液相色譜法測定食品中合成著色劑

朱肖磊

摘 要：目的：建立一種液相色譜法測定食品中合成著色劑的方法。方法：用乙醇氨水溶液提取食品中的合成著色劑，經固相萃取柱凈化后，用液相色譜儀（配二極管陣列檢測器）測定，外標法定量。結果：11種合成著色劑在0.2～10.0 μg·mL-1線性關系良好，線性相關系數為0.999 4～1.000 0，加標回收率為94.2%～109.6%，相對標準偏差在0.55%～5.52%。檸檬黃、喹啉黃、日落黃、胭脂紅、新紅和赤蘚紅的檢出限均為0.5 mg·kg-1，定量限均為1.5 mg·kg-1；莧菜紅、誘惑紅、亮藍、酸性紅和靛藍的檢出限均為0.3 mg·kg-1，定量限均為1.0 mg·kg-1。結論：該方法的重復性好、靈敏度高、實用性強，可以同時測定食品中多種合成著色劑的含量。

關鍵詞：合成著色劑；液相色譜法；固相萃取

Determination of Synthetic Colorants in Food by Liquid Chromatography

ZHU Xiaolei

（Guangdong Dongguan Quality Supervision & Testing Center， Dongguan 523000， China）

Abstract： Objective： To establish a method for the determination of synthetic colorants in food by liquid chromatography. Method： The synthetic colorants in food were extracted with ethanol ammonia solution， purified by solid phase extraction column， determined by liquid chromatography （ with diode array detector ）， and quantified by external standard method. Result： The linear range of 11 synthetic colorants was 0.2～10.0 μg·mL-1， the linear correlation coefficient was 0.999 4～1.000 0， the recovery rate was 94.2%～109.6%， and the relative standard deviation was 0.55%～5.52%. The detection limits of tartrazine， quinoline yellow， sunset yellow， carmine， new red and erythrosine were 0.5 mg·kg-1， and the limits of quantification were 1.5 mg·kg-1. The limits of detection of amaranth， allura red， brilliant blue， acid red and indigo were 0.3 mg·kg-1， and the limits of quantitation were

1.0 mg·kg-1. Conclusion： The method has good repeatability， high sensitivity and strong practicability， and can simultaneously determine the content of various synthetic colorants in food.

Keywords： synthetic colorants; liquid chromatography; solid-phase extraction

著色劑在食品加工過程中可以改善食品的口感和外觀，但過量使用會對人們的健康造成不良影響。本文用乙醇氨水溶液提取11種食品中合成著色劑，經固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜儀測定（配有二極管陣列檢測器），使用外標法定量[1-2]。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

高效液相色譜儀（配有二極管陣列檢測器），安捷倫；天平、固相萃取裝置、氮氣濃縮裝置、天平、pH計。

1.2 材料與試劑

檸檬黃、喹啉黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、赤蘚紅、亮藍標準物質，

1 000 μg·mL-1；靛藍標準物質，1 000 μg·mL-1；甲醇，色譜純；石油醚，沸程30～60 ℃；無水乙醇；氨水，含量20%～25%；乙酸銨，色譜純；甲酸，含量98%。

1.3 實驗方法

1.3.1 溶液配制

氨水乙醇溶液：700 mL乙醇、4 mL氨水，溶于1 L水。5%甲醇水溶液：一定量甲醇用水稀釋定容至1 L。

1.3.2 樣品處理

稱取2 g充分混勻的液體試樣于50 mL離心管中，加入50 mL氨水乙醇溶液，渦旋1 min，5 000 r·min-1離心5 min，取上清液10 mL，50 ℃氮吹至3 mL左右，分3次加入10 mL的5%甲醇水溶液，得到待凈化液。

1.3.3 試樣凈化

活化固相萃取柱的活化方法用甲醇和水各

6 mL，依次活化，將柱體保持濕潤。立即將待凈化液以2～3 s/滴的流速加載到固相萃取柱上。用

6 mL 2%甲酸水溶液和甲醇淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，真空抽2 min至柱體近千。用2%氨化甲醇溶液6 mL洗脫，分兩次加入，每次3mL，流速低于

