淡紫紫孢菌PLHN與甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽減量復配防治象耳豆根結線蟲

摘要

象耳豆根結線蟲Meloidogyne"enterolobii嚴重威脅熱帶農業生產，迫切需要尋求一種兼具生物防治和化學農藥減施高效雙重優勢的綠色防治方法。本研究通過殺線劑毒力測定和生防菌耐藥測定，設計系列藥菌復配組合并篩選出對象耳豆根結線蟲活性好的復配方案。結果表明：3%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（甲維鹽）微乳劑對淡紫紫孢菌Purpureocillium"lilacinum"PLHN的菌絲生長、產孢量及孢子萌發的影響均較小，且對象耳豆根結線蟲的LC50為0.107"mg/L，LC99為0.792"mg/L，絕對致死濃度為0.8"mg/L。復配組合中甲維鹽0.4"mg/L（減量50%）+75%"PLHN和甲維鹽0.6"mg/L（減量25%）+50%"PLHN對根結線蟲2齡幼蟲和卵的抑殺作用均優于其他組合。盆栽防效表明：0.6"mg/L甲維鹽（減量25%）+50%PLHN復配組合的防效最好，對根結形成有一定的抑制作用，防治效果與全量甲維鹽相當，并能促進番茄植株的生長;0.6"mg/L甲維鹽+25%"PLHN和0.4"mg/L甲維鹽+75%PLHN次之。甲維鹽和淡紫紫孢菌PLHN的復配使用，不僅甲維鹽能減量25%～50%，還能彌補生物防治穩定性較弱、持效期不長等不足，是植物線蟲病防治的可選策略之一。

關鍵詞

象耳豆根結線蟲;"淡紫紫孢菌;"甲維鹽;"減量;"防效

中圖分類號：

S"482.51;"S"476.8

文獻標識碼："B

DOI："10.16688/j.zwbh.2023063

Control"of"Meloidogyne"enterolobii"by"mixture"of"Purpureocillium"lilacinum"PLHN"and"reduction"of"emamectin"benzoate"3%"ME

YANG"Ziwei，"CHEN"Zongxiong，"DING"Xiaofan*

（Key"Laboratory"of"Green"Prevention"and"Control"of"Tropical"Plant"Diseases"and"Pests，"Ministry"of"Education，"

School"of"Plant"Protection，"Hainan"University，"Haikou"570228，"China）

Abstract

Meloidogyne"enterolobii"is"a"serious"threat"to"tropical"agriculture."It"is"urgent"to"find"a"control"method"that"combines"the"advantages"of"biological"control，"environmental"friendliness，"and"efficient"application"of"chemical"pesticides."In"this"study，"the"nematocidal"activity"and"resistance"of"biocontrol"strain"were"measured."A"series"of"compound"combinations"of"nematicide"and"biocontrol"strain"were"designed，"and"the"optimal"combination"scheme"to"control"M.enterolobii"was"selected."The"results"showed"that"emamectin"benzoate"3%"ME"had"little"effect"on"mycelial"growth，"sporulation"and"conidial"germination"of"Purpureocillium"lilacinum"PLHN."The"LC50"and"LC99"values"of"emamectin"benzoate"against"M.enterolobii"were"only"0.107"mg/Lnbsp;and"0.792"mg/L，"respectively，"so"the"absolute"lethal"concentration"was"0.8"mg/L."The"inhibitory"effects"of"0.4"mg/L"emamectin"benzoate"（50%"reduction）+75%"PLHN"and"0.6"mg/L"emamectin"benzoate"（25%"reduction）+50%"PLHN"on"the"secondstage"juveniles"（J2）"and"eggs"of"the"M.enterolobii"were"superior"to"those"of"other"combinations."Pot"experiment"showed"that"the"compound"combination"of"0.6"mg/L"emamectin"benzoate+50%"PLHN"had"the"best"control"effect"and"had"a"certain"inhibitory"effect"on"the"formation"of"rootknot，"which"was"equivalent"to"the"absolute"lethal"concentration"of"emamectin"benzoate，"and"could"promote"the"growth"of"tomato."0.6"mg/L"emamectin"benzoate+25%"PLHN"and"0.4"mg/L"emamectin"benzoate+75%"PLHN"took"the"second"place."The"combination"of"emamectin"benzoate"and"P.lilacinum"PLHN"not"only"reduced"the"dose"of"emamectin"benzoate"by"25%"to"50%，"but"also"made"up"for"the"weak"stability"of"biological"control"and"other"deficiencies."It"is"an"optional"strategy"for"plant"nematode"disease"control.

