小兒麻甘顆粒中農藥殘留篩查與風險評估*

劉 凱，朱文迪，萬 幸，徐 玲，涂奇軍△

（1.湖北省藥品監督檢驗研究院·湖北省藥品檢測與工程技術研究中心·國家藥品監督管理局中藥質量控制重點實驗室，湖北 武漢 430075；2.湖北省藥品監督管理局審評中心，湖北 武漢 430075）

小兒麻甘顆粒由麻黃、黃芩、紫蘇子、甘草、桑白皮、苦杏仁、地骨皮、石膏8味中藥材組方，具有平喘止咳、利咽祛痰功效。中藥材的種植期較長，防治病蟲害及土壤中的農藥會在植物體內蓄積，不可避免地產生農藥殘留問題［1］。原料藥材中的殘留農藥可能會轉移到制劑中，增加制劑的安全風險。本研究中在2020年版《中國藥典（四部）》中收錄的33種禁用農藥的基礎上，結合文獻檢索及產地調研，篩選出7種中藥材中易檢出的17種限用農藥品種［2-9］。采用氣相色譜串聯質譜（GC-MS/MS）法和高效液相色譜串聯質譜（HPLC-MS/MS）法進行測定，分析制劑及其原料藥材的農藥殘留，并用每日允許攝入量（ADI）評估殘留農藥的安全風險［10］?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890-QQQ 型氣相色譜-質譜聯用儀（美國Agilent 公司）；LC 30A-4500 Q-Trap 型液相色譜-質譜聯用儀（美國AB Sciex 公司）；AH-30 型全自動均質器（睿科集團股份有限公司）；Buchi Syncore型平行濃縮蒸發儀（瑞士Buchi公司）；XS204型電子分析天平（瑞士Mettller Toledo 公司，精度為0.1 mg）；ST16R 型離心機（美國Thermo 公司）；Mili-Q 型純水機（德國Merck公司）。

1.2 試藥

樣品來自國家食品藥品監督管理局2022年的評價性抽樣，包括8 個生產廠家的19 批小兒麻甘顆粒樣品（信息及檢出農藥見表1）；收集到8個生產廠家提供的麻黃、黃芩、紫蘇子、甘草、桑白皮、苦杏仁、地骨皮7味中藥材，共56 個批次，其中藥材對應制劑批次均為2022 年（信息及檢出農藥見表2）；禁用農藥混合對照品溶液（中國食品藥品檢定研究院，規格為每支1.2 mL，批號為610020-202001）；磷酸三苯酯（北京迪科馬科技有限公司，貨號為3241660，批號為47753，含量為99.7%）；乙腈中16種限用農藥混合對照品溶液（貨號為A6058），多菌靈對照品溶液（規格為每支1 mL，質量濃度為100μg/mL），均購于天津阿爾塔科技有限公司；乙腈為色譜純，氯化鈉為分析純；HLB 小柱（200 mg/6 mL ＜60μm ＞，納普分析技術有限公司，貨號為HLB210705）。

表1 小兒麻甘顆粒樣品信息與檢出農藥Tab.1 Sample information of Xiao′er Magan Granules and detected pesticides

表2 原料藥材信息與檢出農藥Tab.2 Information of raw herbal materials and detected pesticides

2 方法與結果

2.1 色譜與質譜條件及系統適用性試驗

2.1.1 GC-MS/MS 法

色譜柱：DB-17MS 毛細管柱（30 m × 0.25 mm，0.25μm）；進樣口溫度：250 ℃，不分流進樣；載氣：高純度氦氣；進樣口模式：恒壓模式；柱前壓：146 kPa；程序升溫：初始溫度為60 ℃，保持1 min，以30 ℃/min的速率升至120 ℃，再以10 ℃/min 的速率升至160 ℃，2 ℃/min的速率升至230 ℃，15 ℃/min 的速率升至300 ℃，保持6 min；電離方式：電子轟擊源（EI）；離子源溫度：250 ℃；碰撞氣：氮氣；質譜傳輸線溫度：250 ℃；掃描模式：多反應監測模式（MRM）。對照品溶液的總離子流（TIC）圖見圖1。各化合物分析參數見表3。

圖1 小兒麻甘顆粒制劑基質對照品溶液GC-MS/MS總離子流圖Fig.1 GC-MS/ MS total ion current chromatograms of matrix reference solution in Xiao′er Magan Granules preparation

表3 各農藥化合物GC-MS/MS分析參數與檢測限、定量限、線性范圍Tab.3 GC-MS/ MS parameters and limits of determination，limits of quantification，linear ranges of various pesticide compounds

