酶抑制率法檢測蔬菜中農藥殘留

陳立燦 念樹芬

摘 要：采用酶抑制率法對7個大類、31個品種1 025批次蔬菜樣品進行快速檢測，以了解蔬菜農藥殘留現狀。結果顯示，1 025批次樣品農藥殘留均未實際超標，但有49個批次疑似超標，占總檢測批次的4.8%，其中油菜疑似超標率最高，為16.7%。酶抑制率法具有操作簡便、成本低廉、靈敏度高和檢測速度快等特點，適用于基層蔬菜農藥殘留快速檢測。

關鍵詞：酶抑制率法；蔬菜；農藥殘留；檢測

Enzyme Inhibition Rate Method for Detecting Pesticide Residues in Vegetables

CHEN Lican， NIAN Shufen*

（Luoping County Agricultural Environmental Protection Monitoring Station， Luoping 655800， China）

Abstract： The enzyme inhibition rate method was used to rapidly detect 1 025 batches of vegetable samples in 7 categories and 31 varieties to understand the current status of pesticide residues in vegetables. The results showed that none of the 1 025 batches of samples actually exceeded the standard for pesticide residues， but 49 batches were suspected of exceeding the standard， accounting for 4.8% of the total tested batches. Among them， rapeseed plant had the highest suspected over-standard rate at 16.7%. The enzyme inhibition rate method has the characteristics of simple operation， low cost， high sensitivity and fast detection speed， and is suitable for rapid detection of pesticide residues in grass-roots vegetables.

Keywords： enzyme inhibition rate method; vegetable; pesticide residues; detection

農藥殘留會對公眾健康構成嚴重威脅，因此快速準確地檢測蔬菜中的農藥殘留量至關重要。傳統的檢測方法如氣相色譜法[1]、高效液相色譜法[2-3]成本高、耗時長。為了滿足市場需求，快速檢測技術得以發展，其中最具代表性的是酶抑制率法。酶抑制率法是一種生物化學檢測方法，可用于檢測蔬菜中的農藥殘留。酶抑制率法是利用乙酰膽堿酯酶分解乙酰膽堿，產物與顯色劑反應生成黃色物質，通過分光光度計測量波長412 nm處的吸光度，計算農藥對乙酰膽堿酯酶的抑制率，判斷蔬菜中農藥殘留是否超標。本次實驗應用酶抑制率法對蔬菜中的農藥殘留進行測定，并分析結果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2023年，羅平縣農產品質量安全檢驗檢測站完成1 025批次蔬菜的快速定性檢測，樣品來自長底布依族鄉、羅雄街道、臘山街道、九龍街道、板橋鎮和馬街鎮的種植基地和合作社。蔬菜樣品涵蓋7個大類31個品種，包括葉菜類（12個品種）、茄果類（3個品種）、瓜類（5個品種）、甘藍類（3個品種）、蔥蒜類（2個品種）、根莖類（5個品種）和豆類（1個品種）。其中，葉菜類285批次（占27.8%）、茄果類198批次（占19.3%）、瓜類131批次（占12.8%）、甘藍類127批次（占12.4%）、蔥蒜類124批次（占12.1%）、根莖類107批次（占10.4%）、豆類53批次（占5.2%）。

1.2 儀器與試劑

實驗所需儀器有HHX-SJ系列農藥殘留檢測儀（廈門海葒興儀器有限公司）、SK8200H超聲波清冼儀（上海科導超聲儀器有限公司）、HC-3018高速離心機（安徽中科中佳科學儀器有限公司）、XW-2型微型振蕩器、電子石英定時器（姜堰區普康醫療器械廠）和可調式移液器。

實驗所需試劑為有機磷與氨基甲酸酯類農藥殘留檢測試劑（廈門海葒興儀器有限公司）。試劑由農藥殘留檢測緩沖液、顯色劑、底物和酶試劑組成，有效期為12個月，需要2～8 ℃冷藏保存。

1.3 試驗方法

1.3.1 試劑配制

緩沖液的配制：將農藥殘留檢測緩沖液小袋中的白色顆粒狀試劑全部倒入清潔的燒杯中，使用500.0 mL娃哈哈飲用純凈水分5次溶解試劑，將其引入500 mL的容量瓶中并確保達到刻度線，搖勻。室溫下保存以供后續使用。

底物的配制：向標明農藥殘留檢測底物的小塑料瓶中加入5.2 mL娃哈哈飲用純凈水，確保底物完全溶解。需要冷藏保存，并避免冷凍結冰。

顯色劑的配制：顯色劑已經預先配制好，只需保存在冰箱的冷藏室（0～5 ℃），避免冷凍結冰。

酶試劑的配制：向標注為農藥殘留檢測酶試劑的小塑料瓶中加入5.0 mL娃哈哈飲用純凈水，確保酶試劑完全溶解，溶解后的酶試劑應在2～4 ℃環境下冷藏保存，以保持其穩定性和活性。

1.3.2 樣液制備及注意事項

獲取各種蔬菜后，先擦去表面泥土，然后根據蔬菜種類選擇取樣方式：葉菜剪成1.0 cm寬，塊根菜取1.0 cm表皮。稱取2.0 g蔬菜樣品放入25 mL塑料螺口平底離心管中，加10.0 mL緩沖液，擰緊蓋子后搖動，確保緩沖液充分洗脫農藥。放入超聲波清冼儀中超聲提取5 min，若浸提液清澈，直接轉移至離心管；若混濁，需離心至清澈。若色素干擾嚴重，需脫色：將浸提液轉至10 mL塑料離心管中，加活性炭，振蕩5 min，靜置5～10 min，離心去除活性炭后，用于后續實驗。