Key"words

Meloidogyne"enterolobii;"Purpureocillium"lilacinum;"emamectin"benzoate;"reduction;"control"efficacy

象耳豆根結線蟲Meloidogyne"enterolobii是一種植物內寄生線蟲，主要從根冠入侵寄主，經細胞間遷移到皮層分化區，誘導植物形成巨細胞，并以巨細胞為唯一營養來源［1］。象耳豆根結線蟲的寄主范圍非常廣泛，包括蔬菜、番石榴、針葉植物、觀賞植物、茄科植物、雜草和棉花等［23］。研究表明，象耳豆根結線蟲與爪哇根結線蟲M.javanica、南方根結線蟲M.incognita、北方根結線蟲M.hapla、花生根結線蟲M.arenaria等常見根結線蟲種類相比，具有更強的致病力［2］;且象耳豆根結線蟲繁殖水平高，具有克服Mi、N和Rk等抗性基因的能力，易對作物造成嚴重損害，目前象耳豆根結線蟲已在熱帶、地中海地區和其他亞熱帶地區被發現，一些國家已將其列為檢疫性動物［4］，甚至出現向溫帶地區蔓延的趨勢［5］。海南省地處熱帶，常年氣溫較高，素有“天然大溫室”的美稱［6］，適宜熱帶作物以及反季節瓜果蔬菜的種植，同時其環境也適合植物病原線蟲的發生。目前，象耳豆根結線蟲已成為熱帶作物以及瓜果蔬菜的重要病原物之一［7］，防治象耳豆根結線蟲對海南農業生產具有重要意義。

根結線蟲的防治主要有農業防治、化學防治、生物防治、培育抗病品種等［8］，目前仍以化學防治為主，當前市場上有許多殺線劑產品，如阿維菌素、噻唑膦、棉隆等［9］。許多化學殺線劑由于對環境和人類健康造成不良影響，正逐漸被淘汰和禁用。生物防治逐漸成為根結線蟲防治研究的熱點，現已發現淡紫紫孢菌Purpureocillium"lilacinum、疣孢漆斑菌Albifimbria"verrucaria、厚孢輪枝菌Metacordyceps"chlamydosporia等可以用來防治根結線蟲［9］。淡紫紫孢菌是一種普遍存在的土壤腐生和高效噬線蟲真菌，被廣泛用于重要經濟植物寄生線蟲的生物防治［10］;是瑞士唯一批準的生物殺線蟲劑，也是歐盟農藥數據庫中列出的3種生物殺線蟲劑之一［11］;具有寄主范圍廣、防效較好、容易培養等優點［12］。雖然生物防治對環境友好，但是在單獨應用時存在穩定性較差等問題［13］，為了同時發揮化學藥劑和生物菌劑的優勢，研究者將化學藥劑與生物菌劑相結合實現對病蟲害的防治。例如熒光假單胞菌Pseudomonas"fluorescens與嘧菌酯復配使用，在防治辣椒白粉病和果腐病方面取得良好效果［14］。李春香等將幾種農藥分別稀釋5倍或10倍后與球孢白僵菌Beauveria"bassiana復配防治甜菜夜蛾3齡幼蟲，發現低劑量的農藥和球孢白僵菌共同作用有顯著的防治效果，既克服了球孢白僵菌殺蟲速度緩慢的缺點，又可避免害蟲抗藥性逐漸增強的問題［15］。張秀立研究發現，與常量阿維菌素或淡紫紫孢菌單獨施用相比，將阿維菌素和淡紫紫孢菌復配防治黃瓜根結線蟲病可以實現兩種藥劑用量均減少但防效相當的目標［16］。這些藥菌復配、混用在防治病蟲害上都收到較好的效果。本研究以生物防治的理念為出發點，將淡紫紫孢菌與甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽減量復配，篩選出更高效、安全的藥菌復配體系，為防治象耳豆根結線蟲提供依據和指導。