2.1.2 HPLC-MS/MS 法

色譜柱：Shim-pack XR-ODS Ⅱ柱（75 mm×2 mm，2.2 μm）；流動相：A 為0.1%甲酸溶液（5 mmol/ L 甲酸銨），B 為含5 mmol/L 的甲酸銨（0.1%甲酸溶液）-乙腈（5∶95，V/V），梯度洗脫（0～1 min 時30%B，1～17 min 時30%B →100%B，17～19 min 時30%B）；流速：0.3 mL/ min；柱溫：40 ℃；電離方式：ESI（+）；掃描模式：MRM。對照品溶液的TIC 圖見圖2。各化合物分析參數見表4。

圖2 小兒麻甘顆粒制劑基質對照品溶液HPLC-MS/MS總離子流圖Fig.2 HPLC-MS/ MS total ion current chromatograms of matrix reference solution in Xiao′er Magan Granules preparation

表4 各農藥化合物HPLC-MS/MS分析參數與檢測限、定量限、線性范圍Tab.4 HPLC-MS/ MS parameters and limits of determination，limits of quantification，linear ranges of various pesticide compounds

2.2 溶液制備

農藥混合對照品溶液：精密量取禁用農藥混合對照品溶液1 mL，置20 mL容量瓶中，加乙腈定容，作為禁用農藥混合對照品溶液。精密量取限用農藥混合對照品溶液、多菌靈對照品溶液各1 mL，置20 mL容量瓶中，加乙腈定容，作為限用農藥混合對照品溶液。

GC-MS/MS 法分析用內標溶液：取磷酸三苯酯對照品10 mg，精密稱定，置500 mL容量瓶中，加乙腈定容，精密量取500μL，置100 mL容量瓶中，加乙腈定容，即得。

黃芩、甘草空白基質溶液：取空白基質樣品（過3號篩）10 g，精密稱定，加氯化鈉1 g，立即搖勻，再加入乙腈50 mL，勻漿處理2 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，沉淀，再加乙腈50 mL，勻漿處理1 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，合并上清液，減壓濃縮至3～5 mL，放冷，用乙腈稀釋至5 mL，搖勻，即得。

紫蘇子、小兒麻甘顆粒制劑樣品空白基質溶液：取空白基質樣品（過3號篩）10 g，精密稱定，加氯化鈉1 g，立即搖散，再加入乙腈50 mL，勻漿處理2 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，沉淀，再加乙腈50 mL，勻漿處理1 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，合并上清液，減壓濃縮至3～5 mL，放冷，用乙腈稀釋至5 mL，搖勻，取5 mL，置凈化管中［含300 mg 硫酸鎂、100 mg乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）、100 mg 十八烷基鍵合硅膠柱（C18）］振搖10 min，取上清液，即得。

麻黃、苦杏仁、桑白皮、地骨皮空白基質溶液：取空白基質樣品（過3號篩）10 g，精密稱定，加氯化鈉1 g，立即搖散，再加入乙腈50 mL，勻漿處理2 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，沉淀，再加乙腈50 mL，勻漿處理1 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，合并上清液，減壓濃縮至3～5 mL，放冷，用乙腈稀釋至5 mL，搖勻，取5 mL，過HLB 小柱2次，即得。

基質混合對照品溶液：分別精密量取禁用農藥混合對照品溶液和限用農藥混合對照品溶液各10，20，50，100，150，200 μL，置進樣小瓶中，分別精密加入空白基質溶液各0.5 mL，加乙腈稀釋至1 mL，即得。

黃芩、甘草供試品溶液：取樣品（過3 號篩）5 g，精密稱定，加氯化鈉1 g，立即搖散，再加入乙腈50 mL，勻漿處理2 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，沉淀，再加入乙腈50 mL，勻漿處理1 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，合并上清液，減壓濃縮至3～5 mL，放冷，用乙腈稀釋至10 mL，搖勻，即得。

紫蘇子、小兒麻甘顆粒制劑樣品供試品溶液：取樣品（過3 號篩）5 g，精密稱定，加氯化鈉1 g，立即搖散，再加入乙腈50 mL，勻漿處理2 min，離心（轉速為4 000 r/ min），取上清液，沉淀，再加入乙腈50 mL，勻漿處理1 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，合并上清液，減壓濃縮至3～5 mL，放冷，用乙腈稀釋至10 mL，搖勻，取5 mL，置凈化管中（含300 mg 硫酸鎂、100 mg PSA、100 mg C18）振搖10 min，取上清液，即得。

