甘肅省黃芩根結(jié)線蟲(chóng)病病原種類(lèi)鑒定

摘要

通過(guò)形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)相結(jié)合的方法對(duì)引起甘肅省隴西縣黃芩根結(jié)線蟲(chóng)病的病原種類(lèi)進(jìn)行了鑒定，并采用室內(nèi)人工接種的方法測(cè)定其對(duì)黃芩的致病性。結(jié)果表明，從黃芩根系分離的根結(jié)線蟲(chóng)其形態(tài)特征及測(cè)量值與北方根結(jié)線蟲(chóng)Meloidogyne"hapla基本一致。該線蟲(chóng)種群rDNAITS和28S"rDNA"D2/D3序列與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的北方根結(jié)線蟲(chóng)序列相似性分別為99.60%和99.74%"（rDNAITS："JX024147;"28S"rDNA"D2/D3："MW288147）。貝葉斯系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示，該線蟲(chóng)群體與其他北方根結(jié)線蟲(chóng)群體聚為一支，置信度在95%以上。利用北方根結(jié)線蟲(chóng)特異性引物MhF/MhR擴(kuò)增并測(cè)序得到457"bp的特異性片段。因此，基于形態(tài)學(xué)結(jié)合rDNAITS、28S"rDNA"D2/D3序列和特異性片段長(zhǎng)度，將黃芩根結(jié)線蟲(chóng)病病原鑒定為北方根結(jié)線蟲(chóng)M.hapla。接種該線蟲(chóng)后的黃芩生長(zhǎng)緩慢，葉片黃化，40"d后須根上有明顯的根結(jié)。經(jīng)分離鑒定，致病群體為北方根結(jié)線蟲(chóng)。綜上所述，甘肅省隴西縣黃芩根結(jié)線蟲(chóng)病病原為北方根結(jié)線蟲(chóng)M.hapla，該線蟲(chóng)對(duì)黃芩具有較強(qiáng)的致病性，其繁殖系數(shù)為1.997。

關(guān)鍵詞

甘肅;"黃芩;"北方根結(jié)線蟲(chóng);"鑒定;"致病性

中圖分類(lèi)號(hào)：

S"435.672

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼："A

DOI："10.16688/j.zwbh.2023102

Identification"of"pathogens"of"rootknot"nematode"disease"of"Scutellaria"baicalensis"in"Gansu"province

CHEN"Jinghuan，"SHI"Mingming，"QIAO"Wanqiang，"ZHANG"Jie，"WU"Jin，"LI"Huixia*

（College"of"Plant"Protection，"Gansu"Agricultural"University，"Biocontrol"Engineering"Laboratory"of"Crop"

Diseases"and"Pests"in"Gansu"Province，"Lanzhou"730070，"China）

Abstract

In"this"study，"the"species"causing"root"knot"nematode"disease"on"Scutellaria"baicalensis"in"Longxi"county，"Gansu"province"was"isolated"and"identified"and"its"pathogenicity"to"S.baicalensis"was"determined"by"indoor"artificial"inoculation."The"results"showed"that"the"morphological"characteristics"and"measurements"of"the"nematode"population"from"S.baicalensis"were"basically"consistent"with"those"of"Meloidogyne"hapla."rDNAITS"and"28S"rDNA"D2/D3"sequences"showed"99.60%"and"99.74%"identity"with"M.hapla"in"NCBI，"respectively"（rDNAITS："JX024147;"28S"rDNA"D2/D3："MW288147）."The"Bayesian"phylogenetic"tree"indicated"that"this"nematode"population"clustered"with"other"M.hapla"populations"with"a"confidence"level"of"95%."A"specific"fragment"of"457"bp"in"size"was"obtained"by"amplification"with"the"M."haplaspecific"primers"MhF/MhR"and"sequencing."Based"on"morphology，"rDNAITS，"28S"rDNA"D2/D3"sequences，"and"the"specific"sequence，"the"pathogen"of"the"nematode"population"on"S.baicalensis"was"identified"as"M.hapla."After"inoculation"with"this"nematode"population，"S.baicalensis"grew"slowly"with"yellowing"leaves，"and"obvious"root"knots"were"observed"on"fibrous"roots"40"days"after"inoculation."In"conclusion，"the"pathogen"responsible"for"the"root"knot"nematode"disease"of"S.baicalensis"in"Longxi"county，"Gansu"province"is"M.hapla，"which"demonstrates"strong"pathogenicity"to"S.baicalensis"with"a"reproductive"coefficient"of"1.997.

