急性心肌梗死病人血清circCDYL表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

朱小琴 鄧仁生

摘要目的：檢測急性心肌梗死（AMI）病人血清環(huán)狀RNACDYL（circCDYL）表達(dá)水平，探討其與預(yù)后的關(guān)系。方法：選取2018年1月—2020年6月恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院收治的108例AMI病人作為AMI組，另選取同期健康體檢志愿者110名作為對照組。采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRTPCR）法檢測受試者血清circCDYL表達(dá)水平。隨訪2年，根據(jù)circCDYL表達(dá)水平分為低表達(dá)組（53例）和高表達(dá)組（55例），比較兩組隨訪期間主要不良心血管事件（MACE）發(fā)生情況，采用KaplanMeier生存曲線分析血清circCDYL與AMI病人總MACE發(fā)生率的關(guān)系；根據(jù)隨訪期間預(yù)后情況分為MACE組（48例）和非MACE組（60例），采用Logistic回歸分析AMI病人預(yù)后的影響因素；采用受試者工作特征（ROC）曲線評估血清circCDYL對AMI病人預(yù)后的預(yù)測價值。結(jié)果：AMI組血清circCDYL表達(dá)水平明顯低于對照組（P＜0.05）。circCDYL低表達(dá)組惡性心律失常發(fā)生率、心肌梗死復(fù)發(fā)率明顯高于高表達(dá)組（P＜0.05）。KaplanMeier生存曲線分析顯示，circCDYL低表達(dá)組總MACE發(fā)生率明顯高于circCDYL高表達(dá)組（χ2＝17.732，P＜0.001）。多因素Logistic回歸分析表明，circCDYL是AMI病人預(yù)后的獨(dú)立保護(hù)因素（P＜0.05）。ROC曲線結(jié)果顯示，血清circCDYL預(yù)測AMI病人不良預(yù)后的曲線下面積（AUC）為0.855，敏感度為93.8%。結(jié)論：AMI病人血清circCDYL表達(dá)水平降低，與AMI病人MACE密切相關(guān)，對AMI病人預(yù)后具有較高的預(yù)測價值。

關(guān)鍵詞急性心肌梗死；環(huán)狀RNACDYL；主要不良心血管事件；預(yù)后

doi：10.12102/j.issn.16721349.2024.06.026

急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction，AMI）是冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂后形成血栓阻塞血管引發(fā)的心肌缺血性壞死［12］。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷進(jìn)步，臨床對于AMI的治療手段得到充分改善，但其總體死亡率依然呈不斷升高的趨勢［3］。經(jīng)皮冠狀動脈介入（PCI）是AMI的主要治療手段，有助于解除血管內(nèi)部狹窄，恢復(fù)血流，但部分病人接受PCI后發(fā)生主要不良心血管事件（MACE），預(yù)后情況較差［4］。環(huán)狀RNA（circRNAs）是一種閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的內(nèi)源性非編碼RNA，在疾病中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。Wu等［5］分析出多個在AMI中異常表達(dá)的circRNA。circCDYL有助于維持心肌細(xì)胞的正常發(fā)育［6］。一項(xiàng)與心肌梗死相關(guān)的動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)circCDYL能夠促進(jìn)心肌梗死模型小鼠的心肌細(xì)胞再生［7］，由此推測circCDYL在AMI病人中也呈現(xiàn)異常表達(dá)。本研究通過檢測AMI病人血清circCDYL表達(dá)水平，探討血清circCDYL表達(dá)與AMI病人PCI術(shù)后MACE發(fā)生的關(guān)系及對預(yù)后評估的臨床價值。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2018年1月—2020年6月我院收治的108例AMI病人作為AMI組，男70例，女38例；年齡42～75（60.50±7.80）歲；體質(zhì)指數(shù)（BMI）為（23.08±3.29）kg/m2。另選取同期健康體檢志愿者110名作為對照組，男65名，女45名；年齡41～74（60.90±8.01）歲；

BMI為（22.78±3.30）kg/m2。兩組性別、年齡、BMI比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究獲得本院倫理委員會批準(zhǔn)，受試者及其家屬對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)

1）AMI病人符合《急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南》［8］中急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）或《不穩(wěn)定性心絞痛和非ST段抬高心肌梗死診斷與治療指南》［9］中急性非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)相關(guān)檢查確診；2）首次發(fā)病；3）入院后及時接受PCI手術(shù)治療；4）臨床資料完整。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)

1）患有先天性心臟病、風(fēng)濕性心臟病等其他類型心臟病病人；2）合并腫瘤、感染性疾病、自身免疫缺陷病病人；3）既往接受過PCI手術(shù)或冠狀動脈搭橋治療病人；4）不符合PCI手術(shù)指征病人；5）肝腎等重要器官嚴(yán)重功能障礙病人。

1.4方法

1.4.1一般資料收集

病人入院后，收集病人一般資料，包括年齡、性別、BMI、吸煙、高血壓、高脂血癥、糖尿病、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、白細(xì)胞計數(shù)（WBC）、肌酸激酶同工酶（CKMB）、心肌肌鈣蛋白I（cTnI）、D二聚體（DD）、心肌梗死類型、Killip分級。