麻黃、苦杏仁、桑白皮、地骨皮供試品溶液：取樣品（過3號篩）5 g，精密稱定，加氯化鈉1 g，立即搖散，再加入乙腈50 mL，勻漿處理2 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，沉淀，再加入乙腈50 mL，勻漿處理1 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，合并上清液，減壓濃縮至3～5 mL，放冷，用乙腈稀釋至10 mL，搖勻，取5 mL，過HLB小柱2次，即得。

2.3 測定方法

GC-MS/MS 法：分別精密量取上述基質混合對照品溶液和供試品溶液各1 mL，精密加入內標溶液0.3 mL，渦旋，混勻，濾過，取續濾液，精密吸取1μL，注入GCMS/MS儀，按內標標準曲線法計算。

HPLC-MS/ MS 法：分別精密量取上述基質混合對照品溶液和供試品溶液各1 mL，精密加入水0.3 mL，渦旋，混勻，濾過，取續濾液，精密吸取1μL，注入HPLCMS/MS儀，按外標標準曲線法計算。

2.4 方法學考察

線性關系考察：取2.2項下各濃度基質混合對照溶液適量，按2.1 項下色譜與質譜條件進樣測定，繪制標準曲線。結果各農藥化合物的相關系數均在0.990～0.999之間，表明各待測農藥化合物在各自質量濃度范圍內的線性關系良好。詳見表3和表4。

檢測限與定量限確定：用標準曲線的最低點計算小兒麻甘顆?；|混合對照品溶液中每種農藥的2個離子對的S/N，以響應信號較小的離子對的S/N為準，以3倍信噪比（S/N）計算檢測限，以10倍S/N計算定量限。結果50種農藥的檢測限在0.02～65.22μg/kg之間，定量限在0.07～217.39μg/kg之間。詳見表3和表4。

加樣回收試驗：選取麻黃、黃芩、紫蘇子、甘草、桑白皮、苦杏仁、地骨皮藥材和小兒麻甘顆粒樣品，分別加入禁用農藥混合對照品溶液和限用農藥混合對照品溶液各100 μL，按2.1 項下色譜與質譜條件進行加樣回收試驗。結果大部分農藥化合物的回收率在50%～120%之間，回收率滿足篩查要求。詳見表5 和表6。

表5 GC-MS/MS法加樣回收試驗結果Tab.5 Results of the recovery test by the GC-MS/ MS method

表6 HPLC-MS/MS法加樣回收試驗結果Tab.6 Results of the recovery test by the HPLC-MS/ MS method

2.5 農藥殘留量測定

對8個生產廠家的小兒麻甘顆粒樣品進行測定，結果均未檢出禁用農藥，其中3個生產廠家檢出限用農藥吡蟲啉殘留（表1），檢出吡蟲啉MRM 圖見圖3。對8 個生產廠家的原料藥材麻黃、黃芩、紫蘇子、甘草、桑白皮、苦杏仁、地骨皮進行測定，結果均未檢出禁用農藥，但限用農藥品種檢出較多，包括吡蟲啉、氯氰菊酯、毒死蜱、啶蟲脒等；各生產廠家的黃芩藥材中均檢出氯氰菊酯；地骨皮藥材中檢出農藥品種較多，包括吡蟲啉、啶蟲脒等。詳見表2。

圖3 小兒麻甘顆粒制劑中檢出農藥對照品溶液與供試品溶液多反應監測圖1.吡蟲啉A-B.對照品溶液（定量離子對、定性離子對）C-D.供試品溶液（定量離子對、定性離子對）Fig.3 Multiple reaction monitoring chromatograms of reference solution and test solution of the pesticide detected from Xiao′er Magan Granules preparation1.ImidaclopridA-B.Reference solution（quantitative ion pair，qualitative ion pair）C-D.Test solution（quantitative ion pair，qualitative ion pair）

2.6 農藥殘留風險評估

以2020 年版《中國藥典（四部）》通則0212 規定的定量限為33 種禁用農藥的安全限量；根據ADI 設定17 種限用農藥的安全限量及食品安全國家標準GB2763-2019 食品中農藥最大殘留限量中規定的ADI，按成年人平均體質量60 kg 計算。臨床中藥飲片日服用量參照《中國藥典（一部）》，考慮到臨床用量通常大于相應用量，故根據《中藥臨床應用指導原則》中藥飲片最大單劑處方劑量300 g 作為最大處方量計算安全限量。由于小兒麻甘顆?？捎糜? 歲以上兒童，以1 歲兒童體質量10 kg 作為標準體質量，根據GB2763-2019 中規定計算ADI，故小兒麻甘顆粒按質量標準規定的ADI 10 g，計算安全限量。結果小兒麻甘顆粒制劑中未檢出禁用農藥，限用農藥檢出吡蟲啉，但均未超過擬訂的安全限量60 mg/ kg，檢出限用農藥品種均未超過安全限量。詳見表7。