Key"words

Gansu;"Scutellaria"baicalensis;"Meloidogyne"hapla;"identification;"pathogenicity

黃芩Scutellaria"baicalensis"Georgi，又稱山茶根、土金茶根，為唇形科Lamiaceae黃芩屬Scutellaria"多年生草本植物［1］。黃芩以根入藥，味苦、性寒，有清熱燥濕、瀉火解毒等功效［2］。甘肅省隴西縣種植中藥材品種達(dá)40種，是我國(guó)重要的道地藥材產(chǎn)區(qū)之一，被稱為“天下藥鄉(xiāng)”和“西部藥都”［3］。

隨著市場(chǎng)對(duì)黃芩藥材需求量的增加，野生黃芩已不能滿足需求，黃芩人工栽培面積正逐步擴(kuò)大［45］。

黃芩是隴西縣種植的重要的道地大宗中藥材品種之一，每年種植面積3"400"hm2，干貨產(chǎn)量450萬(wàn)t左右［6］。由于生產(chǎn)上多年連作，導(dǎo)致黃芩病害的發(fā)生呈逐年遞增趨勢(shì)。國(guó)內(nèi)已報(bào)道的黃芩病害主要有根腐病［7］、葉枯病和白粉?。?］以及灰霉病等［9］病害，然而對(duì)黃芩線蟲(chóng)病報(bào)道較少。

根結(jié)線蟲(chóng)Meloidogyne"spp.是世界上危害較大的植物病原線蟲(chóng)之一，其寄主范圍極為廣泛，大多為經(jīng)濟(jì)作物，每年造成的經(jīng)濟(jì)損失多達(dá)數(shù)十億美元［1011］。根結(jié)線蟲(chóng)主要侵染寄主植物的根部，造成植物的主根以及須根部位形成大小不一的根結(jié)，導(dǎo)致寄主植物產(chǎn)量下降、品質(zhì)降低。而且根結(jié)線蟲(chóng)危害植物后有利于其他病原菌的侵入，引起復(fù)合侵染，從而造成根部的壞死與腐爛［12］。據(jù)文獻(xiàn)記載，目前全世界已報(bào)道的根結(jié)線蟲(chóng)有90多種，中國(guó)發(fā)現(xiàn)有39種［1315］。我國(guó)和世界上大部分地區(qū)90%以上的植物根結(jié)線蟲(chóng)病是由南方根結(jié)線蟲(chóng)Meloidogyne"incognita、北方根結(jié)線蟲(chóng)M.hapla、花生根結(jié)線蟲(chóng)M.arenaria和爪哇根結(jié)線蟲(chóng)M.javanica等4種引起。據(jù)報(bào)道［16］，多種根結(jié)線蟲(chóng)可侵染名貴中草藥，造成產(chǎn)量下降，品質(zhì)降低。如南方根結(jié)線蟲(chóng)可以侵染當(dāng)歸Angelica"sinensis［17］，北方根結(jié)線蟲(chóng)可以侵染黨參Codonopsis"pilosula［18］、西洋參Panax"quinquefolius［19］、三七P.notoginseng［20］和人參P.ginseng［21］等。

