急性腦梗死病人血清circ_HECTD1表達與病情嚴重程度的關系

張微 侯曉強 楊娜 楊秀平張微 侯曉強 楊娜 楊秀平

摘要目的：探討急性腦梗死（ACI）病人血清環狀RNAHECT結構域E3泛素蛋白連接酶1（circ_HECTD1）表達情況，分析circ_HECTD1與病情嚴重程度的關系。方法：選取2020年9月—2021年11月開灤總醫院收治的ACI病人122例為ACI組，另選同期于本院體檢的健康志愿者122名為對照組。收集基本臨床資料，采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRTPCR）法檢測血清circ_HECTD1水平。Pearson法分析ACI病人血清circ_HECTD1水平與臨床資料及美國國立衛生研究院卒中量表（NIHSS）評分的相關性；多因素Logistic回歸分析ACI嚴重程度的影響因素。結果：ACI組高血壓比例、空腹血糖、白介素（IL）6、IL1β、C反應蛋白（CRP）、白細胞計數（WBC）及circ_HECTD1水平均高于對照組（P＜0.05）；中度組、重度組年齡、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于輕度組（P＜0.05）；多因素Logistic回歸分析顯示，糖尿病、IL6、IL1β及circ_HECTD1均是ACI病人中重度神經缺損的危險因素（P＜0.05）；血清circ_HECTD1水平與空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS評分均呈正相關（P＜0.05）。結論：ACI病人血清circ_HECTD1水平升高，且隨病情加重而增加，是中重度神經缺損的危險因素。

關鍵詞急性腦梗死；環狀RNAHECT結構域E3泛素蛋白連接酶1；病情嚴重程度；白細胞介素；超敏C反應蛋白

doi：10.12102/j.issn.16721349.2024.06.035

急性腦梗死（ACI）為常見的腦血管疾病，又稱為缺血性腦卒中，嚴重影響病人的生活質量，給家庭和社會帶來沉重的負擔［1］。ACI是由于腦供血障礙、缺血、缺氧導致局部腦組織缺血壞死或軟化所致，占所有腦卒中病例的80%，具有高殘疾率和死亡率［23］。目前，盡管在溶栓和神經保護劑等治療策略方面取得了較大進展，但嚴重ACI病人的治療效果仍不理想，且盡早評估ACI病人的病情嚴重程度對疾病的治療及預后非常重要［4］。環狀RNA（circRNA）代表一組獨特的非編碼轉錄物，其形成共價閉合環，不具有5′端帽子和3′端多聚腺苷酸尾結構［5］，circRNA在細胞質中含量豐富，進化上保守且相對穩定，這賦予了circRNA許多潛在功能［6］，事實上，許多circRNAs表達改變與各種腦血管疾病如缺血性腦卒中有著千絲萬縷的聯系［7］。Wu等［8］研究表明，高表達的circRNATLK1在ACI后的神經元損傷和神經功能缺損中發揮作用。早期研究表明，circRNAHECT結構域E3泛素蛋白連接酶1（circ_HECTD1）已被確定為高度特異性的circRNA，預測急性缺血性卒中復發風險的價值較高［9］。此外，敲低circ_HECTD1被證實可減輕腦缺血中的神經元損傷［10］，提示circ_HECTD1在ACI中具有重要作用。然而，circ_HECTD1在ACI中的表達變化及與ACI病情進展的關系尚未完全闡明。因此，本研究通過測定ACI病人血清circ_HECTD1的相對表達水平，并分析其與ACI病情嚴重程度的關系。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2020年9月—2021年11月我院收治的ACI病人，根據納入與排除標準篩選出122例作為ACI組，其中，男68例，女54例。另選同期122名于本院體檢的健康志愿者作為對照組，其中，男65名，女57名。ACI組納入標準：1）符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》［11］中ACI診斷標準；2）首次發病，發病至入院時間＜24h；3）臨床資料完整；4）病人或家屬知情同意。排除標準：1）合并惡性腫瘤或其他血液疾病者；2）肝腎功能嚴重不全者；3）精神疾病病人；4）不能配合研究者；5）有近期手術、感染史者。

