腺樣體肥大患兒腺樣體組織中半胱氨酰白三烯受體1的表達及其影響因素

張冰 管仁政 金蓉 林榮軍 王學海

［摘要］ 目的

分析半胱氨酰白三烯受體1（CysLTR1）在腺樣體肥大（adenoid hypertrophy，AH）患兒腺樣體組織中的表達特點，探究CysLTR1在AH形成中的作用機制及CysLTR1表達的影響因素。

方法 選取2020年10月1日—2021年10月1日在威海市立醫院耳鼻咽喉科行腺樣體切除術患兒71例，對其切除標本行CysLTR1免疫組化染色，根據染色結果分為CysLTR1高表達組及低表達組。收集兩組患兒性別、年齡、腺樣體肥大程度、有無變應性鼻炎、有無其他合并癥（分泌性中耳炎、慢性鼻竇炎、呼吸睡眠暫停綜合征）等資料并進行比較，通過多因素logistic回歸分析影響AH患兒CysLTR1表達的危險因素。

結果 免疫組化染色結果顯示，CysLTR1在71例AH患兒腺樣體組織中均有表達，高表達組患兒的腺樣體肥大程度、有無變應性鼻炎及有無其他合并癥與低表達組相比差異有顯著性（χ2=9.003～49.196，P＜0.05）。多因素logistic回歸分析顯示，重度腺樣體肥大、變應性鼻炎以及有其他合并癥均為影響AH患兒CysLTR1表達的獨立危險因素（P＜0.05）。

結論

CysLTR1在AH患兒腺樣體組織中表達與腺樣體肥大程度、有無變應性鼻炎及其他合并癥相關，且上述3指標為CysLTR1高表達的獨立危險因素。

［關鍵詞］ 鼻炎，變應性，季節性；增殖腺；肥大；受體，白三烯；免疫組織化學；因素分析，統計學

［中圖分類號］ R766.3??? ［文獻標志碼］ A

腺樣體是感染性疾病的“警示燈”[1]，在人體液和細胞免疫中發揮重要的作用[2]。當腺樣體過度增生時，可引起呼吸睡眠暫停綜合征、分泌性中耳炎、阻塞性鼻竇炎等并發癥[3]。引起腺樣體肥大（adenoid hypertrophy，AH）的重要原因是反復的慢性炎癥刺激，且AH的發生與變態反應性疾病密切相關[4]。因此早期診斷和治療變態反應性疾病，有助于減少腺樣體肥大的發生[5-6]。白三烯（LT）是參與變應性鼻炎、哮喘等氣道炎癥反應重要介質。在哮喘發病過程中，半胱氨酸白三烯受體1（CysLTR1）mRNA表達水平也明顯升高[7]。研究發現AH所致打鼾兒童的外周血B、T細胞CysLTR呈較高表達[8]。陳榮等[9]研究也發現，特應性體質感染后咳嗽患兒的血清LT水平顯著高于非特應性體質的患兒。手術是AH患兒首選治療方式[10]，有中耳炎、鼻-鼻竇炎病史以及合并過敏性疾病的AH患兒手術以后復發率比較高[11-12]，因此積極治療腺樣體合并疾病及控制過敏性疾病發生也可減少腺樣體肥大的術后復發率[13]。本研究探究AH患兒腺樣體組織中CysLTR1表達特點，旨在為患兒的高效治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年10月1日—2021年10月1日于威海市立醫院耳鼻咽喉科行腺樣體切除術的患兒71例。患兒納入標準：①通過鼻內鏡檢查確診為AH，并符合手術指征，手術切除組織病理檢查結果亦符合AH；②術前1個月內未行抗過敏藥物治療。排除標準：①支氣管哮喘患兒；②患有特異反應性皮炎等其他嚴重系統性疾病患兒。

1.2 研究方法

1.2.1 患兒資料的收集 收集所有患兒的性別、年齡、AH程度、有無變應性鼻炎、有無其他合并癥（包括呼吸睡眠暫停綜合征、鼻竇炎、分泌性中耳炎）等一般資料及術后腺樣體組織的病理切片。

1.2.2 試劑與器材 CysLTR1兔抗人多克隆抗體、生物素標記的羊抗兔IgG、辣根酶標記的鏈酶親和素均購買于北京博奧森生物技術公司，SP免疫組化檢測試劑盒（兔）購買于上海鼎杰生物科技有限公司，二氨基聯苯胺/DAB染色試劑盒購買于上海雅吉生物科技公司，BMIX生物組織包埋機、冷凍臺機購買于日本櫻花公司，羅氏HE600HE染色機以及BenchMark ULTRA免疫組化儀均購買于美國羅氏公司。

1.2.3 免疫組化染色檢測AH患兒腺樣體組織中CysLTR1表達情況 將腺樣體組織切片通過脫蠟、復水處理，以0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液沖洗后，以30 g/L過氧化氫溶液阻斷內源性過氧化氫酶，用含體積分數0.10的山羊血清室溫濕盒封閉20 min，并滴加濃度1∶200的CysLTR1兔抗人多克隆抗體4 ℃下孵育過夜。然后使用生物素標記的羊抗兔IgG、辣根酶標記的鏈霉親和素按序各孵育20 min。滴加DAB顯色，然后行蘇木素復染、封片，于光學顯微鏡下觀察。陰性對照采用PBS代替一抗，其他步驟相同。在高倍鏡下于腺樣體組織的免疫組化切片上隨機選取上皮及生發中心以外的5個視野，采用Image ProPlus 6.0軟件計算陽性細胞數以及高倍鏡下視野總面積，CysLTR1表達情況以細胞陽性率表示，細胞陽性率=陽性細胞數/mm2，陽性率＜50%為低表達，以陽性率＞50%為高表達[14]。根據染色結果分為CysLTR1高表達組與低表達組。

