電感耦合等離子體-質(zhì)譜法測定艾司唑侖片中7 種元素雜質(zhì)含量*

胡 幸，匡鑫玉，曾令高△

（1.重慶市食品藥品檢驗檢測研究院·國家藥品監(jiān)督管理局麻醉精神藥品質(zhì)量監(jiān)測重點實驗室，重慶 401121；2.重慶大學(xué)生物工程學(xué)院，重慶 400044）

艾司唑侖片為第二類精神藥品，具有催眠鎮(zhèn)靜［1-3］、抗焦慮［4］、抗驚厥［5］等作用。國內(nèi)目前共有42家企業(yè)生產(chǎn)艾司唑侖片，有1 mg 和2 mg 2 個規(guī)格，其中4家企業(yè)（規(guī)格為1 mg）生產(chǎn)的艾司唑侖片已通過一致性評價。生產(chǎn)過程中，元素雜質(zhì)可能通過原料藥、輔料、包裝材料、注射用水、生產(chǎn)設(shè)備等多途徑引入［6-9］。若長期服用藥品，存在元素雜質(zhì)超過允許限度的風(fēng)險，故需測定制劑中的元素雜質(zhì)。目前，常用元素雜質(zhì)測定方法有原子熒光光譜（AFS）法、原子吸收（AAS）法、電感耦合等離子體發(fā)射光譜（ICP）法和電感耦合等離子體-質(zhì)譜（ICP-MS）法。其中，AFS 法測定元素的種類較局限；AAS 法每次只能測定1 個元素，多元素測定操作煩瑣；ICP 法的靈敏度不及ICP-MS 法，操作過程中會使用更大量的樣品及更高濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；ICP-MS 法靈敏度高、線性范圍寬，同時測定多種元素使用樣品更少，可達(dá)到檢測效果，是目前檢測痕量有害金屬離子的首選方法［10-12］。為保障用藥安全，本研究中建立了測定艾司唑侖片中1 類元素砷（As）、鎘（Cd）、汞（Hg）、鉛（Pb）及2A 類元素鈷（Co）、鎳（Ni）、釩（V）雜質(zhì)含量的ICP-MS法，為其質(zhì)量控制提供參考。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

NexION 2000 型ICP-MS 儀（美國PerBinElmer 公司）；Milli-Q 型超純水儀（美國Millipore 公司）；XPE205DR 型電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.01 mg）。

1.2 試藥

As標(biāo)準(zhǔn)溶液（中國計量科學(xué)研究院，批號為20041，質(zhì)量濃度為1 000 μg/ mL）；Cd 標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號為235037-4），Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號為235008-4），Pb標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號為235025-6），Co標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號為235041-2），金（Au）標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號為21B022-2），V 標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號為233061-3），Ni 標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號為234023-6），質(zhì)量濃度均為1 000μg/mL，均購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心；多元素標(biāo)準(zhǔn)溶液［含鉍（Bi）、鍺（Ge）、銦（In）、鋰（Li）、鈷（Sc）、鋱（Tb）、釔（Y）元素，美國PerBinElmer 公司，批號為CL1-46MKBY1，質(zhì)量濃度為10μg/mL］；68%硝酸溶液（UPS 級，晶瑞電子材料股份有限公司，批號為230215049）；艾司唑侖片（A 廠家，批號分別為20221018，20221112，20221115，20221116，20 221206；B廠家，批號分別為221001，221008，221012，221018，221106；C 廠家，批號分別為65230201，65230101，65221203，65221004，65 221003；D 廠家，批號分別為20220805，20220414，20220413，20221106，20220901）。

2 方法與結(jié)果

2.1 ICP-MS 工作條件

等離子體射頻功率：1 500 W；霧化氣流速：0.92 L/min；碰撞氣：氦氣；碰撞氣流速：3.8 mL/ min；蠕動泵速：25 r/min；碰撞模式：動能歧視（KED）模式；重復(fù)次數(shù)：3 次。以銦（115In）和鉍（209Bi）作為內(nèi)標(biāo)元素。