1.2方法

1.2.1臨床資料收集

收集ACI病人及健康志愿者性別、年齡、高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒、白細胞介素（IL）6、IL1β、空腹血糖、三酰甘油（TG）、同型半胱氨酸（Hcy）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）、C反應蛋白（CRP）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）及白細胞計數（WBC）等資料。

1.2.2circ_HECTD1指標檢測

采集病人（入院翌日清晨）及健康者（體檢當日）空腹靜脈血5mL，于室溫下靜置15min，置于離心機中以3000r/min速率離心15min，取離心后上清液于無菌管，分為兩份，置于－80℃冰箱中保存待測。取一份血清樣本，室溫解凍，依據Trizol試劑（北京索萊寶科技有限公司提供）說明提取血清總RNA；測定總RNA純度及濃度，按照逆轉錄試劑盒（易錦生物提供）步驟逆轉錄，合成cDNA；采用ABI7500型實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRTPCR）儀（美國ABI公司）檢測血清中circ_HECTD1表達水平。以甘油醛3磷酸脫氫酶（GAPDH）為內參，引物序列：circ_HECTD1正向引物為5′CACGTGTTATCAGGGGCCT3′，反向引物為5′CGCCACCCTTGCTTTTCAT3′；GAPDH正向引物為5′GCACCACCAACTGCTTA3′，反向引物為5′GCCATCCACAGTCTTCT3′。各樣品重復3次，減小實驗誤差，2－△△Ct法（Ct為循環閾值）計算circ_HECTD1表達。

1.2.3IL6、IL1β、CRP檢測

另一份血清樣本用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測IL6、IL1β、CRP。各步操作均遵照試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司）說明書進行。

1.2.4分組

ACI組48h內依據美國國立衛生研究院卒中量表（NIHSS）進行評分，以評估病人神經功能缺損程度。根據NIHSS評分，分為輕度組（NIHSS評分＜4分，54例）、中度組（NIHSS評分4～15分，56例）、重度組（NIHSS評分＞15分，12例）。

1.3統計學處理

采用SPSS25.0軟件包進行統計學處理。定性資料采用χ2檢驗；符合正態分布的定量資料以均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，兩組間進一步比較采用SNKq檢驗；相關性分析采用Pearson法；采用多因素Logistic回歸分析ACI嚴重程度的影響因素。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1ACI組與對照組一般資料比較

ACI組高血壓比例、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于對照組（P＜0.05）。詳見表1。

2.2不同病情嚴重程度ACI病人一般資料比較

中度組、重度組年齡、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于輕度組（P＜0.05）。詳見表2。

2.3多因素Logistic回歸分析

以ACI病人神經功能缺損程度為因變量（輕度＝0，中重度＝1），將單因素分析中差異有統計學意義的指標作為自變量［年齡、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC及circ_HECTD1以實測值輸入，糖尿病（否＝0，是＝1）、吸煙（否＝0，是＝1）］，納入多因素Logistic回歸分析，結果顯示，糖尿病、IL6、IL1β及circ_HECTD1均是ACI病人中重度功能缺損的危險因素（P＜0.05）。詳見表3。

2.4血清circ_HECTD1水平與部分臨床資料及NIHSS評分的相關性

血清circ_HECTD1水平與空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS評分均呈正相關（r值分別為0.311，0.330，0.401，0.541，0.473，0.579，P均＜0.05）。詳見表4。

3討論

ACI發病率極高［2］，尤其近年來隨著老齡化的加劇和生活水平的提高，腦血管、糖尿病、高血壓等疾病的發病率逐步提升，腦血管疾病發病率及致殘率、致死率隨之增高［3，12］。因此，對于ACI嚴重程度的評估非常重要，可以給予相應治療，降低ACI的殘疾率和死亡率。

