人工推片法評估不同大血小板比率的血小板計數及形態研究

龐沖敏 張宗凱 韋家秀 王燕 劉蘭

【摘要】 目的 研究不同大血小板比率（platelet-larger cell ratio，P-LCR）的血小板（Platelets，PLT）計數及血小板形態。方法隨機收集2020年10月—2021年3月期間檢測成人血常規的252份標本，根據血小板相關參數結果分為4組，A組血小板分布寬度（platelet distribution width，PDW）、血小板平均容積（mean platelet volume，MPV）、血小板壓積（platelet hematocrit，PCT）、P-LCR未顯示數值血標本61份，B組PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數值且P-LCR＜13%血標本33份，C組PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數值且P-LCR在13%～43%血標本61份，D組PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數值且P-LCR＞43%血標本97份。采用Sysmex-XN1000五分類血細胞分析儀進行熒光核酸染色法（PLT-F）計數血小板，手工推片法評估血小板數，并觀察血小板形態、大小及聚集情況，計算各組中PLT＜125×109/L、125×109/L～350×109/L、＞350×109/L的百分比。結果? A組中PLT＜125×109/L的占55.73%，125×109/L～350×109/L的占41.00%，＞350×109/L的占3.27%，血小板大小不均；B組中PLT＜125×109/L的占3.03%，125×109/L～350×109/L的占63.63%，＞350×109/L的占33.34%，小血小板較多；C組中PLT＜125×109/L的占14.75%，125×109/L～350×109/L的占83.63%，＞350×109/L的占1.63%，血小板大小均勻；D組中PLT＜125×109/L的占29.89%，125×109/L～350×109/L的占71.11%，＞350×109/L的占0%，大血小板較多。結論? 血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR未顯示數值時，無論是否滿足3項中的其中之一（血球儀有異常報警提示，計數值低于實驗室確認的儀器線性范圍，首次計數結果＜100×109/L或＞1 000×109/L），都需檢查標本并推片復檢。血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數值時，如滿足以上3項中的其中之一，需檢查標本并推片復檢，如不滿足，可不推片復檢。

【關鍵詞】 人工推片；大血小板比率；血小板計數；血小板形態

文章編號：1672-1721（2024）10-0130-03? ? ?文獻標志碼：A? ? ?中國圖書分類號：R512.91

血小板是由骨髓造血組織中的巨核細胞產生，具有維持血管內皮完整性、黏附、聚集、釋放、促凝和血塊收縮等功能。血小板計數是指測定單位容積血液中血小板的數量。血小板計數是止血、凝血檢查的常用篩選試驗之一，參考區間為125×109/L～350×109/L[1]。血小板計數可用血細胞分析儀、顯微鏡或流式細胞儀檢測。目前醫學實驗室主要用血細胞分析儀計數血小板，該方法具有重復性好，速度快等優點。當儀器報告顯示血小板數量、圖形異常或報警提示時，應使用顯微鏡或流式細胞儀檢測法對血小板計數結果復核。國際血液學標準委員會推薦流式細胞術檢測為參考方法[2]。大血小板的比率一般與血小板體積的分布寬度和血小板的平均體積同時檢測，主要用于表達血小板的形態，對判斷骨髓造血功能有一定的臨床意義[3]。正常的血小板呈兩面微凸的圓盤狀，直徑1.5～3.0 μm，大血小板直徑4～7 μm，巨型血小板直徑＞7μm。大血小板比率（P-LCR）是指大血小板與總血小板的比率，參考范圍為13%～43%[4]。使用自動血液分析儀檢測血小板時，血小板相關參數檢測（包括P-LCR）未顯示數值的情況偶爾發生。為了解不同

P-LCR時PLT計數結果及血小板形態，本研究對不同P-LCR的血標本進行了人工推片法評估血小板計數及血小板形態觀察，報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選擇2020年10月—2021年3月貴陽市公共衛生救治中心門診、住院成人患者及體檢者含有乙二胺四乙酸二鉀的靜脈抗凝全血標本，共252份，按照血小板相關參數PDW（血小板體積分布寬度）、MPV（血小板平均體積）、PCT（血小板比容）、P-LCR（大血小板比率）結果分為4組。

A組為血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR未顯示數值，B組為血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數值且P-LCR＜13%，C組為血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數值且P-LCR在13%～43%，D組為血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數值且P-LCR＞43%。

1.2 儀器與試劑

Sysmex-XN1000五分類血細胞分析儀及其配套的溶血劑、稀釋液、清洗劑均為日本Sysmex公司生產，儀器定期校準、各項指標均符合要求，室內質控均在控。雙目顯微鏡CX-23（日本OLympus），采血針及EDTA-K2抗凝真空管（紫），瑞氏-吉姆薩染液一、二。

1.3 檢測原理

全自動血液分析儀主要用2種通道檢測血小板，分別是電阻抗法和熒光染色法檢測通道。PLT-F通道是作為檢測血小板的專用通道，與以往分析儀（XE系列）的PLT-O檢測用試劑相比，該通道所用的改良試劑可對血小板特異性染色，從而盡可能更精準地檢測血小板。PLT-F試劑染色血小板內含有大量核酸的線粒體和內質網。PLT-F試劑只濃染含有細胞器的血小板，幾乎不染色細胞膜。PLT-F試劑的熒光強度可明確區別血小板和紅細胞碎片。