2.2 溶液制備

標(biāo)準(zhǔn)空白溶劑（稀釋劑）：取硝酸50 mL，加Au元素標(biāo)準(zhǔn)溶液200μL，用超純水稀釋至1 000 mL。

混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液：分別精密量取As，Pb，Cd，Hg，Co，V，Ni單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液各適量，用稀釋劑稀釋成每1 mL含As 75 ng、Pb 25 ng、Cd 25 ng、Hg 150 ng、Co 250 ng、V 500 ng、Ni 1 000 ng的溶液，即得。

系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液：分別精密量取上述混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.1，0.5，1.0，1.5，3.0 mL，分別置50 mL容量瓶中，用稀釋劑定容，混勻，即得。

限度濃度溶液：分別精密量取上述混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0 mL，置50 mL容量瓶中，用稀釋劑定容，混勻，即得。

混合內(nèi)標(biāo)溶液（209Bi，115In）：精密量取多元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度為10μg/mL）0.1 mL，置200 mL容量瓶中，用5%硝酸溶液稀釋成質(zhì)量濃度為5 ng/ mL 的溶液，即得。

供試品溶液：取樣品細(xì)粉50 mg，精密稱定，加硝酸5.0 mL、Au 元素標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL，置同一聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，130 ℃條件下用石墨消解儀消解1 h，趕酸0.5 h，用超純水將消解罐內(nèi)的溶液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，并用超純水定容，搖勻，即得。

空白溶液：不加樣品，按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：選擇待測元素間互不干擾，同時與內(nèi)標(biāo)元素也互不干擾的質(zhì)量數(shù)作為檢測對象，待測元素各有特定的質(zhì)量數(shù)，對測定互不干擾。標(biāo)準(zhǔn)空白溶液（稀釋劑）與限度濃度溶液的響應(yīng)值比值小于10%，即空白基質(zhì)液對檢測無明顯干擾。詳見表1。

表1 專屬性試驗結(jié)果Tab.1 Results of the specificity test

線性關(guān)系考察：取2.2 項下系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，按2.1項下ICP-MS 工作條件進(jìn)樣測定，在線加入混合內(nèi)標(biāo)溶液，以待測元素的質(zhì)量濃度（X，ng/mL）為橫坐標(biāo)、待測元素與內(nèi)標(biāo)元素響應(yīng)值的比值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表2。

表2 線性關(guān)系考察、檢測限與定量限確定結(jié)果（n=5）Tab.2 Results of the linear relation test and determination of limit of detection and limit of quantitation（n=5）

檢測限和定量限確定：精密吸取2.2項下空白溶液11 份適量，按2.1 項下ICP-MS 工作條件進(jìn)樣測定，以各元素與內(nèi)標(biāo)元素響應(yīng)值比值的標(biāo)準(zhǔn)偏差的3 倍所對應(yīng)質(zhì)量濃度為檢測限，以標(biāo)準(zhǔn)偏差的10 倍所對應(yīng)質(zhì)量濃度為定量限。結(jié)果見表2。

重復(fù)性試驗：取空白輔料0.05 g，精密稱定，按2.2項下方法平行制備溶液6份，精密加入標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0 mL，用超純水稀釋并定容，搖勻，按2.1 項下ICP-MS 工作條件進(jìn)樣測定，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算各元素的含量。結(jié)果各元素含量的RSD均小于4%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。詳見表3。

表3 精密度、重復(fù)性與加樣回收試驗結(jié)果（%）Tab.3 Results of the precision，repeatability，and recovery tests（%）

中間精密度試驗：由不同分析員在不同時間，取空白輔料6 份，按重復(fù)性試驗項下方法操作，計算各元素的含量。結(jié)果各元素含量的RSD均小于3%（n=6），表明方法中間精密度良好。詳見表3。