本研究顯示，ACI組高血壓比例及空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC水平均高于對照組，說明高血壓、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC可能與ACI的發病有關。高血壓負調節血管功能，動脈粥樣硬化與高血壓有關，而脂質代謝紊亂又與高血糖緊密相關，二者均可引起和加重腦梗死，導致腦組織損傷［13］。CRP、WBC、IL6、IL1β是炎癥反應的重要指標，其水平升高是造成神經元損傷的重要原因，參與ACI發病過程［14］。由于基因表達的調節效力和分子結構的特異性，circRNA已被證實是人類疾病中有前景的生物標志物［15］。相關研究證實circRNAs的失調可能參與腦梗死過程［1617］。本研究發現，ACI組血清circ_HECTD1水平高于對照組，與相關研究結果［12］具有一致性，說明circ_HECTD1與ACI的發生有關，circ_HECTD1高表達與腦梗死過程中不可逆的神經元損傷有關［18］，具體機制仍待進一步研究。

本研究分析不同ACI嚴重程度病人血清circ_HECTD1水平發現，病情越嚴重血清circ_HECTD1水平越高，提示circ_HECTD1與ACI疾病嚴重程度密切相關，且是ACI中度、重度神經功能缺損的危險因素，提示circ_HECTD1可能參與ACI的發展。Zhang等［18］研究表明，敲低circ_HECTD1可以改善氧葡萄糖剝奪/再灌注誘導的神經細胞損傷，推測circ_HECTD1可能通過調節神經細胞損傷參與ACI發展。ACI病人發病時，腦組織血氧嚴重不足，持續釋放大量氧自由基，神經細胞損失和凋亡嚴重［19］。本研究中，中重度組年齡、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于輕度組。多因素Logistic回歸分析顯示，糖尿病、IL6、IL1β、circ_HECTD1均是中重度神經缺損的危險因素。其可能原因：糖尿病病人空腹血糖水平升高，可加劇ACI病人腦組織缺氧缺血程度，導致病情進一步惡化［20］。另外，炎性因子IL6、IL1β也會加重ACI病人的腦組織血管內皮損傷，破壞血腦屏障平衡，造成梗死區水腫，進一步壓迫正常腦組織，加劇神經缺損，導致ACI病情惡化［21］。相關性分析結果表明，血清circ_HECTD1水平與空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS評分均呈正相關，提示circ_HECTD1可能通過間接調控血糖、炎癥等影響ACI的病情嚴重程度。

綜上所述，ACI病人血清circ_HECTD1水平升高，且隨病情加重呈增高趨勢，是中重度神經缺損的危險因素。但本研究納入樣本量較少，且集中監測某一時段問診病人，可能受環境條件影響，關于circ_HECTD1參與ACI病情進展的具體機制仍需進一步研究。

參考文獻：

［1］XUXY，FANGQ，HUANGW，etal.EffectofelectroacupunctureonneurologicaldeficitandactivityofclockandBmal1incerebralischemicrats［J］.CurrentMedicalScience，2020，40（6）：11281136.

［2］KOHSH，PARKHH.Neurogenesisinstrokerecovery［J］.TranslationalStrokeResearch，2017，8（1）：313.

［3］MILLERJB，MERCKLH，WIRACR，etal.Theadvancedreperfusionera：implicationsforemergencysystemsofischemicstrokecare［J］.AnnalsofEmergencyMedicine，2017，69（2）：192201.

［4］SHIBATAK，HASHIMOTOT，MIYAZAKIT，etal.Thrombolytictherapyforacuteischemicstroke：pastandfuture［J］.CurrentPharmaceuticalDesign，2019，25（3）：242250.

［5］KRISTENSENLS，ANDERSENMS，STAGSTEDLVW，etal.Thebiogenesis，biologyandcharacterizationofcircularRNAs［J］.NatureReviewsGenetics，2019，20（11）：675691.

