharmacopeial Convention， 2020： 3366.

[8] 王振平， 賈存宇， 李曉倩， 等. 一種縮宮素及至少十種雜質的分離方法和應用： ZL202010679399.6[P]. 2022-03-15.

[9] 王振平， 李妍哲， 李娟， 等. 一種縮宮素及其8種差向異構體的分離方法及應用： ZL202010679732.3[P]. 2022-05-24.

[10] 賈存宇， 王振平， 李妍哲， 等. 一種縮宮素及3種脫酰胺雜質的分離方法和應用： ZL202010679703.7[P]. 2022-03-15.

[11] 李曉倩， 王振平， 李娟， 等. 一種縮宮素及3種雜質的分離方法和應用： ZL202010679398.1[P]. 2022-05-24.