發(fā)酵花生粕對肉雞肝臟抗氧化指標、基因表達和經(jīng)濟效益的影響

馮 沖，李 偉

（南陽農(nóng)業(yè)職業(yè)學院，河南南陽 473000）

花生粕是花生油榨取后的副產(chǎn)品，其蛋白和糖類營養(yǎng)物質(zhì)含量極高，被廣泛用作蛋白飼料（孟桂元等，2020）。有研究指出，優(yōu)質(zhì)花生粕中粗蛋白質(zhì)含量可達50% 以上（李建軍等，2012）。同時，花生粕中含有畜禽生長發(fā)育所有必需氨基酸，特別是精氨酸，含量可達5% 以上（趙朝陽等，2015）。盡管花生粕營養(yǎng)豐富，但由于其中含有一定抗營養(yǎng)因子，嚴重影響其飼用價值。柳杰等（2010）研究指出，花生粕中含有的抗營養(yǎng)因子，如蛋白酶抑制因子、血球凝集素和植酸，不僅嚴重影響動物的消化吸收，同時其刺激較強，極易造成腸道損傷；其次，盡管花生粕粗蛋白質(zhì)含量較高，但其氨基酸組成嚴重不均衡，蛋氨酸、蘇氨酸，尤其是賴氨酸含量較低，難以滿足動物的生長需要。有研究指出，賴氨酸不足會對動物生長發(fā)育產(chǎn)生顯著負面影響（任曉靜等，2013）；第三，因富含油脂，花生粕極易受黃曲霉菌污染，導致黃曲霉毒素B1累積（徐運杰，2011）。因此，目前大量研究使用物理、化學和生物等方法對花生粕進行前處理，以增強其飼用價值。有研究指出，酶菌協(xié)同發(fā)酵能有效提高花生粕的營養(yǎng)價值，降解抗營養(yǎng)因子和黃曲霉毒素含量（蓋云霞等，2007）。肝臟是畜禽三大代謝（糖、脂和蛋白）途徑的樞紐，同時也是畜禽最重要的解毒器官，可發(fā)揮重要的抗氧化作用（魯鑫濤等，2020）。據(jù)此，本試驗以菌酶制劑發(fā)酵處理花生粕，探究對肉雞肝臟抗氧化機能和經(jīng)濟效益的影響，為行業(yè)研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 花生粕購自河北某飼料公司，根據(jù)楊樹梅（2021）所述方法進行菌酶協(xié)同發(fā)酵處理，根據(jù)花生粕重量，按180 U/g、2.0 U/g 和5% 的比例添加蛋白酶、植酸酶和植物乳桿菌。36 ～37℃恒溫發(fā)酵48 h。發(fā)酵花生粕養(yǎng)分見表1。發(fā)酵后，花生粕中黃曲霉毒素B1含量由139.47 μg/kg 下降至7.4 μg/kg。

表1 發(fā)酵花生粕養(yǎng)分水平 %

1.2 試驗設計 試驗將720 羽健康肉雞隨機分為4 組，每組9 個重復，每重復20 羽。各組日糧分別使用0%、2%、4% 和8% 的發(fā)酵花生粕替代花生粕，日糧組成及營養(yǎng)水平見表2，試驗共計42 d。

表2 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 測定指標與方法

1.3.1 肝臟抗氧化指標 試驗結束后，每組選8只肉雞進行屠宰，屠宰后摘取肝臟，吸凈表面血水后，一份裝入凍存管-80℃保存，一份轉移至冰包中用于酶活性檢測。準確切取綠豆粒大小肝臟樣本，加入10 倍體積的PBS 和勻漿珠，在提前預冷的低溫勻漿機中勻漿，離心收集上清，使用試劑盒（南京建成）檢測各上清液中T-SOD、T-AOC、SOD1、CAT、GPX 活性以及MDA 含量。同時測定各樣本總蛋白含量對酶活數(shù)據(jù)進行校正。

1.3.2 mRNA 表達分析 取出凍存的肝臟樣本，Trizol 法提取總RNA，使用AG 反轉錄試劑盒反轉錄，使用SYBR GREEN 法進行熒光定量。使用2-△△CT法，以β-actin 為內(nèi)參基因計算各基因相對表達量。本試驗所有引物序列如表3。

表3 引物序列

1.3.3 經(jīng)濟效益計算 根據(jù)采食量和增重情況分別計算肉雞的增重成本，根據(jù)肉雞出欄價格計算毛利潤。

1.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 數(shù)據(jù)整理后使用SAS 9.4 軟件進行單因素方差分析，采用LSD’s 法進行多重比較，P＜0.05 表示組間差異顯著，0.05≤P＜0.10 表示數(shù)據(jù)有變化趨勢。