1"材料與方法

1.1nbsp;供試藥劑

淡紫紫孢菌PLHN為海南大學植物保護學院保存菌株。3%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（簡稱甲維鹽）微乳劑（ME），北京富力特農業科技有限責任公司;3%阿維菌素微乳劑，海南利蒙特生物農藥有限公司;41.7%氟吡菌酰胺懸浮劑（SC），拜耳作物科學（中國）有限公司。

1.2"對淡紫紫孢菌PLHN菌株友好的殺線劑篩選

1.2.1"淡紫紫孢菌PLHN在含藥平板上的生長

按表1配制含藥PDA平板。將直徑為5"mm的PLHN單菌落菌餅接種于含藥平板上，以加入滅菌水的PDA平板為對照，共16個處理，每處理重復3次，置于28℃恒溫培養箱中完全避光培養。7"d后采用十字交叉法測量菌落直徑［17］。在上述每個平板中加入5"mL滅菌水，軟毛刷輕輕刷洗收集孢子，獲得孢子懸浮液，充分振蕩混勻并適當稀釋后，采用血球計數板（25×16型）測定產孢量［18］。

每毫升中孢子個數=80小格內孢子個數/80×400×104×稀釋倍數。

1.2.2"淡紫紫孢菌PLHN孢子在含藥PDB中的萌發率測定

將淡紫紫孢菌PLHN孢子PDB懸浮液（2×106個/mL）與各處理藥液按體積比1∶1混勻，藥劑終濃度（本研究中所有農藥濃度均為有效成分濃度）與表1一致，用移液槍吸取一定量滴于載玻片上，于28℃恒溫培養箱中完全避光保濕（濕度100%）培養，10"h后于顯微鏡（OLYMPUS"BX51，日本）下統計孢子萌發數，計算萌發率［1920］。

孢子萌發率=孢子萌發數/孢子總數×100%。

1.3"淡紫紫孢菌PLHN和甲維鹽對象耳豆根結線蟲的抑殺作用

1.3.1"淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液對象耳豆根結線蟲2齡幼蟲的致死作用

將3個直徑5"mm的PLHN單菌落菌餅接種于100"mL"PDB中，于28℃，180"r/min振蕩培養5"d，7"000"r/min離心20"min，上清液用0.45"μm細菌過濾器過濾后得到淡紫紫孢菌發酵濾液原液（無孢子無菌絲），密封后置于4℃保存備用［21］。挑取病根上的根結線蟲卵囊［22］，置于便攜式線蟲孵化裝置［23］中，逐日收集根結線蟲2齡幼蟲（J2）備用。在12孔細胞板中分別加入淡紫紫孢菌發酵濾液及根結線蟲J2懸液（100條/孔），并用滅菌水定容至1"mL，淡紫紫孢菌發酵濾液原液的含量分別為100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%，以滅菌水為對照（CK），共11個處理，每處理設置3個重復，置于28℃恒溫箱中避光孵育，24"h后鏡檢統計線蟲死亡情況，分別記錄死蟲數、活蟲數，計算死亡率和校正死亡率［2425］：

死亡率=死亡線蟲數/線蟲總數×100%;

校正死亡率=（處理死亡率-對照死亡率）/（1-對照死亡率）×100%。

1.3.2"甲維鹽對象耳豆根結線蟲2齡幼蟲的毒力測定

在12孔細胞板內依次加入甲維鹽藥液及根結線蟲J2懸浮液（100條/孔），并用滅菌水定容至1"mL，甲維鹽的有效成分濃度分別為0.025、0.05、0.1、0.2、0.4"mg/L，以滅菌水為對照（CK），共6個處理，每處理設置3個重復，孵育和統計方法同1.3.1，求出毒力回歸方程并進行卡方檢驗，計算LC50及LC99。

1.3.3"淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液和甲維鹽復配對象耳豆根結線蟲2齡幼蟲的致死作用