注意事項：制備樣液時，確保器具清潔，避免污染；蔬菜樣品需完全浸泡在緩沖液中；離心時確保離心管平衡；根據實際情況調整活性炭用量；特定蔬菜（如蔥、蒜、蘿卜、韭菜等）采取整株浸提；詳細記錄每一步操作和結果。

1.3.3 對照測試

樣品測定前，將緩沖液、底物、顯色劑、酶試劑從冰箱中取出，恢復至室溫備用。儀器開機穩定運行30 min后，進行對照測試。使用精確度高的移液器，在微孔板的第1列孔條內分別加入20.0 μL酶溶液。隨后，使用另一只移液器，向每個孔中準確加入250.0 μL的緩沖液。將微孔板放入儀器中，啟動振板功能10 s充分混勻溶液。靜置反應10 min，靜置期間使用電子石英定時器精準計時。待靜置反應完成后，迅速加入10.0 μL顯色劑和10.0 μL底物。底物是酶反應的關鍵成分，與顯色劑一同參與反應，產生明顯的顏色變化。底物加入后，應立即將微孔板放回儀器中，并按下“對照”鍵進行測試。儀器自動將第1列作為對照液、其他列作為樣品液進行測試，并自動保存當前的對照值數據。若測量后續樣品時，實驗環境及條件未發生顯著變化，則可直接調用先前保存的對照值，無須重復進行對照測量。只有當1 min內對照吸光度變化值ΔA＞0.1，3 min內對照吸光度變化值ΔA＞0.3，酶試劑才能繼續使用。

1.3.4 樣品測定

使用精確度高的移液器，在微孔板的孔條內加入20.0 μL酶溶液。使用另一只移液器，在每個孔中加入250.0 μL的樣品溶液。然后放入儀器中，啟動振板功能振動10 s混勻。靜置反應10 min，靜置期間使用電子石英定時器精確計時，確保酶與樣品溶液有足夠的時間充分反應。用移液器向每個孔中加入10.0 μL的顯色劑，隨后迅速加入10.0 μL的底物。底物加入后，立刻將微孔板放入儀器中，并按下“樣品”鍵，開始進行測量。測量結束后，儀器會顯示各項測量結果，包括抑制率及吸光度變化值。

1.3.5 結果判定

抑制率是判定檢測結果的重要指標，為評估樣品中農藥殘留情況提供了關鍵依據。根據《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速檢測》（GB/T 5009.199—2003）的規定[4]，抑制率≤40%的樣品判定為合格，表示農藥殘留量未超標；抑制率在40%～50%的樣品被視為疑似農藥殘留超標，表示蔬菜中可能存在低毒農藥，對于此類樣品，需要至少復檢一次，以確保檢測結果準確無誤；抑制率≥50%的樣品直接判定為農藥超標，表明蔬菜中存在高劑量的有機磷或氨基甲酸酯類農藥，對于此類樣品，需要進行多次檢測（至少2次以上），以確保檢測結果的準確性。

2 結果與分析

2.1 不同蔬菜品種的農藥殘留檢測情況

由表1可知，所檢測的蔬菜樣品均達到合格標準，并未出現農藥殘留嚴重超標的情況。在葉菜類蔬菜中，油菜的疑似超標率相對較高，達到16.7%，其次是芫荽、小米菜、茴香、菠菜和板藍根等蔬菜；蔥蒜類蔬菜中，蔥的疑似超標率最高，為7.0%；豆類蔬菜中，四季豆的疑似超標率為5.7%；瓜類蔬菜中，南瓜的疑似超標率稍高，為5.5%；茄果類蔬菜中，辣椒的疑似超標率最高，為5.3%；甘藍類蔬菜中，結球甘藍的疑似超標率最高，為4.7%；根莖類蔬菜中，白蘿卜的疑似超標率最高，為2.6%。雖然部分蔬菜存在疑似超標的情況，但總體而言，本次檢測的蔬菜樣品質量仍然保持在安全可控的范圍內。

2.2 不同蔬菜類別的農藥殘留檢測情況

由表2可知，檢測的各類蔬菜農藥殘留情況相對較好，沒有出現實際超標的現象。在總計1 025個檢測批次中，僅有49個批次疑似存在農藥殘留超標，占總數的4.8%。

3 結論

酶抑制率法具有快速、低成本和操作簡便的優勢[5-6]。本文采用酶抑制率法對1 025批次蔬菜樣品農藥殘留進行快速檢測，結果顯示，蔬菜樣品農藥殘留均未實際超標，但有49批次樣品疑似超標，占總檢測批次的4.8%，其中油菜疑似超標率最高，為16.7%。雖然本次檢測未發現實際超標現象，但疑似超標的情況仍然不容忽視。為進一步提升酶抑制率法檢測結果的精準度和可信度，需嚴格遵循實驗操作步驟，確保試劑配制和樣液制備的精確性。同時，實施對照測試和樣品重復檢測也是提高檢測可靠性的重要手段。酶抑制率法不僅縮短了檢測時間，降低了經濟成本，還有效克服了傳統檢測方的某些弊端，可為保障食品安全提供有力的技術

支撐[7]。

參考文獻

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[2]吳定芳，王磊，何茫茫，等.高效液相色譜法測定蔬菜中19種氨基甲酸酯類農藥的殘留量[J].理化檢驗（化學分冊），2020，56（2）：142-147.

[3]李婷婷，李玲，朱璐.高效液相色譜法測定蔬菜中氨基甲酸酯類農藥殘留分析[J].現代食品，2021（15）：139-140.

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