一例鵪鶉大腸桿菌病的診治

劉風波 馮曉東 連亮亮

摘? 要：文章對鵪鶉疑似大腸桿菌病進行實驗室確診，通過藥敏試驗篩選敏感藥物，并結合綜合防制措施以預防鵪鶉大腸桿菌病。

關鍵詞：鵪鶉大腸桿菌病；實驗室確診；藥敏試驗

中圖分類號：S854.5+3 文獻標志碼：A 文章編號：1001-0769（2024）02-0068-03

鵪鶉大腸桿菌病是由埃希大腸桿菌（Escherichi coli）感染鵪鶉引起的一種常見病。該病一年四季均可發生，可感染各年齡段鵪鶉，一般6月齡后的鵪鶉發病率較高，雖不會引起大群暴發性死亡，但對產蛋率及蛋品質影響很大，加之反復發作，往往會帶來巨大經濟損失[1]。大腸桿菌廣泛分布于自然界中，畜禽都易感染。該病主要通過消化道感染鵪鶉，發生的主要原因是飼養密度過大，籠舍消毒不徹底，衛生條件差。飼養管理不善，飼養環境長期潮濕不潔，氣溫突變，過度炎熱及疫苗接種造成的應激反應，都能誘發該病和加重病情；某些疾病，如新城疫、呼吸道病，常并發或繼發感染。

1? 材料和方法

1.1 病例來源

本地養殖戶飼養的2月齡鵪鶉發病，送檢時已死亡。問診得知鵪鶉拉白色稀糞，產蛋率下降，產軟殼蛋、破殼蛋增多，戶主曾滴鼻點眼接種新城疫疫苗，并在飲水中添加環丙沙星進行控制，不見好轉。

臨床上，發病鵪鶉消瘦，上下眼瞼腫脹，兩腿前后伸張，肛門周圍絨毛污穢不堪。剖檢發現，尸體眼前房積膿；肝腫脹，呈暗紅色；肝臟、心臟表面均有一層灰白色纖維素性薄膜覆蓋；膽囊腫大，膽汁充盈；小腸脹氣，黏膜增厚；肺腸充血出血；輸卵管腫脹；卵巢變形。

1.2 主要試劑

麥康凱瓊脂，普通營養瓊脂，伊紅美藍瓊脂，三糖鐵瓊脂，甲基紅試劑，葡萄糖蛋白胨水培養基，營養肉湯，革蘭染液。藥敏片包括阿莫西林（amoxicillin，AMX）、氨芐西林（ampicillin，SU）、頭孢噻肟（ceftizoxime，CTX）、頭孢他啶（ceftazidime，CED）、頭孢曲松鈉（ceftriaxone sodium，CFX）、卡那霉素（kanamycin，K）、慶大霉素（gentamicin，GM）、氟苯尼考（florfenicol，FF）、泰樂菌素（tylosin，TL）、硫酸紅霉素（erythromycin sulfate，E）、利福平（rifampicin，RA）、氧氟沙星（ofloxacin，OFL）、諾氟沙星（norfloxacin，NOR）、環丙沙星（ciprofloxacin，CIP）、恩諾沙星（enophthalmin，ENR），均為自制[1]，密封低溫保存備用。

1.3 細菌的分離培養

無菌條件下，取發病鵪鶉的肝、心臟切片樣本，分別劃線接種于普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、伊紅美藍瓊脂平板及營養肉湯，于37 ℃培養24 h后觀察結果。

1.4 涂片染色鏡檢

挑取普通瓊脂平板上可疑菌落涂布于載玻片上，革蘭染色，在油鏡下觀察菌落形態。

1.5 生化試驗[2]

1.5.1 糖類分解試驗

挑取普通瓊脂平板上可疑菌落，隨后接種于各種糖培養基上，在37 ℃恒溫箱中培養24 h，觀察結果。

1.5.2 硫化氫試驗

挑取普通瓊脂平板上可疑菌落，接種于營養肉湯中，置于37 ℃恒溫箱培養6～8 h。用無菌接種針蘸取純培養物，沿管壁作穿刺三糖鐵培養基，37 ℃下培養24 h，隨后觀察培養基顏色變化。

1.5.3 甲基紅試驗

取1.5.2培養的肉湯培養物，接種于葡萄糖蛋白胨水培養基中，在37 ℃恒溫箱中培養24 h，取出后加甲基紅試劑3滴，觀察培養基顏色變化。

1.5.4 運動力檢查

滅菌接種針蘸取1.5.2培養的肉湯培養物，垂直刺進半固體培養基的瓊脂柱中間直至管底，置37 ℃恒溫箱中培養18 h，而后取出檢查。

1.6 動物試驗

選取體重18～20 g小白鼠4只做動物試驗。挑取普通瓊脂平板上的單個菌落接種于營養肉湯中，置于37 ℃恒溫箱中培養6～8 h，取1 mL菌液，用生理鹽水10倍稀釋，每只小鼠腹腔接種0.2 mL稀釋的菌液，飼養觀察結果。