2 結果

2.1 發(fā)酵花生粕對肉雞肝臟抗氧化指標的影響 由表4 可知，使用4% ～8% 的發(fā)酵花生粕可顯著提高肉雞肝臟T-SOD 和CAT 酶活性（P＜0.05）；使用8% 的發(fā)酵花生粕可顯著提高肉雞肝臟T-AOC 能力（P＜0.05）；使用4% ～8%的發(fā)酵花生粕可顯著降低肉雞肝臟MDA 含量（P＜0.05）；此外，日糧添加發(fā)酵花生粕對肉雞肝臟SOD1 和GPX 酶活性均無顯著影響（P＞0.05）。

表4 發(fā)酵花生粕對肉雞肝臟抗氧化指標的影響

2.2 發(fā)酵花生粕對肉雞肝臟抗氧化基因表達的影響 由表5 可知，2% 的發(fā)酵花生粕添加量可顯著降低肉雞肝臟GPX1 基因表達水平（P＜0.05）；4% 和8% 的發(fā)酵花生粕添加量可顯著提高肉雞肝臟SOD3 和CAT 基因表達水平（P＜0.05）；8% 的發(fā)酵花生粕添加量可顯著提高肉雞肝臟SOD2 和GST 基因表達水平（P＜0.05）；發(fā)酵花生粕對肉雞肝臟SOD1 基因表達水平無顯著影響（P＞0.05）。

表5 發(fā)酵花生粕對肉雞肝臟抗氧化基因表達的影響

2.3 發(fā)酵花生粕對肉雞經(jīng)濟效益的影響 由表6 可知，菌酶協(xié)同發(fā)酵處理后，日糧成本為2.874、2.880、2.886 和2.892 元；日糧成本分別為7.22、7.30、7.24 和7.36 元；綜合計算毛利潤分別為8.24、8.61、8.92 和9.34 元，其中4% 和8% 的替代量組毛利潤顯著高于對照組（P＞0.05）。

表6 發(fā)酵花生粕對肉雞經(jīng)濟效益的影響

3 討論

肝臟在畜禽循環(huán)和代謝中發(fā)揮了重要的樞紐作用，此外，肝臟也發(fā)揮重要的解毒和抗氧化作用（楊樹梅，2021）。大量研究表明，發(fā)酵能有效降低花生粕中的黃曲霉毒素B1含量，王曉玲等（2021）使用枯草芽孢桿菌對花生粕進行發(fā)酵處理，其中AFB1可降解90% 以上。邱天宇等（2020）發(fā)現(xiàn)，使用黑曲霉菌能降低花生粕中95% 的AFB1。前人研究認為，過量的AFB1會破壞肝臟結構，嚴重者甚至能誘導肝臟癌變，有研究揭示了AFB1誘導肝臟炎癥反應、纖維化和干細胞死亡（潘奎和石玉祥，2023）。氧化應激被認為是AFB1誘導肝臟損傷最重要的病理性機制（林露茜，2023）。張微漾等（2023）使用不同菌種對花生粕進行發(fā)酵處理，以對DPPH 自由基的清除效率為參考依據(jù)，結果發(fā)現(xiàn)，在不同的發(fā)酵條件下，發(fā)酵花生粕均能有效清除DPPH 自由基。本試驗結果表明，發(fā)酵花生粕能顯著提高肉雞肝臟T-AOC 能力顯著提高，提示其肝臟抗氧化能力的增強。由SOD1、2 和3 三種同工酶構成的超氧化物歧化酶是畜禽最重要的抗氧化酶之一。He 等（2017）指出，SOD 可將超氧化物轉化為O2和H2O2，隨后在CAT 的作用下，將H2O2轉化為H2O 和O2。本試驗觀察到T-SOD和CAT 活性提高，提示其抗氧化能力增強。此外，本試驗檢測到MDA 含量降低，作為衡量脂質(zhì)過氧化的標志物，其含量的降低表明其氧化應激程度減弱（He 等，2017）。此外，本試驗對肉雞肝臟進行抗氧化相關基因表達分析發(fā)現(xiàn)，補充發(fā)酵花生粕能顯著提高肉雞肝臟中GPX1、SOD2、SOD3、CAT、和GST 的基因表達水平，這與韓坤良等（2023）在蛋雞上的研究結果基本一致，也與本試驗檢測到抗氧化酶活性的提高一致。

本試驗結果表明，完全使用發(fā)酵花生粕能顯著提高肉雞日增重。盡管發(fā)酵處理略微增加飼料成本，使用2% 的發(fā)酵花生粕日糧成本提高0.006元。綜合計算總飼料成本分別為7.22、7.30、7.24和7.36 元，毛利分別為8.24、8.61、8.92 和9.34 元，毛利差異顯著。

4 結論

綜上所述，本試驗結果表明，使用發(fā)酵花生粕替代花生粕能顯著提高肉雞肝臟抗氧化性能，其中8% 的替代量組經(jīng)濟效益最佳。