表7 小兒麻甘顆粒制劑中檢出限用農藥安全限量Tab.7 Safety limit of prohibited pesticides detected from Xiao′er Magan Granules preparation

3 討論

3.1 凈化方法選擇

本研究中對小兒麻甘顆粒及其原料藥材的農藥殘留品種進行了篩查，在2020 年版《中國藥典（四部）》中33種禁用農藥的基礎上，增加了17種限用農藥品種。其中，三唑酮、腐霉利、毒死蜱、氰戊菊酯、氯氰菊酯采用GC-MS/MS 法測定的靈敏度較高；噻菌靈、多菌靈、甲基硫菌靈、阿維菌素、吡唑醚菌酯、吡蟲啉、啶蟲脒、氧樂果、噠螨靈、乙螨唑、縮節胺、多效唑采用HPLC-MS/MS法測定的靈敏度較高。同時，采用質譜法測定農藥殘留的基質效應會對測定產生干擾，影響定量的準確性，HPLC-MS/MS 法表現為基質減弱效應，GC-MS/MS法表現為基質增強效應，故應選擇適宜的基質前處理方法［11-12］。

曾對小兒麻甘顆粒制劑和原料藥材前處理方法［直接提取法、HLB 小柱法、分散固相萃取（dSPE）法］進行優化，并考察了回收率。1）直接提取法。取樣品（過3號篩）5 g，精密稱定，加氯化鈉1 g，立即搖散，再加入乙腈50 mL，勻漿處理2 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，沉淀，加乙腈50 mL，勻漿處理1 min，離心，取上清液，合并上清液，減壓濃縮至3～5 mL，放冷，用乙腈稀釋至10.0 mL，搖勻。2）HLB 小柱法。取樣品（過3 號篩）5 g，精密稱定，加氯化鈉1 g，立即搖散，再加入乙腈50 mL，勻漿處理2 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，沉淀再加乙腈50 mL，勻漿處理1 min，離心，取上清液，合并上清液，減壓濃縮至3～5 mL，放冷，用乙腈稀釋至10 mL，搖勻；取5 mL，過HLB 小柱，即得。3）dSPE法。取樣品（過3號篩）5 g，精密稱定，加氯化鈉1 g，立即搖散，再加入乙腈50 mL，勻漿處理2 min，離心（轉速為4 000 r/min），取上清液，沉淀再加乙腈50 mL，勻漿處理1 min，離心，取上清液，合并上清液，減壓濃縮至3～5 mL，放冷，用乙腈稀釋至10 mL，搖勻；取5 mL，置凈化管中（含150 mg硫酸鎂、50 mg PSA、50 mg C18）振搖10 min，取上清液，即得。綜合考慮回收率，最終選擇2.2項下凈化方法分別制備空白基質溶液和供試品溶液。

3.2 農藥殘留風險評估

對于檢出的限用農藥，基于食品中最大殘留限量規定的ADI 評價小兒麻甘顆粒的農藥殘留風險，結果檢出的限用農藥品種吡蟲啉均未超過擬訂安全限量，表明農藥殘留安全風險較低。但本次篩查的8 家小兒麻甘顆粒生產企業中，4 家生產企業均檢出吡蟲啉殘留的狀況，且其中廠家6 在2020 年至2022 年4 個批次制劑樣品中均檢出了蚍蟲啉殘留，表明該品種蚍蟲啉農藥殘留較普遍。農藥殘留通常來源于其藥材，廠家6對應的原料藥材地骨皮中檢出吡蟲啉，表明吡蟲啉可能會由地骨皮藥材轉移到小兒麻甘顆粒制劑中。地骨皮為茄科植物枸杞或寧夏枸杞的干燥根皮，采收期較長，通常需要3 年以上，枸杞在生長過程中較易受蚜蟲等病蟲害的侵襲，多采用殺蟲劑噴灑。吡蟲啉為常用硝基亞甲基類內吸殺蟲劑，具有較強的內吸性，會進入植物體內，并富集在根部［13-15］。為保證小兒麻甘顆粒制劑的質量，需規范其原料藥材地骨皮的種植，提倡綠色種植，減少吡蟲啉等農藥的使用。原料藥材的農藥篩查中發現，氯氰菊酯和毒死蜱2種殺蟲劑的檢出率較高，但均未轉移到小兒麻甘顆粒制劑中，氯氰菊酯和毒死蜱均無內吸性，不會蓄積在植物體內，且中藥材的清洗、制劑的提取等過程可減少農藥殘留，故使用非內吸性農藥代替內吸性農藥可能會降低轉移到制劑中的風險。