根據1.3.2的室內毒力測定結果推導出甲維鹽的絕對致死濃度（LC100）為0.8"mg/L，此文中甲維鹽所有“減量”均在此基礎上進行。在12孔細胞板中依次加入淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液、甲維鹽藥液及根結線蟲J2懸液（100條/孔），并用滅菌水定容至1"mL。各處理如下：1）0.6"mg/L甲維鹽（減量25%）;2）0.6"mg/L甲維鹽+50%"PLHN發酵濾液;3）0.6"mg/L甲維鹽+25%"PLHN發酵濾液;4）0.4"mg/L甲維鹽（減量50%）;5）0.4"mg/L甲維鹽+75%"PLHN發酵濾液;6）0.4"mg/L甲維鹽+50%"PLHN發酵濾液;7）0.1"mg/L甲維鹽（減量87.5%）;8）0.1"mg/L甲維鹽+75%"PLHN發酵濾液;9）0.1"mg/L甲維鹽+50%"PLHN發酵濾液;10）0.1"mg/L甲維鹽+25%"PLHN發酵濾液;11）75%"PLHN發酵濾液;12）50%"PLHN發酵濾液;13）25%"PLHN發酵濾液;14）CK：滅菌水。共14個處理，每處理設置3個重復，孵育和統計方法同1.3.1。基于校正死亡率評估甲維鹽和PLHN發酵濾液復配對J2的致死效果。使用Bliss不相似理論進行分析，計算復配理論死亡率（M），若復配理論死亡率（M）＞0，則表現出增效作用;若＜0，則為拮抗作用［26］。

M=復配組實際死亡率-PLHN單用死亡率-甲維鹽單用死亡率（1-PLHN單用死亡率）。

1.3.4"淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液與甲維鹽對象耳豆根結線蟲卵孵化的抑制作用

將卵囊置于1.0%次氯酸鈉溶液中振蕩1"min后離心，棄上清留底液，用滅菌水清洗3次，加水振蕩后收集上清液得到單卵懸浮液［2728］。在12孔細胞板中分別單獨加入PLHN發酵濾液或甲維鹽藥液，同時加根結線蟲單卵懸浮液（100粒/孔），并用無菌水定容至1"mL。甲維鹽濃度分別為0.025、0.05、0.1、0.2、0.4"mg/L，PLHN發酵濾液濃度分別為80%、70%、60%、50%、40%，以滅菌水作為CK。共11個處理，每處理設置3個重復，分別于2、4、8、16、24"h后吸去藥液和菌液，用滅菌水清洗卵表面的藥液后置于滅菌水中，28℃恒溫箱中繼續避光孵化，6"d后在體視顯微鏡（Leica"SAPO型）下觀察統計卵的孵化情況，計算孵化抑制率［22，29］。

孵化率=幼蟲數/單卵數×100%;

孵化抑制率=（對照孵化率-處理孵化率）/對照孵化率×100%。

1.3.5"淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液和甲維鹽復配對象耳豆根結線蟲卵孵化的抑制作用

在12孔細胞板中依次加入PLHN發酵濾液、甲維鹽藥液及根結線蟲單卵懸液（100粒/孔），并用無菌水定容至1"mL。各處理分別為：1）0.8"mg/L甲維鹽;2）100%"PLHN發酵濾液;3）0.1"mg/L甲維鹽+75%"PLHN發酵濾液;4）0.1"mg/L甲維鹽+50%"PLHN發酵濾液;5）0.2"mg/L甲維鹽+75%"PLHN發酵濾液;6）0.2"mg/L甲維鹽+50%"PLHN發酵濾液;7）0.4"mg/L甲維鹽+75%"PLHN發酵濾液;8）0.4"mg/L甲維鹽+50%"PLHN發酵濾液;9）CK：滅菌水。共9個處理，每處理3個重復，分別于16"h和24"h后吸去藥液、滅菌水清洗卵表面，于25℃恒溫箱中繼續孵育6"d后統計結果，方法同1.3.4。