2020年10月，本課題組在調(diào)查中藥材主要病害時(shí)，發(fā)現(xiàn)甘肅省定西市隴西縣柯寨鎮(zhèn)種植區(qū)的黃芩根部具有大量肉眼可見(jiàn)的根結(jié)，須根上的根結(jié)較為明顯，部分田塊發(fā)病嚴(yán)重，初步判定該病為黃芩根結(jié)線蟲(chóng)病。鑒于根結(jié)線蟲(chóng)病對(duì)黃芩品質(zhì)和產(chǎn)量可能存在潛在威脅，且不同種類(lèi)的根結(jié)線蟲(chóng)對(duì)不同作物或品種專化性不同，故準(zhǔn)確鑒定病原種類(lèi)、明確優(yōu)勢(shì)種，對(duì)防治根結(jié)線蟲(chóng)病具有重要意義。因此，本研究擬采用形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)相結(jié)合的方法對(duì)黃芩根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定，并通過(guò)室內(nèi)人工接種測(cè)定其對(duì)黃芩的致病性，從而為黃芩根結(jié)線蟲(chóng)病的有效防控提供理論依據(jù)。

1"材料與方法

1.1"線蟲(chóng)的采集與分離

2020年10月，對(duì)甘肅省隴西縣柯寨鎮(zhèn)（104°28′E，35°07′N(xiāo)）黃芩種植區(qū)采用五點(diǎn)法采樣，將帶有根結(jié)的主根、須根及根際5～15"cm土樣一同裝袋，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離鑒定。剖開(kāi)黃芩根部的根結(jié)，挑取卵囊和雌蟲(chóng)。將黃芩病根剪成約2"cm小段，與根際土壤分開(kāi)，采用改良的貝爾曼漏斗法［22］分離、收集雄蟲(chóng)和2齡幼蟲(chóng)。

1.2"線蟲(chóng)的純化與擴(kuò)繁

將病根表面的雜物挑取干凈，放置于無(wú)菌水中。在體視顯微鏡下，通過(guò)眼科手術(shù)刀與鑷子收集根結(jié)表面乳白色梨形雌蟲(chóng)和卵囊。用0.5%"NaClO對(duì)卵囊消毒1"min，再用無(wú)菌水沖洗3～4次，置于裝有50"μL無(wú)菌水的1.5"mL離心管中。在25℃光照培養(yǎng)箱內(nèi)放置72"h，即可得到2齡幼蟲(chóng)。將其接種于健康的黃芩植株根部，進(jìn)行純化和擴(kuò)繁［19］。

1.3"形態(tài)學(xué)鑒定

分別挑取雄蟲(chóng)和2齡幼蟲(chóng)各20條，置于體積分?jǐn)?shù)為45%的乳酸中備用。隨后挑取單條線蟲(chóng)于加有一滴無(wú)菌水的載玻片上。用酒精燈外焰在載玻片另一側(cè)進(jìn)行加熱，在顯微鏡下每隔3"s觀察一次，蟲(chóng)體僵直不動(dòng)，則表明線蟲(chóng)死亡。將已死亡的線蟲(chóng)置于新的載玻片上，進(jìn)行形態(tài)特征觀察并拍照，參照謝輝［23］的方法測(cè)量形態(tài)值。制作雌蟲(chóng)的會(huì)陰花紋時(shí)，采用眼科手術(shù)刀在顯微鏡下切掉雌蟲(chóng)尾端后部約1/4。將切口向下，輕輕按壓以除去尾部的內(nèi)容物，然后轉(zhuǎn)移至加有一滴純甘油的載玻片上。將其表面朝上，用眼科手術(shù)刀進(jìn)行微調(diào)，使會(huì)陰花紋平整。制片后，在顯微鏡下觀察、拍照及記錄形態(tài)特征。

1.4"分子生物學(xué)鑒定

參照王江嶺等［24］的方法提取線蟲(chóng)的DNA。以提取的DNA樣本為模板，參照Vrain等［25］和Subbotin等［26］已報(bào)道的通用引物、PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，分別擴(kuò)增線蟲(chóng)的rDNAITS和28S"rDNA"D2/D3區(qū)基因片段。北方根結(jié)線蟲(chóng)特異性引物選用MhF/MhR［20］，進(jìn)行擴(kuò)增驗(yàn)證。將擴(kuò)增所得的PCR產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行雙向測(cè)序，PCR擴(kuò)增用到的引物序列見(jiàn)表1。