2～3 s/滴，收集洗脫液，于50 ℃氮氣濃縮至近千，準確加入pH=9.0的乙酸銨緩沖溶液2 mL溶解，溶液用針筒過濾器，孔徑0.45 μm的濾膜過濾，將最初的2～5滴濾液舍棄，待測液為續濾液。

1.3.4 標準系列工作液的配制

靛藍標準儲備液（1.0 mg·mL-1）：準確移取一定量靛藍標準物質于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，得到濃度為1.0 mg·mL-1的靛藍標準儲備液，現用現配。

混合標準中間液（50.0 μg·mL-1）：吸取檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、喹啉黃和赤蘚紅標準物質溶液

1 000 μg·mL-1以及靛藍標準儲備液（1.0 mg·mL-1）各5.00 mL于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得到混合標準中間液（各合成著色劑濃度均為

50.0 μg·mL-1），現用現配。

標準系列工作液：精密移取一定量混合標準中間液（50.0 μg·mL-1），配制成濃度分別為0.2 μg·mL-1、0.5 μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1、5.0 μg·mL-1和10.0 μg·mL-1的工作液。以標準系列工作液濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

1.3.5 儀器條件

色譜柱：BetasilTM C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），

設置柱溫箱溫度為30 ℃，進樣體積10 μL，二極管陣列檢測器波長范圍（400～800 nm），其中檸檬黃、喹啉黃檢測波長為415 nm，新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅和赤蘚紅檢測波長為520 nm，靛藍、亮藍檢測波長為610 nm。洗脫條件見表1。

1.3.6 樣品測試

將試樣注入液相色譜中，按上述儀器條件檢測，待測液中各物質濃度的計算公式為

（1）

式中：X為試樣中合成著色劑的含量，g·kg-1；c為由曲線計算得到的待測液中合成著色劑濃度，μg·mL-1；V1為凈化洗脫后的樣品最終定容體積，mL；V2為提取液體積，mL；V3為用于凈化分取的樣品提取液的體積，mL；m為試樣的取樣量，g；1 000為換算系數。

2 結果與分析

2.1 標準曲線

11種著色劑的標準曲線方程、線性范圍、相關系數見表2。

2.2 檢出限和定量限

稱取空白樣品2 g，加入一定量混合標準物質，得到濃度分別為0.3 mg·kg-1和1.0 mg·kg-1的莧菜紅、誘惑紅、亮藍1、亮藍2、酸性紅、靛藍，濃度分別為0.5 mg·kg-1和1.5 mg·kg-1的檸檬黃、新紅、胭脂紅、日落黃、喹啉黃1、喹啉黃2、喹啉黃3、喹啉黃4、赤蘚紅[3-4]。

按照前處理過程制備樣液，上機進行實測，分別驗證不同著色劑的信噪比是否滿足方法要求，驗證結果見表3、表4。由表3、表4可知，檸檬黃、新紅、胭脂紅、日落黃、喹啉黃1、喹啉黃2、喹啉黃3、喹啉黃4、赤蘚紅的檢出限均為0.5 mg·kg-1，定量限均為1.5 mg·kg-1；莧菜紅、誘惑紅、亮藍1、亮藍2、酸性紅、靛藍的檢出限均為0.3 mg·kg-1，定量限均為1.0 mg·kg-1。

2.3 加標回收率及精密度

為了評價方法的正確度和重復性，在空白樣品中進行3個濃度水平（2.5 mg·kg-1、5.0 mg·kg-1、

50.0 mg·kg-1）的加標回收實驗，每個濃度水平進行6次重復實驗，按照標準方法進行前處理和測定，得出加標回收率及相對標準偏差[5]（見表5）。由表5可知，11種著色劑的回收率和相對標準偏差均滿足方法分析要求。

2.4 實際樣品分析

以配制酒作為實際樣品進行檢測，實際樣品中11種著色劑均未檢出。

3 結論

本文建立了一種使用液相色譜同時測定食品中的11種合成著色劑含量的方法。該方法簡化了樣品預處理步驟，重復性好、檢出限低，加標回收率也滿足分析方法的測定要求，證明本方法可用于食品中合成著色劑的檢測。

參考文獻

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