1.4"淡紫紫孢菌PLHN和甲維鹽減量復配防治象耳豆根結線蟲盆栽試驗

盆栽試驗設計：在26℃恒溫溫室中，待番茄長至3～4片真葉時移栽定植，1株/盆。定植后14"d，在番茄根莖周圍打3個孔（深度約8"cm）接種線蟲，接種量為460"頭/株，接蟲后2"d進行灌根處理［3031］。T1（CK）："40"mL滅菌水;T2："20"mL"100%"PLHN發酵液+20"mL滅菌水;T3："20"mL"0.8"mg/L甲維鹽+20"mL滅菌水;T4："20"mL"0.6"mg/L甲維鹽+20"mL"50%"PLHN發酵液;T5："20"mL"0.6"mg/L甲維鹽+20"mL"25%"PLHN發酵液;T6："20"mL"0.4"mg/L甲維鹽+20"mL"75%"PLHN發酵液;T7："20"mL"0.4"mg/L甲維鹽+20"mL"50%"PLHN發酵液;T8："20"mL"0.1"mg/L甲維鹽+20"mL"75%"PLHN發酵液;T9："20"mL"0.1"mg/L甲維鹽+20"mL"50%"PLHN發酵液;共9個處理，每處理3株，設3次重復，隨機排列。

處理后30"d測量植株相關指標，地上部分株高、莖粗、鮮重、葉片葉綠素含量;地下部分根鮮重［32］。統計每株根結數量，根據國家標準GB/T"17980.382000進行病情分級并按以下公式計算根結形成抑制率、每克根根結數和相對防效［3334］：同時參照次氯酸鈉酸性品紅染色法［35］，稍作改動后對根系進行染色觀察根內線蟲發育情況［36］。

根結形成抑制率=（對照根結數-處理根結數）/對照根結數×100%;

每克根根結數=單株根結數/單株根鮮重;

病情指數=∑（各級植株數×級數）/（調查總株數×最高級數）×100%;

防效=（對照病情指數-處理病情指數）/對照病情指數×100%。

1.5"數據統計分析

利用SPSS"21軟件及Microsoft"Excel"2016軟件分析試驗數據，求出毒力回歸方程、LC50、LC99、95%置信區間、卡方值等，采用Duncan氏新復極差法進行差異顯著性分析［37］。

2"結果與分析

2.1"對淡紫紫孢菌PLHN友好的殺線化學藥劑

2.1.1"淡紫紫孢菌PLHN在含藥平板上的生長

淡紫紫孢菌PLHN在含有不同濃度殺線劑的PDA平板上生長7"d后，與空白對照相比，菌落直徑、產孢量與濃度均呈負相關（圖1～圖3）。3種殺線劑對PLHN的菌落生長均有一定抑制作用，濃度越高，抑制越顯著。其中僅1.25"mg/L甲維鹽（J1.25）對PLHN的菌絲生長抑制相對較小（圖2）;3種殺線劑均顯著減少PLHN產孢量，僅甲維鹽處理組的產孢量減少趨勢較平緩（圖3），故甲維鹽對PLHN的菌絲生長及產孢量影響較小。

2.1.2"淡紫紫孢菌PLHN在含藥PDB中的孢子萌發率

淡紫紫孢菌PLHN在含有不同濃度殺線劑的PDB中保濕10"h后，孢子萌發率與濃度也呈負相關（圖4）。對照（CK）孢子萌發率為67.97%，低濃度的甲維鹽（J1.25）和阿維菌素（A1.25）處理的萌發率與對照較為接近，差異不顯著;其他各處理均顯著抑制孢子萌發。當甲維鹽的濃度為20"mg/L（J20）時，淡紫紫孢菌孢子的萌發率為52.45%，而阿維菌素20"mg/L處理（A20）和氟吡菌酰胺10"mg/L處理（L10）孢子的萌發率低于50%，分別為46.69%和31.12%。結果表明，在3個殺線劑中，甲維鹽對PLHN的菌絲生長、產孢量及孢子萌發均影響較小，因此選擇甲維鹽與PLHN復配開展下一步研究。

2.2"淡紫紫孢菌PLHN和甲維鹽復配對象耳豆根結線蟲的抑殺作用

2.2.1"淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液對象耳豆根結線蟲J2的致死作用

淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液對象耳豆根結線蟲J2的致死率隨濃度的增加而升高，處理濃度與致死率呈現正相關（圖5），當其濃度為50%時，致死率為53.86%;其濃度為100%時，致死率為90.17%。

2.2.2"甲維鹽對象耳豆根結線蟲J2的毒力

甲維鹽對象耳豆根結線蟲J2的致死率隨濃度的增加而升高，

處理濃度與致死率呈正相關，卡方檢驗結果（df=13，χ2=14.291）顯示，回歸模型與樣本觀測值擬合較好。根據回歸模型計算可得LC50為0.107"mg/L（95%置信區間為0.100～0.115"mg/L）;LC99為0.792"mg/L（95%置信區間為0.669～0.964"mg/L），呈現極好的致死效果，LC100（絕對致死濃度）為0.8"mg/L。

