甲狀腺癌組織的CCL11、VEGF表達與病理特征的關系

張紅紅 李涌

1青島濱海學院附屬醫院病理科，青島 266500；2濟寧市第三人民醫院病理科，濟寧 272100

甲狀腺癌是內分泌系統較為常見的惡性腫瘤之一。調查顯示，其發病率占全身惡性腫瘤的1%～5%，每年發病率遞增4%左右，其中女性患者的發病率遠高于男性［1］。因為甲狀腺癌組織起源不同，不同病理特征的生物學行為存在多樣性，預后差異較大，所以早確診并針對性治療是改善患者預后的關鍵［2］。血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）作為促血管生長因子，與多種惡性腫瘤血管形成及生長浸潤均存在密切關聯［3］。嗜酸性粒細胞趨化因子（CC chemokine ligand 11，CCL11）是一種十分重要的趨化因子，在多種惡性腫瘤中均處于高表達狀態，但目前臨床對于該趨化因子在甲狀腺癌中表達的研究較少［4］。為此，本文分析CCL11、VEGF表達與甲狀腺癌病理特征的關系。

資料與方法

1.一般資料

納入標準：符合《2022年WHO甲狀腺腫瘤分類概述》中甲狀腺癌的診斷標準［5］；病理檢查確診為甲狀腺癌；TNM（T為原發灶，N為淋巴結，M為遠處轉移）分期Ⅰ～Ⅳ期。排除標準：免疫系統存在缺陷；合并代謝性疾病；合并嚴重心腦血管疾病；近3個月服用抗生素治療。根據納入、排除標準對2020年12月至2022年12月在青島濱海學院附屬醫院收集的120例甲狀腺癌組織病理標本及同期收集的60例甲狀腺良性疾病組織標本進行回顧性研究。將120例甲狀腺癌組織病理標本設為觀察組，將60例甲狀腺良性疾病組織標本設為對照組。觀察組男42例，女78例，年齡25～87（54.58±5.36）歲；病理類型：乳頭狀癌70例，濾泡狀癌24例，未分化癌18例，髓樣癌8例。對照組男21例，女39例，年齡26～86（53.66±5.65）歲；病理類型：結節性甲狀腺腫39例，甲狀腺腺瘤21例。兩組性別、年齡等比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）。本研究已獲得醫學倫理委員會批準。患者對該研究均知情同意。

2.方法

將兩組組織標本切成3片厚度為4 μm的薄片，采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法（streptavidin-peroxidasemethod，SP）免疫組化技術對CCL11、VEGF表達進行檢測，相關操作嚴格按照說明書進行。首先采用將切片置入二甲苯中脫蠟，采用無水乙醇、體積分數95%、85%、70%乙醇水化處理，于3% H2O2作用15 min，消除內源性過氧化物酶；EDTA（pH 8.0）修復液常規修復，微波爐高火、解凍、中高火分別加熱10、2、10 min以暴露抗原位點，等待自然冷卻，正常山羊血清室溫封閉15 min，分別加兔抗人CCL11蛋白單克隆抗體試劑和兔抗人VEGF多克隆抗體，4 ℃孵育過夜，次日切片，采用1×PBST（1‰Tween）漂洗3次，5 min/次。DAB顯色，10%蘇木素復染，乙醇脫水，經二甲苯透明、封片，于顯微鏡下觀察。兔抗人CCL11蛋白單克隆抗體試劑、兔抗人VEGF多克隆抗體試劑、SP試劑盒、DAB顯色劑均由福州邁新生物技術開發公司提供。

CCL11于細胞膜或細胞質內著色，呈棕黃色顆粒，根據染色程度和陽性腫瘤細胞百分數評估：0分表示無染色；1分表示淺著色；2分表示中等著色；3分表示強著色。腫瘤細胞分數定義：0分表示＜10%；1分表示10%～＜50%；2分表示50%～75%；3分≥75%。陽性定義：以上兩項相加0～1分為陰性（-）；≥2分為陽性（+）。VEGF于細胞膜和細胞漿著色，細胞陽性染色部分呈棕黃色、高倍鏡下陽性細胞數占視野＜10%為陰性（-），占視野≥10%以上為陽性（+）。