1.3 統計學方法

采用SPSS 25.0軟件進行統計學分析。計數資料以例（率）表示，組間比較采用卡方檢驗，卡方檢驗有統計學意義的指標采用多因素logistic回歸進行危險因素分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結? 果

2.1 患兒腺樣體組織中CysLTR1表達情況

71例AH患兒中，男54例，女17例；年齡1～14歲，平均（5.45±3.25）歲；其中CysLTR1高表達組35例，低表達組36例。對所有患兒的腺樣體組織切片及陰性對照切片進行免疫組化染色，其中陰性對照切片未見染色（圖1A），CysLTR1陽性表達切片的細胞膜和細胞漿均呈現棕黃色染色（圖1B）。

2.2 兩組患兒腺樣體組織CysLTR1表達情況比較

高表達組患兒的AH程度、有無變應性鼻炎及有無其他合并癥與低表達組相比有顯著差異（χ2=9.003～49.196，P＜0.05），而性別、年齡與低表達組比較無顯著差異（P＞0.05）。見表1。

2.3 影響AH患兒腺樣體組織CysLTR1高表達的多因素logistic回歸分析

對兩組中差異顯著指標進行多因素logistic回歸分析，以CysLTR1在腺樣體組織的陽性率

表達作為因變量，將高陽性率表達賦值為1，而將低陽性率表達賦值為0，以AH程度、有無變應性鼻炎、有無其他合并癥三因素作為自變量，其結果顯示重度AH、有變應性鼻炎、有其他合并癥均為AH患兒腺樣體組織中CysLTR1高表達的獨立危險因素（P＜0.05）。見表2。

3 討? 論

組胺、LT等炎性分子是參與氣道炎癥反應的重要介質[15]。研究發現重度變應性鼻炎患者鼻氣道阻力在LTD4鼻激發試驗后顯著升高[16]。半胱氨酸白三烯（CysLTs）被認為是病毒感染激發哮喘發作的關鍵介質，LT受體拮抗劑孟魯司特能明顯減輕哮喘所致的嗜酸性粒細胞浸潤，并降低血清白細胞介素-13（IL-13）、IL-9和趨化因子3水平，從而減輕氣道高反應性[17]。云靖婷等[18]研究顯示，通過下調CysLTR1 mRNA的表達及干預CysLTR1介導的哮喘炎癥通路，可達到防治哮喘的目的。本研究中CysLTR1高表達組患兒的性別、年齡與低表達組無顯著差異，而隨著AH程度增高，CysLTR1表達水平顯著提高。這與既往研究中腺樣體組織及外周血清中LT（LTB4、LTC4）水平的高低與AH程度呈正相關的結論一致[3]，表明CysLTs參與了AH的形成。而CysLTs可能是嗜酸性粒細胞-嗜堿性粒細胞克隆單位形成的促進因子，還能引起鼻黏膜上皮內嗜酸性粒細胞浸潤及腺體分泌亢進[19]，故推測使用CysLTR1阻滯劑可能減少嗜酸性粒細胞浸潤，緩解炎癥反應的發生，進而減輕AH程度。

變應性鼻炎發生時，其鼻黏膜炎癥反應產生的分泌物及變應性鼻炎后期鼻后滴漏綜合征產生的分泌物反復刺激腺樣體，導致AH[20]。研究結果顯示CysLTR1在人鼻黏膜多種細胞（包括中性粒細胞、嗜酸性粒細胞等）中呈高表達[21]。CysLTs合成蛋白及CysLTR在季節性變應性鼻炎患者的鼻腔灌洗液中也呈現出高表達[22]。上述結果與本研究合并變應性鼻炎的AH患兒腺樣體組織中CysLTR1高表達的結果相一致，印證了變應性鼻炎促進AH發生的理論，因此在治療合并變應性鼻炎的AH患兒時，可首選CysLTR1阻滯劑。

本研究71例患兒中49例伴隨其他合并癥，其中包括呼吸睡眠暫停綜合征[23]、慢性鼻竇炎、分泌性中耳炎等。研究顯示上述疾病的發生發展與AH以及CysLTs水平相關[24-27]。本研究亦證實伴有其他合并癥的AH患兒CysLTR1的表達水平更高。有研究結果顯示，孟魯司特治療可使76%的呼吸睡眠暫停綜合征患兒腺樣體縮小，改善睡眠不適、打鼾以及張口呼吸等癥狀[28]。同時孟魯司特還可以抑制CysLTs信號轉導，降低細胞因子以及黏蛋白的表達，進而促進伴有鼻息肉的慢性鼻炎竇炎患者的恢復[29-30]。當AH合并分泌性中耳炎時，往往采取綜合治療的方式。

CysLTR1在AH患兒腺樣體組織中的表達與重度AH、變應性鼻炎及有其他合并癥相關，這與既往研究結果基本一致[31-32]，說明CysLTR1是參與AH形成的重要因素，研究CysLTR1的表達情況，對研究AH的形成機制有重要意義。本研究對上述因素進行了多因素logistic回歸分析，發現這3個因素是CysLTR1在AH患兒腺樣體組織中高表達的獨立危險因素。因此，臨床上對AH程度高、有變應性鼻炎及有其他合并癥的AH患兒，或可首選CysLTR1阻滯劑作為非手術治療的一線藥物。本研究也存在一定局限性，比如樣本量不足，病例對照研究的證據等級較低等，因此還需后續進行更深入研究以進一步探究和驗證以上結論。

倫理批準和知情同意：本研究涉及的所有試驗均已通過威海市立醫院倫理委員會的審核批準（文件號2023019）。所有試驗過程均遵照《臨床試驗質量管理規范》 的條例進行。受試對象或其親屬已經簽署知情同意書。

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