對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行BLAST比對(duì)分析后，從GenBank分別下載和所測(cè)序列相似性較高的rDNAITS和28S"rDNA"D2/D3序列。以禾谷孢囊線蟲(chóng)Heterodera"avenae序列（登錄號(hào)：KX573052）作為外群，利用MAFFT"version"5軟件進(jìn)行序列比對(duì)后用Gblock"0.91b進(jìn)行保守區(qū)的選擇，利用AIC在MrModeltest"version"2.3上運(yùn)行選擇出最佳模型，使用MrBayes"3.1.2軟件構(gòu)建貝葉斯系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。采用Boostrap值檢驗(yàn)分支聚類(lèi)的可靠性，最后顯示置信度＞50%的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，再用FigTree"v.1.4.3軟件進(jìn)行查看、編輯和美化。

1.5"線蟲(chóng)群體對(duì)黃芩的致病性測(cè)定

將健康的黃芩苗種植在盛有滅菌土的花盆中（直徑20"cm），每盆種植2株，共種植10盆。種植14"d后，選擇長(zhǎng)勢(shì)一致的健壯植株進(jìn)行致病性測(cè)定。將純化、擴(kuò)繁的北方根結(jié)線蟲(chóng)配制成1"000條/mL的2齡幼蟲(chóng)懸浮液，將其接種在健康黃芩植株根際，每盆2"mL，共接種5盆作為重復(fù)，以無(wú)菌水處理作為對(duì)照，共3盆。接種40"d后，觀察黃芩的癥狀，記錄發(fā)病情況。參照段玉璽等［27］的方法，對(duì)發(fā)病黃芩根組織進(jìn)行染色，統(tǒng)計(jì)根結(jié)線蟲(chóng)各蟲(chóng)態(tài)的數(shù)量。同時(shí)統(tǒng)計(jì)盆栽土壤中的線蟲(chóng)，并與根組織中的數(shù)量求和后，計(jì)算繁殖系數(shù)：

繁殖系數(shù)=最終線蟲(chóng)總量/最初線蟲(chóng)量。

1.6"數(shù)據(jù)處理

使用Excel"2016和SPSS"24.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與整理分析。

2"結(jié)果與分析

2.1"黃芩根結(jié)線蟲(chóng)病癥狀

黃芩被根結(jié)線蟲(chóng)侵染后，其地上部表現(xiàn)為葉片黃化、萎蔫，植株矮小，類(lèi)似缺水缺肥營(yíng)養(yǎng)不良所導(dǎo)致的癥狀。根部膨大形成大小不等的根結(jié)，且多形成在須根上。危害嚴(yán)重時(shí)，根結(jié)呈念珠狀，后期小根結(jié)聯(lián)合在一起形成較大根結(jié)（圖1a）。在黃芩生長(zhǎng)后期，根部有大量乳白色至淺褐色卵囊暴露在根結(jié)表面（圖1b）。

2.2"形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果

黃芩上分離到的根結(jié)線蟲(chóng)雄蟲(chóng)、2齡幼蟲(chóng)和雌蟲(chóng)的形態(tài)測(cè)量值與已報(bào)道的北方根結(jié)線蟲(chóng)測(cè)量值比較見(jiàn)表2，顯微觀察的形態(tài)特征見(jiàn)圖2。