1.4.2樣本收集

收集AMI病人入院時及健康體檢志愿者體檢當(dāng)日肘靜脈血5mL，4℃下3000r/min離心15min，分離血清，儲存于－80℃冰箱冷凍待測。

1.4.3實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRTPCR）法檢測血清circCDYL表達(dá)水平

使用TRIzol試劑（15596026，賽默飛世爾科技公司）提取各組血清中總RNA，使用NanoDropND12000分光光度計（美國Thermo公司）評估總RNA濃度和純度。使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（RRO47AA，日本Takara公司）反轉(zhuǎn)錄成cDNA，使用SYBRGreenRealtimePCRMasterMix（QPK201，北京索萊寶科技有限公司）、qRTPCR儀（CFX384，美國BioRad公司）擴(kuò)增cDNA，采集循環(huán)閾值（CT值）。擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性30s，94℃變性5s，60℃退火15s，72℃延伸10s，擴(kuò)增45個循環(huán)。以甘油醛3磷酸脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參，引物序列：circCDYL正向引物序列為5′CTTAGCTGTTAACGGGAAA3′，反向引物序列為5′CTGTTGAAGTCGTGGATGT3′；GAPDH正向引物序列為5′ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG3′，反向引物序列為5′GCCATCACGCCACAGTTTC3′。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司提供。采用2－ΔΔCt方法計算circCDYL的表達(dá)量。

1.4.4隨訪

AMI病人接受PCI術(shù)后以電話或門診復(fù)查的方式進(jìn)行隨訪，第1年每2個月進(jìn)行1次隨訪，之后每6個月進(jìn)行1次隨訪，隨訪時間為24個月。病人發(fā)生惡性心律失常、心力衰竭、心源性死亡、復(fù)發(fā)心肌梗死等MACE情況定義為預(yù)后不良，病人出現(xiàn)預(yù)后不良事件為終點(diǎn)時間。本研究隨訪截至2022年6月。隨訪期間未出現(xiàn)失訪病例，隨訪率100%。根據(jù)AMI病人預(yù)后情況分為MACE組（48例）、非MACE組（60例）。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS25.0軟件分析數(shù)據(jù)。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組比較采用t檢驗(yàn)；定性資料采用χ2檢驗(yàn)。KaplanMeier生存曲線分析血清circCDYL表達(dá)水平與AMI病人總MACE發(fā)生率的關(guān)系；Logistic回歸分析AMI病人預(yù)后的影響因素；受試者工作特征（ROC）曲線評價血清circCDYL對AMI病人預(yù)后的預(yù)測價值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1AMI組、對照組血清circCDYL表達(dá)水平比較

AMI組血清circCDYL表達(dá)水平明顯低于對照組（P＜0.05）。詳見表1。

2.2circCDYL高、低表達(dá)組病人MACE發(fā)生情況比較及circCDYL表達(dá)水平與AMI病人總MACE發(fā)生率的關(guān)系

以circCDYL表達(dá)水平平均值0.68將AMI組分為低表達(dá)組（＜0.68，53例）、高表達(dá)組（≥0.68，55例）。低表達(dá)組發(fā)生MACE共35例，高表達(dá)組發(fā)生MACE共13例。兩組心力衰竭、心源性死亡發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），低表達(dá)組惡性心律失常、心肌梗死復(fù)發(fā)率高于高表達(dá)組（P＜0.05）。KaplanMeier生存曲線分析顯示，circCDYL低表達(dá)組總MACE發(fā)生率高于circCDYL高表達(dá)組（χ2＝17.732，P＜0.001）。詳見表2、圖1。

2.3不同預(yù)后病人臨床資料比較

MACE組、非MACE組年齡、性別、BMI、吸煙、高血壓、高脂血癥、糖尿病、TC、TG、HDLC、LDLC、Scr、BUN、心肌梗死類型比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），MACE組WBC、CKMB、cTnI、DD水平及Killip≥3級比例高于非MACE組（P＜0.05），circCDYL表達(dá)水平低于非MACE組（P＜0.05）。詳見表3。

2.4AMI病人預(yù)后影響因素的Logistic回歸分析

以病人預(yù)后情況（發(fā)生MACE＝1，未發(fā)生MACE＝0）為因變量，以表3中具有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)為自變量，進(jìn)行Logistic回歸分析。單因素Logistic回歸分析結(jié)果表明，WBC、CKMB、cTnI、Killip分級（≥3級）、circCDYL是AMI預(yù)后的影響因素（P＜0.05）；多因素Logistic回歸分析結(jié)果表明，Killip分級（≥3級）是AMI預(yù)后情況的獨(dú)立危險因素（P＜0.05），circCDYL是AMI預(yù)后情況的獨(dú)立保護(hù)因素（P＜0.05）。詳見表4。