2.2.3"淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液和甲維鹽減量復配對象耳豆根結線蟲J2的致死作用

根據Bliss不相似理論，復配理論死亡率（M）＞0，表示二者復配有增效作用［26］。表2中，減量50%的甲維鹽（0.4"mg/L）分別與75%、50%"PLHN發酵濾液復配，減量87.5%的甲維鹽（0.1"mg/L）分別與75%、50%、25%"PLHN發酵濾液復配時，Mgt;0，即復配較單獨使用其中1種制劑可以增加對線蟲的致死率，其中減量50%甲維鹽分別與75%、50%"PLHN發酵濾液復配后對線蟲的致死率分別為95.17%和91.94%，致死作用最強，且與0.8"mg/L甲維鹽的致死率相近;減量87.5%的甲維鹽與25%"PLHN發酵濾液復配對線蟲的致死率僅為65.59%，致死作用最差;雖然減量25%的甲維鹽（0.6"mg/L）與50%或25%"PLHN發酵濾液復配時對線蟲的致死率均接近或超過90%，但復配未表現出增效作用。

2.2.4"淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液與甲維鹽對象耳豆根結線蟲卵孵化的抑制作用

淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液與甲維鹽對象耳豆根結線蟲卵孵化均有抑制作用，對線蟲卵孵化的抑制率均與濃度和處理時間呈正相關（圖6）。0.4"mg/L甲維鹽處理24"h的抑制率最大，為82.37%;PLHN發酵濾液對線蟲卵孵化的抑制作用稍差，80%"PLHN發酵濾液處理24"h的抑制率為69.21%。

2.2.5"淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液和甲維鹽減量復配對象耳豆根結線蟲卵孵化的抑制作用

淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液和甲維鹽減量復配后對線蟲卵孵化的抑制率均與濃度和處理時間成正比。0.8"mg/L甲維鹽處理24"h對卵的抑制效果最好，抑制率為95.70%;其次是0.4"mg/L甲維鹽+75%"PLHN發酵濾液、0.4"mg/L甲維鹽+50%"PLHN發酵濾液的復配組合處理24"h，抑制率分別為90.32%、88.33%，與0.8"mg/L甲維鹽的抑制率較為接近。

2.3"淡紫紫孢菌PLHN與甲維鹽減量復配的盆栽防效

淡紫紫孢菌發酵液和甲維鹽減量復配對番茄生長量（株高、莖粗、地上部鮮重、根鮮重、葉綠素含量）及線蟲防效均有一定的影響（表3）。與施加滅菌水的空白對照相比，除個別處理組外，單施甲維鹽、PLHN或不同劑量的復配處理組番茄的株高、莖粗、地上部鮮重、根鮮重基本上均有增加;而處理組中葉綠素含量均有所降低，且番茄每克根的根結數顯著降低。其中以0.6"mg/L甲維鹽（減量25%）+50%"PLHN發酵液復配組合的防效最好，為44.43%（表3，圖8），優于單獨施用100%"PLHN發酵液，且與單獨施用0.8"mg/L甲維鹽的防效相當，無顯著差異;0.6"mg/L甲維鹽+25%"PLHN發酵液和0.4"mg/L甲維鹽（減量50%）+75%"PLHN發酵液的防效次之。綜上，甲維鹽減量25%或減量50%與淡紫紫孢菌復配，能保護并促進植物的正常生長且對象耳豆根結線蟲產生一定的抑制作用（圖8）。

3"結論與討論

當前市場上殺線蟲劑種類較少，在海南最常用的為噻唑膦、阿維菌素、氟吡菌酰胺3種，由于噻唑膦使用劑量大、時間長，很多地區的線蟲對其已產生抗性［38］。3%甲維鹽ME對淡紫紫孢菌PLHN的生長抑制較小，處理后菌落直徑、產孢量和孢子萌發率雖較CK處理組有所減少，但下降速度較慢，故本研究選擇二者進行減量復配研究。