1）"n：線蟲(chóng)數(shù)量;L：蟲(chóng)體長(zhǎng)度;a：體長(zhǎng)/體寬;W：蟲(chóng)體寬度;St：口針長(zhǎng)度;MB：頭端至中食道球中央的距離;DGO：背食道腺開(kāi)口到口針基球的距離;Spic：交合刺長(zhǎng);EP：排泄孔到頭端距離;c：體長(zhǎng)/尾長(zhǎng);c′：尾長(zhǎng)/肛門(mén)處體寬;Tail：尾長(zhǎng);—：無(wú)數(shù)據(jù)。所有測(cè)量值單位為μm，括號(hào)里為測(cè)量值的范圍。

n："Number"of"specimens;"L："Body"length;"a："Body"length"divided"by"the"maximum"body"width;"W："Maximum"body"width;"St："Style"length;"MB："Distance"from"anterior"end"to"the"centre"of"median"oesophageal"bulb"valve;"DGO："Dorsal"gland"orifice"to"stylet;"Spic："Spicule"length;"EP："Distancenbsp;from"excretory"pore"to"anterior"end;"c："Body"length"divided"by"tail"length;"c′：""Tail"length"divided"by"body"width"at"anus;"Tail："Tail"length;"—："No"data."All"measurements"are"given"in"units"of"μm."The"range"of"measured"values"are"in"brackets.

雄蟲(chóng)蟲(chóng)體蠕蟲(chóng)形（圖2a），體長(zhǎng)（1"071.29±32.99）"μm"（839.84～1"449.94"μm），口針長(zhǎng)（19.19±0.41）"μm"（16.05～22.68"μm），背食道腺開(kāi)口到口針基部球的距離（3.15±0.09）"μm"（2.54～3.97"μm）（圖2b）。尾部鈍圓，殺死后稍向腹面彎曲，交合刺成對(duì)，針狀，長(zhǎng)（22.56±1.43）"μm"（19.26～26.43"μm）（圖2c）。

2齡幼蟲(chóng)蟲(chóng)體細(xì)長(zhǎng)，兩端稍尖細(xì)（圖2d）。體長(zhǎng)（375.13±5.76）"μm"（314.38～424.53"μm），唇區(qū)無(wú)明顯縊縮，口針發(fā)達(dá)，長(zhǎng)（10.54±0.30）"μm"（9.21～12.72"μm）（圖2e），口針基部球明顯，呈圓形。背食道腺開(kāi)口到口針基部球的距離（3.17±0.51）"μm"（2.53～4.60"μm），排泄孔至頭端的距離（67.66±1.64）"μm"（59.76～72.24"μm）。尾長(zhǎng)（43.71±0.83）"μm"（35.59～48.32"μm），尾部透明區(qū)清晰（圖2f）。

雌蟲(chóng)蟲(chóng)體乳白色，檸檬形或梨形（圖2g），體長(zhǎng)（585.86±28.39）"μm"（439.87～854.32"μm），體寬（386.54±12.27）"μm"（303.71～465.35"μm），蟲(chóng)體前端突出如頸，后端呈圓球形?？卺橀L(zhǎng)（11.60±0.28）"μm"（9.42～12.97"μm），背食道腺開(kāi)口到口針基部球的距離（3.42±0.14）"μm"（2.67～4.38"μm）（圖2h）。中食道球發(fā)達(dá)，近圓形，頭端到中食道球中央的距離（65.79±1.33）"μm"（59.34～77.57"μm）。會(huì)陰花紋（圖2i）整體呈卵圓形，背弓略平緩，有刻點(diǎn)。這些形態(tài)特征均與北方根結(jié)線蟲(chóng)［28］相符，均在誤差范圍之內(nèi)。因此，初步將黃芩根結(jié)線蟲(chóng)病的病原鑒定為北方根結(jié)線蟲(chóng)M.hapla。

2.3"分子生物學(xué)鑒定

經(jīng)擴(kuò)增和測(cè)序，獲得該線蟲(chóng)群體的rDNAITS和28S"rDNA"D2/D3序列，大小分別為771"bp和754"bp，GenBank登錄號(hào)分別為OP763779和OP765241。經(jīng)BLAST比對(duì)分析，這2個(gè)序列與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中北方根結(jié)線蟲(chóng)的序列的相似性分別為99.60%和99.74%（GenBank登錄號(hào)：JX024147和MW288147）。

顯示，本研究獲得的北方根結(jié)線蟲(chóng)序列與其他北方

根結(jié)線蟲(chóng)均聚為一支，置信度在95%以上。進(jìn)一步表明，本研究中引起黃芩根結(jié)線蟲(chóng)病的病原為北方根結(jié)線蟲(chóng)M.hapla。