加樣回收試驗：分別精密量取各單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用稀釋劑稀釋成每1 mL 含As 375 ng、Pb 125 ng、Cd 125 ng、Hg 750 ng、Co 1 250 ng、V 2 500 ng、Ni 5 000 ng的加標(biāo)貯備液；取空白輔料0.05 g，精密稱定，共9 份，分別加入上述加標(biāo)貯備液0.1，0.2，0.3 mL，各3 份，按供試品溶液制備方法進(jìn)行消解，分別作為50%，100%，150%濃度水平加標(biāo)回收溶液。按2.1 項下ICP-MS 工作條件進(jìn)樣測定，計算加樣回收率。結(jié)果各元素的回收率均在85%～110%范圍內(nèi)，符合方法學(xué)驗證的要求，表明方法準(zhǔn)確度良好。詳見表3。

2.4 元素雜質(zhì)限度計算

艾司唑侖片每日最大攝入量遠(yuǎn)低于10 g，參照人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）Q3D 指南，按劑量不超過10 g/d 的最大量計算。允許濃度（μg/g）=允許日暴露量（PDE）/每日劑量。ICP-MS 法測定多數(shù)元素的線性動態(tài)范圍為0.01～100 ng/mL，故本研究中調(diào)整稀釋因子為1∶1 000，使溶液中各目標(biāo)元素均在儀器合適的線性動態(tài)范圍內(nèi)，各元素雜質(zhì)限度見表4。

表4 艾司唑侖片中元素雜質(zhì)的允許日暴露量與限度Tab.4 Permissible daily exposure and concentrations of elemental impurities in Eszopiclone Tablets

2.5 樣品含量測定

取20 批樣品，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1項下ICP-MS 工作條件進(jìn)樣測定，按內(nèi)標(biāo)校正的標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算含量。結(jié)果見表5。可見，1類元素As和Cd元素均未檢出，但企業(yè)B 和企業(yè)D 的Hg 元素檢出批次較多；2A 類元素Co，V，Ni元素均有檢出，但含量均低于控制閾值的30%，表明原輔料、純化水、生產(chǎn)設(shè)備等可能引入的元素雜質(zhì)均能被有效控制，不影響藥物的安全性。

表5 樣品中元素雜質(zhì)含量測定結(jié)果（×10-6）Tab.5 Results of the content determination of elemental impurities in samples（× 10 -6）

3 討論

3.1 內(nèi)標(biāo)元素選擇

在ICP-MS 分析中，光譜干擾（如同位素、多原子離子和雙電荷離子）和非光譜干擾（如基質(zhì)效應(yīng)、記憶效應(yīng)）是常見問題［13-14］。為校正信號干擾，通常依據(jù)內(nèi)標(biāo)元素質(zhì)量數(shù)與元素質(zhì)量數(shù)是否相似、與元素電離勢能是否匹配選擇內(nèi)標(biāo)元素［15］。本研究中選擇209Bi 作為202Hg 和208Pb 的內(nèi)標(biāo)元素，選擇115In 作為75As，111Cd，59Co，60Ni，51V 的內(nèi)標(biāo)元素。此外，結(jié)合元素豐度及響應(yīng)值、儀器合理范圍等因素，確定以質(zhì)量濃度為5 ng/mL的209Bi 和115In作為混合內(nèi)標(biāo)溶液。

3.2 用空白輔料進(jìn)行方法學(xué)驗證

由于艾司唑侖片規(guī)格為1 mg，主藥只占平均片重的1%，對測定結(jié)果幾乎無影響。且被測樣品均已通過一致性評價，樣品輔料組成一致，故選擇空白輔料進(jìn)行方法學(xué)驗證，既有代表性，又可減少艾司唑侖片的使用。

3.3 方法評價

本研究中建立的方法操作簡單、分析快速、靈敏度高、檢測結(jié)果準(zhǔn)確、樣品用量少，可用于艾司唑片中1類和2A類元素雜質(zhì)的質(zhì)量控制及風(fēng)險評估。