王泊理等［39］指出，阿維菌素和噻唑膦原藥配比為1∶2時，對南方根結線蟲的LC50為31.67"mg/L。楊波等研究發現，在50"μg/mL噻唑膦的基礎上減量25%或減量50%后分別與淡紫紫孢菌發酵液復配，復配理論死亡率（M）在第2天（0.001、0.003）和第3天（0.022、0.005）時均為正值，即相對于單獨使用其中一種制劑，藥后第2天和第3天時出現增效作用［31］，而本研究中甲維鹽減量25%或減量50%后與淡紫紫孢菌PLHN發酵濾液復配，相對于單獨使用其中一種制劑，藥后1"d即出現了增效作用。甲維鹽和淡紫紫孢菌發酵濾液的殺蟲機制不同，通過復配互補的方式能表現出更優的殺線效果，實現協同增效。

本研究中0.4"mg/L甲維鹽（減量50%）處理24"h對象耳豆根結線蟲卵孵化抑制率為82.37%。楊雪婷等的研究表明：3.125"mg/L噻唑膦處理24"h卵孵化抑制率僅為65.54%，25"mg/L處理16"h卵孵化抑制率為84.63%;2.5"mg/L氟吡菌酰胺處理24"h卵孵化抑制率為92.47%［40］，與這2種常見殺線劑相比，3%甲維鹽ME在用量較少、作用時間延長的條件下，可達到與之相當的抑制效果;同時，0.4"mg/L甲維鹽分別與75%、50%"PLHN復配時，對卵孵化的抑制率分別為90.32%、88.33%，與0.8"mg/L甲維鹽的抑制率（95.70%）較為接近，實現了甲維鹽減量50%但抑制作用相當的目標。淡紫紫孢菌發酵液中含有多種生物活性物質，促進了土壤微生物代謝，提高了土壤肥力，促進了番茄植株的生長發育，增強了番茄的抗逆性。另外，這些物質也能促進土壤微生物的更新，增加有益微生物數量，減弱象耳豆根結線蟲的競爭優勢。甲維鹽具有廣譜性、高效性，二者復配使用會產生多種化學和生物作用，提高對線蟲的綜合防治效果，但具體機制還需要進行進一步研究和驗證。

已有研究證實，甲維鹽對南方根結線蟲的防治效果較好，特別是在抑制根結和卵塊的形成方面表現出色，而且不會對番茄苗的生長產生不利影響［41］。本研究盆栽試驗結果表明，0.6"mg/L甲維鹽（減量25%）分別與50%、25%"PLHN復配，0.4"mg/L甲維鹽（減量50%）與75%"PLHN復配對象耳豆根結線蟲的防效較好，不僅降低了農藥的使用量，且對環境更友好。0.8"mg/L甲維鹽、0.4"mg/L甲維鹽（減量50%）+50%"PLHN發酵液處理的莖粗以及0.6"mg/L甲維鹽（減量25%）+25%"PLHN發酵液處理的番茄根鮮重有所下降，推測是因為根結數量少，故而根鮮重變輕;同時根系的減少引起莖干生長減慢;當然，也可能與個體差異有關;楊波等的研究中也出現過同樣的現象［31］。相較于其他研究，如0.075"kg/hm2甲維鹽對南方根結線蟲病的盆栽防效（73.4%）［42］、2"mg/L甲維鹽對南方根結線蟲病的盆栽防效（79.69%）［41］、10"mg/L甲維鹽對南方根結線蟲病的盆栽防效（81.46%）［43］，本研究中0.6"mg/L甲維鹽+50%"PLHN的盆栽防效（44.43%）雖然較低，但甲維鹽的使用量大大減少，對環境更為友好，另外，顯著優于1.5×108個/株PLHN對南方根結線蟲的盆栽防效（約29%）［44］，與用8.75×107"cfu/株淡紫紫孢菌顆粒劑對南方根結線蟲的盆栽防效（約51.43%）［31］接近。

當前化學農藥的使用給環境造成了嚴重污染［45］，而生物菌劑具有對環境友好的特點［13］，但其防治效果通常不如化學藥劑，而將二者復配后混施是既保證防治效果又能減少環境污染的方法。本研究可為熱帶地區根結線蟲病的防治提供參考，有關藥菌復配的田間防效和減施技術有待進一步研究。

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（責任編輯：田"喆）