2.5血清circCDYL對AMI病人預(yù)后的預(yù)測價值

ROC曲線結(jié)果顯示，血清circCDYL預(yù)測AMI病人不良預(yù)后的曲線下面積（AUC）為0.855，95%CI（0.783，0.926），截斷值為0.742，敏感度為93.8%，特異度為68.3%，約登指數(shù)為0.621。詳見圖2。

3討論

中國等發(fā)展中國家與AMI相關(guān)的死亡病人占全球缺血性心臟病死亡病人的80%以上［10］。AMI病情進(jìn)展迅速，往往因送醫(yī)不及時延誤救治，嚴(yán)重者造成死亡，而得以存活的病人往往面臨著預(yù)后發(fā)生MACE的情況。臨床急需尋找一種能夠有效預(yù)測病人MACE發(fā)生的生物標(biāo)志物以幫助臨床對癥治療并采取干預(yù)措施改善預(yù)后。

circRNA不受RNA外切酶的影響，表達(dá)更穩(wěn)定且不易發(fā)生降解，在真核生物中分布廣泛，可以充當(dāng)miRNA或與RNA結(jié)合蛋白（RBP）結(jié)合發(fā)揮作用［11］。研究表明，多種circRNA在AMI發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用［1214］。本研究中，AMI病人血清circCDYL表達(dá)水平明顯低于對照組，Zhang等［7］通過動物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)，circCDYL在AMI小鼠的心臟組織和心肌細(xì)胞中表達(dá)明顯降低，提示circCDYL對AMI具有抑制作用。Siede等［6］通過RNA測序發(fā)現(xiàn)，circCDYL水平隨著心肌細(xì)胞的發(fā)育過程逐漸升高，表明circCDYL對心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用。研究表明，在梗死心肌中，circRNA能夠海綿化miRNAs/RBP，形成circRNAmiRNA/RBP調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在心肌梗死中發(fā)揮不同作用［15］。circCDYL即是通過靶向miR47935p/淀粉樣前體蛋白通路來促進(jìn)AMI小鼠的心肌細(xì)胞增殖和心肌血管生成［6］。但其在AMI病人中是否通過相同的機(jī)制發(fā)揮作用需要進(jìn)一步的研究。然而，通過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，circCDYL在不同疾病中所發(fā)揮的作用不同，在腎母細(xì)胞瘤組織中，circCDYL表達(dá)下調(diào)，在疾病中發(fā)揮抑制作用［16］，而在乳腺癌等相關(guān)癌癥病人中表達(dá)上調(diào)，對疾病就有促進(jìn)作用［17］，可能與不同疾病發(fā)病機(jī)制不同相關(guān)。

目前臨床對于AMI最有效的治療方法是及時進(jìn)行PCI，以實(shí)現(xiàn)再灌注，但PCI術(shù)后容易出現(xiàn)的MACE也不能忽視。本研究中，AMI病人血清circCDYL低表達(dá)組心力衰竭、心源性死亡發(fā)生率與高表達(dá)組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，低表達(dá)組惡性心律失常發(fā)生率、心肌梗死復(fù)發(fā)率明顯高于高表達(dá)組，可能與AMI病人的個體差異具有一定的關(guān)系，KaplanMeier生存曲線分析顯示，circCDYL低表達(dá)組總MACE發(fā)生率明顯高于circCDYL高表達(dá)組，可能是由于血清circCDYL對心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用，circCDYL低表達(dá)的AMI病人心肌細(xì)胞受損更嚴(yán)重，在PCI術(shù)后心肌受損的程度進(jìn)一步加重，因此發(fā)生MACE的概率就更大。以發(fā)生MACE為預(yù)后不良，通過多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，circCDYL是AMI病人預(yù)后的獨(dú)立保護(hù)因素。ROC曲線顯示，血清circCDYL對AMI病人不良預(yù)后具有較高的預(yù)測價值。同時本研究單因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，WBC、CKMB、cTnI水平、Killip分級與AMI病人的不良預(yù)后有關(guān)，臨床可根據(jù)病人血清circCDYL表達(dá)水平，結(jié)合病人臨床指標(biāo)，對病人的預(yù)后及時做出判斷并采取相應(yīng)的干預(yù)措施，以改善病人預(yù)后情況。

綜上所述，AMI病人血清circCDYL表達(dá)水平降低，與MACE的發(fā)生密切相關(guān)，是AMI病人預(yù)后的獨(dú)立保護(hù)因素，對AMI病人不良預(yù)后具有較高的預(yù)測價值，有望成為AMI預(yù)后的生物標(biāo)志物。但本研究并未對circCDYL在AMI中的具體作用機(jī)制進(jìn)行研究，后續(xù)可結(jié)合已有的研究結(jié)果，從circCDYLmiR47935p/淀粉樣前體蛋白通路進(jìn)行更加深入的研究，同時查閱更多的最新研究成果進(jìn)行深入探討。

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（收稿日期：20220906）

（本文編輯郭懷印）

作者單位恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院（湖北恩施445000）

通訊作者鄧仁生，Email：335899120@qq.com

引用信息朱小琴，鄧仁生.急性心肌梗死病人血清circCDYL表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（6）：10991103.