2.4"特異性引物驗(yàn)證

經(jīng)特異性引物擴(kuò)增，得到了1條457"bp的特異性片段，與預(yù)期的北方根結(jié)線蟲(chóng)的特異性片段大小一致，而對(duì)照樣品沒(méi)有此條帶（圖5）。綜上所述，根據(jù)常規(guī)的形態(tài)學(xué)特征結(jié)合rDNAITS、28S"rDNA"D2/D3區(qū)序列分析和特異性片段擴(kuò)增結(jié)果，將引起黃芩上的根結(jié)線蟲(chóng)鑒定為北方根結(jié)線蟲(chóng)M.hapla。

2.5"根結(jié)線蟲(chóng)群體對(duì)黃芩的致病性

接種后40"d，觀察到盆栽植株地上部生長(zhǎng)緩慢且葉片黃化，并且根結(jié)線蟲(chóng)侵入黃芩根部，須根上有明顯的根結(jié)。對(duì)根組織染色結(jié)果表明，

線蟲(chóng)已成功侵染（圖6）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，每盆黃芩中線蟲(chóng)平均數(shù)量約為3"994條，繁殖系數(shù)為1.997。

3"結(jié)論與討論

目前，國(guó)內(nèi)外研究者大都采用形態(tài)學(xué)結(jié)合分子生物學(xué)方法對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)進(jìn)行鑒定，擺脫了單純依靠雌蟲(chóng)會(huì)陰花紋特征鑒定根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)的局限性，從而提高了鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。本研究中，形態(tài)學(xué)特征觀察發(fā)現(xiàn)黃芩根結(jié)線蟲(chóng)群體的會(huì)陰花紋尾區(qū)有明顯的刻點(diǎn)結(jié)構(gòu)，與謝輝［23］描述的北方根結(jié)線蟲(chóng)會(huì)陰花紋特征一致，且雄蟲(chóng)與2齡幼蟲(chóng)測(cè)量值均與Whitehead［28］所描述的北方根結(jié)線蟲(chóng)測(cè)量值相符，且雄蟲(chóng)的體長(zhǎng)、口針長(zhǎng)度、背食道開(kāi)口到口針基球的距離都在誤差范圍內(nèi)。根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果，初步將寄生黃芩的根結(jié)線蟲(chóng)鑒定為北方根結(jié)線蟲(chóng)M.hapla。但傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定對(duì)研究者在操作技能與研究經(jīng)驗(yàn)等方面都有較高要求，且根結(jié)線蟲(chóng)雌蟲(chóng)會(huì)陰花紋存在一定程度的種內(nèi)變異，從而對(duì)鑒定結(jié)果的精確性造成一定影響［29］。一些不常見(jiàn)的根結(jié)線蟲(chóng)，如德氏根結(jié)線蟲(chóng)M.deconincki、濟(jì)南根結(jié)線蟲(chóng)M.jinanensis和隱蔽根結(jié)線蟲(chóng)M.mersa，其會(huì)陰花紋也具有刻點(diǎn)結(jié)構(gòu)［30］。因此，需要采用分子生物學(xué)方法進(jìn)一步鑒定。

本研究采用rDNAITS、28S"rDNA"D2/D3序列通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得2條大小分別為771"bp和754"bp序列片段。與石明明等［18］和楊艷梅等［31］采用相同引物擴(kuò)增的北方根結(jié)線蟲(chóng)序列大小基本一致，且與石明明等［18］擴(kuò)增到的北方根結(jié)線蟲(chóng)序列相似度高達(dá)99%以上。構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)后進(jìn)一步明確了黃芩根結(jié)線蟲(chóng)病的病原為北方根結(jié)線蟲(chóng)，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。本研究同時(shí)采用北方根結(jié)線蟲(chóng)特異性引物MhF/MhR擴(kuò)增，得到了1條大小為457"bp的特異性片段，與楊佩文等［32］的結(jié)果一致。再次證實(shí)了寄生黃芩的根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)為北方根結(jié)線蟲(chóng)。

