放養雞新城疫飲水免疫后免疫抗體的持續期

摘要：雞新城疫（ND）用La Sota弱毒疫苗飲水免疫，能建立良好的黏膜免疫體系，可有效預防該病的發生。本次試驗通過檢測免疫后血清中免疫抗體的HI效價，對放養雞群用ND La Sota弱毒疫苗飲水免疫后，血清中免疫抗體效價的消長規律進行研究。從而為放養雞ND免疫提供一定依據。本次試驗免疫抗體維持群體保護持續期為210 d，考慮到在試驗期間，有新城疫病毒（NDV）感染的原因。建議在生產中，對于放養雞的ND在進行基礎免疫后，每間隔180 d進行1次補免，更可靠的方法是根據每群雞免疫抗體檢測結果確定補免時間。

關鍵詞：新城疫；活疫苗；飲水免疫；血清；抗體

雞ND是由NDV引起的雞和多種禽類的急性高度接觸性傳染病，易感禽類常呈敗血癥經過，主要特征是呼吸困難、腹瀉、神經紊亂、黏膜和漿膜出血。因致病毒株不同，ND發病癥狀、嚴重程度有很大的差異。本病分布于世界各地，傳播迅速，病死率高，是危害養雞業的最主要傳染病之一，我國將ND列為二類動物疫病。

1 試驗背景

祁門縣為山區地貌，森林覆蓋率高達88.64%，環境優越，境內多山谷，因地制宜，充分利用林地發展林下放養肉蛋兼用雞，是當地農民增加經濟收入的重要渠道之一。飲水免疫不僅降低免疫的勞動強度，減少工作量，而且免疫效果較好，所以養殖戶們大多選擇飲水免疫。放養雞大多采用的免疫程序如下。

1日齡，頸背部皮下注射馬立克氏病活疫苗；3日齡，飲水免疫雞球蟲病三價活疫苗；7日齡，雞ND、傳染性支氣管炎H120二聯活疫苗，倍量飲水；14日齡，雞傳染性法氏囊病活疫苗，倍量飲水；21日齡，雞ND、傳染性支氣管炎H52二聯活疫苗，倍量飲水；28日齡，

雞傳染性法氏囊活疫苗，倍量飲水；60日齡，雞ND活疫苗，倍量飲水；80日齡，重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗，頸部皮下注射。

在日常工作中，發現采用上述免疫程序，在免疫操作正確時，300日齡內的放養雞群中未發現異常；超過300日齡的放養雞群，曾出現多起ND發病的情況。發病雞群的臨床癥狀、病理變化都不明顯，ND的典型癥狀和典型病理變化都未出現，發病時，雞群產蛋率下降，部分雞有縮頭、呆立、嗜睡的癥狀，少數排綠色糞便，部分雞出現盲腸扁桃體出血，極少數雞出現腺胃乳頭出血的病理變化。為更好地了解掌握通過上述免疫程序和免疫方法免疫的放養雞群，NDV在血清中免疫抗體的保護持續期，為今后的放養雞ND飲水免疫提供理論依據，特進行此試驗。

2 血凝和血凝抑制試驗

雞NDV、禽流感病毒（AIV）等病毒具有凝集某些哺乳類和禽類紅細胞的特性，稱為病毒血凝反應（HA），是病毒的一種生物學特性，而非特異性的血清學反應。但是特異性抗體可以抑制這種反應，稱為病毒的血凝抑制反應（HI），這一過程是抗原抗體的特異性反應?？捎肏A試驗和HI試驗檢測、鑒定病毒，也可用于檢測病毒特異性抗體。

動物機體受到抗原（Ag）刺激后，由Ｂ淋巴細胞轉化為漿細胞產生免疫球蛋白（Ig），能與相應的Ag發生特異性結合反應，這類Ig稱為Ab。Ig存在于動物血液、組織液及其他分泌液中，依據化學結構和抗原性差異，可分為IgG、IgM、IgA、IgE和IgD。IgG是人和動物血清中含量最高的Ig，占血清Ig總量的75%～80%，IgM是動物機體初次體液免疫反應最早產生的Ig，其含量占血清Ig的10%左右。所以檢測血清中Ab效價，主要是針對IgG、IgM的檢測[1]。

3 試驗材料

3.1 試驗動物

經過上述免疫程序和免疫方法免疫的120日齡的皖南三黃雞母雞30只。

3.2 疫苗選擇

（1）雞馬立克氏病活疫苗（CU1988/Rispens株；每羽份病毒含量不低于3 000 PFU）；（2）雞球蟲三價活疫苗（柔嫩艾美耳球蟲PTMZ株+巨型艾美耳球蟲PMHY株+堆型艾美耳球蟲PAHY株；每羽份疫苗含孢子化卵囊400個±10%）；（3）雞ND、傳染性支氣管炎（La Sota株+H120株和La Sota株+H52株；每羽份雞ND病毒含量不低于106.0EID50、傳染性支氣管炎病毒含量不低于103.5EID50）；（4）ND活疫苗（La Sota株；每羽份病毒含量不低于106.0EID50）；（5）傳染性法氏囊活疫苗（B87株；每羽份病毒含量不低于103.0EID50）；（6）重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗（H5N6 H5-Re13株+H5N8 H5-Re14株+H7N9 H7-Re4株；滅活前HA效價均為1：512）。

3.3 主要器械、試劑

主要器械、試劑有臺式低速離心機（湖南凱達科學儀器有限公司TD5A）；96孔V型微量血凝反應板；可調微量移液器（FinnpipetteF3 KZ07558 KZ03358）；雞ND血凝抑制試驗抗原（哈爾濱國生生物科技股份有限公司，批號20220930，有效期24個月）；紅細胞（RBC），每次試驗都采用固定的3只成年公雞的紅細胞，首次采血300日齡。紅細胞懸液保存時間不超過24 h。