3.統計學方法

采用統計學軟件SPSS 23.0進行組間檢驗，采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

結果

1.兩組CCL11、VEGF陽性表達率

觀察組的CCL11、VEGF陽性表達率均明顯高于對照組（均P＜0.05），見表1。

2.甲狀腺組織CCL11、VEGF陽性表達與病理特征的關系

不同甲狀腺組織腫瘤分化程度、有無復發或轉移患者CCL11陽性表達比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）。甲狀腺組織TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結轉移、浸潤深度為T3+T4的患者CCL11陽性表達率明顯高于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移、浸潤深度為T1+T2的患者（均P＜0.05）；甲狀腺組織低分化、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結轉移、浸潤深度為T3+T4、有復發或轉移的患者VEGF陽性表達率明顯高于高+中分化、TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移、浸潤深度為T1+T2、無復發或轉移的患者（均P＜0.05）。見表2。

表2 120例甲狀腺癌組織病理標本CCL11、VEGF陽性表達與病理特征的關系[例（%）]

3.甲狀腺癌組織CCL11和VEGF陽性表達與病理特征的相關性

甲狀腺癌組織CCL11陽性表達與TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度呈正相關（均P＜0.05）；甲狀腺癌組織VEGF陽性表達與分化程度、TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度、復發或轉移呈正相關（均P＜0.05）。見表3。

表3 120例甲狀腺癌組織病理標本CCL11和VEGF陽性表達與病理特征的相關性

討論

1.甲狀腺癌組織CCL11表達與病理特征的關系

CCL11主要位于人類染色體17q11中，其表達具有器官差異性，在腫瘤患者的病灶組織及其體液中均會出現異常表達的情況，是臨床常用于診斷并預測惡性腫瘤發生發展及預后的重要指標［6］。相關體外實驗認為，CCL11能夠將前列腺癌細胞的上皮細胞間質化，進而加速前列腺癌細胞的侵襲和轉移速度，促進病情進展［7-8］。目前，有不少研究發現，CCL11表達水平在多種惡性腫瘤發生發展及預后評估中均具有十分重要的意義［9-10］。相關研究認為，CCL11與結直腸癌患者淋巴結轉移情況、腫瘤復發情況、隨訪死亡情況均存在一定關聯，是評估結直腸癌發生發展及預后的重要預測因子［11］。臨床對于CCL11與甲狀腺癌組織病理特征之間的關系的研究較少。本研究發現，相較于良性的甲狀腺組織而言，甲狀腺癌組織的CCL11陽性表達率更高；且甲狀腺組織TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結轉移、浸潤深度為T3+T4的患者CCL11陽性表達率均比TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移、浸潤深度為T1+T2的患者高；CCL11陽性表達與TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度呈正相關。這提示CCL11是促進甲狀腺癌發生、發展的重要趨化因子。研究發現，分化型甲狀腺癌患者的血清CCL11表達水平明顯比甲狀腺良性疾病和健康對照組患者低，且與患者的淋巴結轉移情況、浸潤深度和TNM分期存在一定關聯，提示CCL11直接參與了分化型甲狀腺癌的發生發展過程，與本研究結果相似［12］。

2.甲狀腺癌組織VEGF表達與病理特征的關系

VEGF可選擇性在血管內皮細胞膜上flt-1和flk-1兩種Ⅲ型酪氨酸激酶受體中發揮作用，加快血管的形成速度［13-14］。VEGF是針對內皮細胞特異性最高和促進腫瘤血管生成作用最強的調節因子。VEGF與惡性腫瘤發生發展及其預后有相關性［15-16］。相關研究發現，VEGF在胃癌組織中的陽性表達率高于癌旁組織，且其陽性表達與腫瘤大小、淋巴結轉移、分化程度、臨床分期及浸潤深度具有相關性，可能參與了胃癌的發生發展過程［17］。本研究也發現，與良性的甲狀腺組織相比，甲狀腺癌VEGF陽性表達率更高；與甲狀腺癌組織高+中分化、TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移、浸潤深度為T1+T2、無復發或轉移的患者相比，低分化、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結轉移、浸潤深度為T3+T4、有復發或轉移的患者VEGF陽性表達率更高；VEGF陽性表達與分化程度、TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度、復發或轉移呈正相關。這提示VEGF與甲狀腺癌的發生、發展及其預后存在密切關聯。多位學者研究認為，血清VEGF與甲狀腺癌的淋巴結轉移情況存在一定關聯。有研究認為，腫瘤越大、發生淋巴結轉移的患者血清VEGF水平越高，提示血清VEGF與甲狀腺癌的侵襲、轉移能力有關［18-19］。血清VEGF水平在甲狀腺癌術后轉移或復發中呈現出高表達的狀態，提示VEGF與甲狀腺癌的預后存在一定關聯［20］。

綜上所述，CCL11、VEGF參與了甲狀腺癌發生、發展的過程中，根據CCL11、VEGF的陽性表達情況可有效評估甲狀腺癌患者的病情、預后。