北方根結(jié)線蟲(chóng)是危害最為嚴(yán)重的根結(jié)線蟲(chóng)之一，主要通過(guò)侵染寄主植物的根組織，造成植物的根系形成大小不一的根結(jié)，影響寄主植物的生長(zhǎng)發(fā)育，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致寄主植物根部壞死與腐爛，而且根結(jié)線蟲(chóng)危害植物后更有利于其他病原菌的侵入，極易引起復(fù)合侵染［21］，造成更大的經(jīng)濟(jì)損失。在中國(guó)大部分地區(qū)，比如云南［33］、四川［34］、河北［35］、遼寧［36］、福建［37］、江蘇［38］等地都有北方根結(jié)線蟲(chóng)發(fā)生危害的報(bào)道。2007年，常瑾等［8］報(bào)道在陜西省北方根結(jié)線蟲(chóng)可以侵染黃芩，但沒(méi)有形態(tài)學(xué)特征描述和分子生物學(xué)特征分析，也沒(méi)有對(duì)寄主的致病性進(jìn)行測(cè)定。本研究通過(guò)室內(nèi)人工接種的方法，測(cè)定了北方根結(jié)線蟲(chóng)對(duì)黃芩的致病性。研究結(jié)果表明，北方根結(jié)線蟲(chóng)接種黃芩40"d后，其繁殖系數(shù)為1.997，說(shuō)明了該線蟲(chóng)種群對(duì)黃芩具有較強(qiáng)的致病性。

黃芩作為甘肅省隴西縣重要的經(jīng)濟(jì)作物，其根部具有藥用價(jià)值，而根結(jié)線蟲(chóng)主要為害寄主植物的根組織，嚴(yán)重影響黃芩的質(zhì)量和品質(zhì)。因根結(jié)線蟲(chóng)侵染黃芩后植株地上部癥狀大多表現(xiàn)為葉片黃化、萎蔫以及植株矮小，農(nóng)戶多認(rèn)為是缺水缺肥營(yíng)養(yǎng)不良所致，進(jìn)而進(jìn)行灌水施肥，使得危害更加嚴(yán)重。因此，對(duì)黃芩根結(jié)線蟲(chóng)病的防治首先要加強(qiáng)宣傳，讓農(nóng)戶了解根結(jié)線蟲(chóng)造成的危害以及癥狀。其次黃芩為多年生植物，種植方式主要為移栽幼苗，而前期調(diào)查發(fā)現(xiàn)部分育苗地已發(fā)生根結(jié)線蟲(chóng)病。在種苗調(diào)運(yùn)時(shí)，應(yīng)檢測(cè)幼苗是否攜帶根結(jié)線蟲(chóng);并在移栽前應(yīng)進(jìn)行土壤處理，如使用腐熟的有機(jī)肥作為底肥，抑制土壤中卵的孵化。必要時(shí)建議種植戶將黃芩與小麥、玉米等作物輪作，形成對(duì)線蟲(chóng)生長(zhǎng)、發(fā)育不利的環(huán)境。在黃芩生長(zhǎng)后期，可以采用微生物菌劑防治根結(jié)線蟲(chóng)，如淡紫紫孢菌Purpureocillium"lilacinum［39］、厚孢輪枝孢和木霉［40］等，這類(lèi)微生物不僅可以寄生在根結(jié)線蟲(chóng)卵和幼蟲(chóng)體內(nèi)使其死亡，而且還可以改善根際周?chē)⑸锓N類(lèi)，進(jìn)而達(dá)到防治的目的。本研究所收集樣本僅局限于甘肅省隴西縣柯寨鎮(zhèn)的黃芩種植區(qū)，要全面準(zhǔn)確地掌握該病在甘肅省的發(fā)生情況及危害程度，還需進(jìn)一步展開(kāi)深入調(diào)查和研究。

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