1.4 檢測方法

成人在空腹的狀態下抽取靜脈血2 mL，加入含有EDTA-K2的真空抗凝管中，輕輕顛倒混勻8次，用PLT-F法計數PLT，2 h完成檢測。每次檢驗標本前，做質控，保證儀器相關監測指標在控前提下檢測標本。

人工推片法制作血涂片：用楔形技術制作血涂片，在玻片一端的1/3處，加1滴（約0.05 mL）充分混勻的血液，握住另一張邊緣光滑的推片。以30°～45°角使血滴沿推片迅速散開，快速、平穩推動推片至載玻片的另一端，制作頭、體、尾分明的舌狀的血膜，厚薄適宜的血涂片。

瑞氏-吉姆薩染色：待血膜干透后，滴加瑞氏-吉姆薩染色液，讓染液完全遮蓋血膜，再滴加緩沖液，用洗耳球將染液與緩沖液混勻，靜止染色10 min，然后用中性流動水沖去染液。

評估血小板數量及形態：選擇血片中分布均勻，無異常聚集或纖維蛋白絲區域，通過血涂片估算血小板數量，血小板數（109/L）≈每個油鏡視野中血小板平均個數×15（109/L）[5-6]，同時觀察血小板大小及形態。

2 結果

A組61份，其中PLT＜125×109/L的占55.73%，125×109/L～350×109/L的占41.00%，＞350×109/L的占3.27%，血小板大小不均；B組33份，其中PLT＜125×109/L的占3.03%，125×109/L～350×109/L的占63.63%，＞350×109/L的占33.34%，小血小板較多；C組61份，其中PLT＜125×109/L的占14.75%，125×109/L～350×109/L的占83.63%，＞350×109/L的占1.63%，血小板大小均勻；D組97份，其中PLT＜125×109/L的占29.89%，125×109/L～350×109/L的占71.11%，＞350×109/L的占0%，大血小板較多。

3 討論

血小板計數是血常規檢驗中一項重要的指標。當血管受損破裂時，血小板會在血管破裂處相互黏附，聚集形成血小板血栓，堵住破損的傷口，并釋放ADP、腎上腺素、花生四烯酸等血管活性物質，最終達到止血的作用。當血小板數量減少到一定程度時，可引起出血癥狀，出血量達到一定程度時是可以致命的。臨床醫生收到血小板計數減少報告時，會積極查找病因治療。當血小板計數出現異常時，血小板形態的異常更具有臨床意義[7]。

在本研究中，當血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR未顯示數值時，PLT＜125×109 /L的占55.73%，125×109/L～350×109/L的占41.00%，＞350×109/L的占3.27%，血小板大小不均，說明A組血小板計數低于參考區間的發生率最大，其次是血小板計數在參考區間范圍內，發生率最小的是血小板計數高于參考區間；當血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數值且P-LCR＜13%，PLT＜125×109/L的占3.03%，125×109/L～350×109/L的占63.63%，＞350×109/L的占33.34%，小血小板較多，說明B組血小板計數低于參考區間的發生率最小，血小板計數在參考區間范圍內發生率最大，血小板計數高于參考區間發生率位于本組第2名；當血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數值且P-LCR在13%～43%時PLT＜125×109/L的占14.75%，125×109/L～350×109/L的占83.62%，＞350×109/L的占1.63%，血小板大小較均勻，說明C組血小板計數在參考區間范圍內發生率最大，血小板計數低于參考區間的發生率位于本組第2名，血小板計數高于參考區間發生率最小；當血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數值且P-LCR＞43%時，PLT＜125×109/L的占29.89%，PLT125×109/L～350×109/L的占70.11%，PLT＞350×109/L的占0%，大血小板較多，說明D組血小板計數在參考區間范圍內發生率最大，血小板計數低于參考區間的發生率位于本組第2名，血小板計數高于參考區間發生率最小。

本研究大血小板比率與血小板計數及形態大小之間存在一定的關系，在無聚集、小紅細胞或細胞碎片的影響下，熒光核酸染色法計數與人工推片法評估血小板數計數結果相近。人工推片法評估是血小板計數估計和形態學觀察重要方法之一。

4 結語

血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR未顯示數值時，無論是否滿足血球儀有異常報警提示、計數值低于實驗室確認的儀器線性范圍、首次計數結果＜100×109/L或＞1 000×109/L這3項的其中之一，都需檢查標本并推片復檢。血常規檢測后PDW、MPV、PCT、P-LCR顯示數值時，如滿足以上3項中的其中之一，需檢查標本并推片復檢；如不滿足，可不推片復檢。

有文獻報道，對血小板形態異常進行描述時，可對血小板的大小、形狀、顆粒是否減少或缺乏以及分布情況進行描述，對巨大血小板需采用分級方式進行報告[8]。檢驗技師在用血液分析儀檢測血小板時，應關注血小板計數結果和異常報警，需注意標本是否受到因素干擾血小板數值（例如血液凝塊、血小板聚集、血小板衛星現象、冷球蛋白、細胞碎片等），及時推片復檢。

參考文獻

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[2] 尚紅，王毓三，申子瑜，等.全國臨床檢驗操作規程[M].4版.北京：人民衛生出版社，2015：14-25.

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（編輯：張興亞）