4 試驗方法

在當地林下放養的5 000只經過上述免疫程序和免疫方法免疫的皖南三黃雞群體中，隨機選擇30只母雞，隨機分成A、B兩組，每組15只。A組為完全放養組，B組為限制放養組，分別混入總數為100只的雞群中進行飼養。A、B組養殖過程中均未出現死亡。在120日齡（ND免疫后第60天）開始，每隔30 d采血、離心（1 000 r/min、8 min）后取血清。用血凝抑制試驗檢測血清中的免疫抗體（按《新城疫診斷技術》（GB/T16550-2020）中7.3和7.4執行）。

5 試驗結論

5.1 日齡與抗體效價

由表1數據顯示，在270日齡即免疫后210 d，免疫抗體效價的平均值為4.3，已接近臨界值，有26.67%的抗體效價為4，說明此時的免疫保護作用已很弱。如有ND強毒的入侵，此時雞群就有可能感染ND。在300日齡即免疫后240 d時，免疫抗體陽性率為63.3%，此時免疫抗體已失去群體保護作用。

5.2 效價精密度與免疫方式

表1中抗體效價分布分散不集中，結合表2中各日齡抗體效價的變異系數都在22%以上，最大差值有7個滴度，說明此次免疫抗體效價的精密度差，表示這群雞ND免疫效果不理想，最大的可能性與免疫方式有關。

5.3 抗體效價與野毒感染

表2數據中，120～150日齡，A組（完全放養組）有7只雞在150日齡檢測的抗體效價比120日齡抗體效價出現明顯升高，在排除試驗誤差和免疫應答的前提下，說明此期間A組有可能發生過ND野毒的感染；在150～180日齡，B組（限制放養組）有4只雞在180日齡檢測的抗體效價比150日齡抗體效價出現升高，說明此期間B組有可能發生過ND病毒感染；在180～210日齡，B組有3只雞在210日齡檢測的抗體效價比180日齡抗體效價出現升高，因出現的個體少，且只有1個滴度的差異，最大的可能性是試驗誤差造成的結果。通過試驗期A、B組都出現抗體效價異常升高的情況，說明祁門縣放養雞群感染ND的風險較高。

5.4 抗體效價與飼養方式

由表2數據可見，各日齡的抗體效價A組與B組間差異不顯著（P﹥0.05），說明完全放養與限制放養兩種飼養方式對免疫抗體的影響不明顯。

6 分析與討論

在270日齡時（免疫后210 d），免疫抗體合格率為76.7%，免疫抗體效價60%集中在4～5（1∶16～1∶32），

說明雞群對NDV的抗感染能力很弱，如有ND強毒入侵、必然發病。所以270日齡前必須進行ND的加強免疫。考慮到270日齡的雞個體較大，可采用ND La Sota弱毒疫苗4倍量飲水免疫[2]。

在300日齡時，免疫抗體合格率為63.3%，此時已無群體保護作用，但對個體還有保護作用。這時雞群如有ND病毒感染，雞群會出現每天零星死亡的現象，ND發病臨床癥狀與病理變化不典型，這與臨床遇到的發病情況基本一致。如需確診必須進行PCR試驗。根據此次試驗結果，生產中，建議按上述基礎免疫程序接種后，對于ND每間隔180 d進行1次加強免疫。

因本次試驗抗體效價的精密度差，通過觀察多家養殖戶的飲水免疫操作，提出以下注意事項：異常天氣和雞群健康狀況有異時，不宜接種疫苗：接種疫苗前連續3 d，飲水中加入維生素C，減低應激；接種疫苗前后3 d禁止消毒和使用抗生素；接種疫苗最好安排在上午進行，控水的時間從天亮或開始補光時計算，當雞群中有70%的雞出現飲欲時（時長為2～4 h），開始進行飲水免疫接種；使用疫苗前應清洗飲水器，清洗飲水器時嚴禁使用消毒劑；疫苗要現配現用；配制疫苗時，使用涼開水，并在水中加入0.3%的脫脂奶粉，為保證疫苗稀釋均勻，可按倍量稀釋法，逐步對疫苗進行稀釋；疫苗用水量為30日齡內10 mL/只、30～60日齡20 mL/只、60日齡以上30～40 mL/只（根據雞大小和季節調整），水量的控制要保證每只雞都能飲到的同時，使雞群在1 h內飲完疫苗，充分保證疫苗的活性；增加飲水器或乳頭開關的數量，并均勻分布，保證每只雞都能及時充分飲用到；冬季水溫保持15℃以上，避免水溫過低，引起腹瀉和應激。

為盡量排除干擾因素，制備紅細胞懸液時，紅細胞的清洗次數增加為5次，提取紅細胞時從中部抽取。每次試驗前用待測血清與紅細胞懸液進行血凝試驗，排除不明凝集因子。因本地放養雞養殖戶在養殖過程中不養公雞，有少量的公雞，在達到90日齡就全部出欄，所以根據試驗目的，全部選用母雞。完全放養就是雞的活動范圍不受限制，可以完全自由活動。限制放養就是雞在固定的區域內活動，平均每只雞的活動面積為2.25 m2以上。

參考文獻

[1] 楊漢春.動物免疫學（第2版）[M].北京：中國農業大學出版社，2003.

[2] 董衛英.新城疫La Sota疫苗飲水對蛋雞免疫效果試驗[J].中國畜禽種業，2015，11（12）：140-141.