［6］GREENEJ，BAIRDAM，BRADYL，etal.CircularRNAs：biogenesis，functionandroleinhumandiseases［J］.FrontiersinMolecularBiosciences，2017，4：38.

［7］ZUOL，ZHANGL，ZUJ，etal.CirculatingcircularRNAsasbiomarkersforthediagnosisandpredictionofoutcomesinacuteischemicstroke［J］.Stroke，2020，51（1）：319323.

［8］WUFF，HANB，WUSS，etal.CircularRNATLK1aggravatesneuronalinjuryandneurologicaldeficitsafterischemicstrokeviamiR3353p/TIPARP［J］.TheJournalofNeuroscience，2019，39（37）：73697393.

［9］PENGXP，JINGP，CHENJ，etal.TheroleofcircularRNAHECTD1expressionindiseaserisk，diseaseseverity，inflammation，andrecurrenceofacuteischemicstroke［J］.JournalofClinicalLaboratoryAnalysis，2019，33（7）：e22954.

［10］DAIQD，MAY，XUZH，etal.DownregulationofcircularRNAHECTD1inducesneuroprotectionagainstischemicstrokethroughthemicroRNA133b/TRAF3pathway［J］.LifeSciences，2021，264：118626.

［11］中華醫學會神經病學分會，中華醫學會神經病學分會腦血管病學組.中國急性缺血性腦卒中診治指南2018［J］.中華神經科雜志，2018，51（9）：666682.

［12］龍章玲，胡曉.阿司匹林和氯吡格雷在急性腦梗死中的應用進展［J］.中國醫藥，2019，14（8）：12621265.

［13］LVT，JIANGL，KONGLX，etal.MicroRNA29c3pactsasatumorsuppressorgeneandinhibitstumorprogressioninhepatocellularcarcinomabytargetingTRIM31［J］.OncologyReports，2020，43（3）：953964.

［14］顧寶東，王利，吳常征，等.超敏C反應蛋白對急性非致殘性缺血性卒中早期復發風險的相關性及預測價值研究［J］.臨床神經病學雜志，2020，33（4）：250253.

［15］EBBESENKK，HANSENTB，KJEMSJ.InsightsintocircularRNAbiology［J］.RNABiology，2017，14（8）：10351045.

［16］LUD，HOES，MAIHC，etal.IdentificationofbloodcircularRNAsaspotentialbiomarkersforacuteischemicstroke［J］.FrontiersinNeuroscience，2020，14：81.

［17］WANGSW，LIUZ，SHIZS.NoncodingRNAinacuteischemicstroke：mechanisms，biomarkersandtherapeutictargets［J］.CellTransplantation，2018，27（12）：17631777.

［18］ZHANGZD，HEJB，WANGBL.CircularRNAcirc_HECTD1regulatescellinjuryaftercerebralinfarctionbymiR27a3p/FSTL1axis［J］.CellCycle，2021，20（9）：914926.

［19］WUH，ZHANGW，WUZR，etal.MiR29c3pregulatesDNMT3BandLATS1methylationtoinhibittumorprogressioninhepatocellularcarcinoma［J］.CellDeath&Disease，2019，10（2）：48.

［20］李晶瑩，趙偉東.糖尿病引發血腦屏障結構與功能失調機制的研究進展［J］.中國老年學雜志，2022，42（9）：22762282.

［21］田強，沈云峰，張洪波，等.脂蛋白相關磷脂酶A2和中性粒細胞/淋巴細胞比值與急性腦梗死嚴重程度和預后的相關性［J］.中國老年學雜志，2021，41（6）：11381142.

（收稿日期：20220824）

（本文編輯郭懷印）

作者單位開灤總醫院（河北唐山063000）

通訊作者侯曉強，Email：pqmqh39@163.com

引用信息張微，侯曉強，楊娜，等.急性腦梗死病人血清circ_HECTD1表達與病情嚴重程度的關系［J］.中西醫結合心腦血管病雜志，2024，22（6）：11391142.