羊泰勒蟲與嗜吞噬細胞無漿體雙重PCR 檢測方法的建立

寧宇春，王圓赫，郭祥杰，朱宏陽，田萬年

（1.吉林農業科技學院動物科技學院，吉林 132101；2.圖們市涼水鎮畜牧獸醫站，圖們 133100）

羊泰勒蟲病（ovine and caprine theileriosis）是一種經蜱傳播的寄生于羊紅細胞內血液原蟲病[1]。本病對羔羊和外地引進羊危害較嚴重，病羊多表現為高熱、貧血、黃疸和血紅蛋白尿，嚴重時可引起死亡，從而限制了地方性養羊的發展，給我國養羊業造成較大危害[2-3]。嗜吞噬細胞無漿體（A.phagocytophilum, AP）于1932年在蘇格蘭地區首次發現，引起羊不明發熱，是一類經蜱傳播的寄生于紅細胞內細菌性病原[5]。嗜吞噬細胞無漿體是一種人畜共患傳染病，屬于自然疫源性疾病，可引起宿主動物貧血，血小板減少，消瘦等臨床癥狀[6-7]。嗜吞噬細胞無漿體可誘導機體發生炎癥和免疫反應，同時能夠介導免疫活性細胞及炎性因子對宿主細胞的攻擊，最終導致機體出現免疫抑制。

以上兩種病原都由硬蜱傳播，主要發生于媒介硬蜱活動期間，易發生混合感染，且其臨床癥狀表現相似。因此，血液涂片檢測易出現漏診或誤診的弊端，采用PCR檢測具有更高的特異性和敏感性，從而使病原體的診斷更加可靠。目前尚未見羊泰勒蟲和嗜吞噬細胞無漿體的雙重PCR檢測方法，本研究旨在通過建立更加快速、特異的雙重PCR檢測方法，為羊泰勒蟲和嗜吞噬細胞無漿體的快速診斷和流行病學調查提供了適用先進技術。

1 材料與方法

1.1 病料來源 血液樣本于2020年5月，采自吉林省圖們市散養的綿羊60份，無菌采取抗凝血，同時制作血液涂片供鏡檢，-20℃保存備用。……