1.7 藥敏試驗

采用紙片瓊脂擴散法（Baner-Kirby建立的K-B法）[3]進行藥敏試驗。

2? 試驗結果

2.1 細菌培養特性

普通瓊脂平板上長出形態凸起、光滑濕潤、灰白色、半透明、邊緣整齊、有特殊的糞便樣臭味的大菌落。麥康凱瓊脂平板上長出粉紅色大菌落，稍凸起，表面光滑濕潤，菌落邊緣波狀。伊紅美藍瓊脂平板上為圓形藍紫色菌落，中心為紫黑色帶金屬光澤。肉湯呈均勻渾濁，管底有黏液樣沉淀物。

2.2 染色鏡檢結果

油鏡下觀察到單個散在的兩端鈍圓的革蘭陰性短桿菌。

2.3 生化培養

2.3.1 分離菌發酵特點

分離菌能發酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖、木糖、甘露醇，產酸產氣，產生靛基質，不發酵蔗糖。

2.3.2 培養基變化

培養基顏色無變化，未產生硫化氫。

2.3.3 培養液變化

培養液為黃色，甲基紅試驗為陰性。

2.3.4 運動力觀察

檢查見由穿刺線向四周擴散生長，周圍的培養基變渾濁，該菌具有運動力。

2.4 動物試驗

小鼠接種菌液后，在18 h內全部死亡。取死亡小鼠心臟和肝臟切片樣本、腹水樣本，制成抹片，革蘭染色鏡檢，并將樣本劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，置于37 ℃恒溫箱內培養24 h后觀察結果。鏡檢結果為兩端鈍圓的革蘭陰性短小桿菌，麥康凱瓊脂培養基表面有粉紅色、稍凸起、表面光滑濕潤、菌落邊緣波狀的大菌落。與從原發病鵪鶉的樣本中分離出的菌株形態一致。綜上試驗結果可判斷，從原發病鵪鶉中分離出的細菌為致病性大腸桿菌[4]。

2.5 藥敏試驗結果

藥敏試驗結果如表1所示。按以下標準判定[5]：抑菌圈直徑大于20 mm為極度敏感；抑菌圈直徑大于15 mm且不超過20 mm為高度敏感；抑菌圈直徑大于10 mm且不超過15 mm為中度敏感；抑菌圈直徑大于0且不超過10 mm為耐藥。

3? 分析與討論

3.1 藥敏試驗結果分析

本研究表明，引起本地養殖戶2月齡鵪鶉發病的致病性大腸桿菌對頭孢噻肟（CTX）、頭孢曲松鈉（CFX）、慶大霉素（GM）和頭孢他啶（CED）極度敏感，對氟苯尼考（FF）高度敏感，對阿莫西林（AMX）、氨芐西林（SU）、卡那霉素（K）、泰樂菌素（TL）、硫酸紅霉素（E）、利福平（RA）、氧氟沙星（OFL）、諾氟沙星（NOR）、環丙沙星（CIP）和恩諾沙星（ENR）耐藥。因此，頭孢菌素類抗生素、胺基糖苷類抗生素、氯霉素類抗生素可作為治療藥物。

3.2 大腸桿菌病發病原因分析

3.2.1 環境因素

飼養環境衛生條件差、管理不當與大腸桿菌病有著密切的關系。當舍內空氣不好，陰暗潮濕，塵埃過重，飼料飲水等被大腸桿菌污染時，易使大腸桿菌通過呼吸道和消化道感染鵪鶉，從而引起發病。部分養殖戶未對設施進行消毒，或者對消毒工作不重視，大量重復地濫用藥物，致耐藥菌株產生。大多數養殖戶在鵪鶉群發病時，便“病急亂投醫”，也不考慮藥物是否有效，或者一旦有效，便長時間大量使用同一種抗菌藥，結果導致大腸桿菌耐藥性增加，鵪鶉的免疫力急劇下降，最后不但不能治療疾病，反而造成耐藥菌株種類超標[6]，造成大腸桿菌的發生與流行。

3.2.2 應激因素

在正常情況下鵪鶉的腸道內存在大量的大腸桿菌，舍內也廣泛存在大腸桿菌，當飼養管理、環境衛生條件變差，特別是鵪鶉群受到環境因素的影響，如高溫，轉群，驚嚇，飼養密度過大，突然更換飼料，機體內環境發生改變而使抵抗力下降，導致大腸桿菌病發生。

參考文獻

[1] 陸承平．獸醫微生物學[M]．5版．北京：中國農業出版社，2013.

[2] 姚火春．獸醫微生物學實驗指導[M]．2版．北京：中國農業出版社，2004.

[3] （美）卡爾尼克（Calnek B. W.）主編．高福，劉文軍主譯．禽病學：第9版[M]．北京：中國農業大學出版社，1991.

[4] 甘肅農業大學．獸醫微生物學[M]．2版．北京：農業出版社，1991.

[5] 朱模忠．獸藥手冊[M]．北京：化學工業出版社，2002.

[6] 崔增學，高樹云．耐藥性大腸桿菌病的診治[J]．中國禽業導刊，2002，19（9）：33.