實時熒光定量PCR 檢測鴨源鵝細小病毒方法的建立與應用

楊挺懿，楊 婧，黃欣梅，韓凱凱，趙冬敏，章麗嬌，劉宇卓，李 銀，張小飛，劉青濤

（1.南京農業大學動物醫學院，南京 210095； 2.江蘇省農業科學院獸醫研究所，南京 210014）

鴨源鵝細小病毒（Duck-origin goose parvovirus,D-GPV）是細小病毒科，細小病毒亞科依賴病毒屬的單鏈DNA病毒[1]，它的典型臨床癥狀是短喙，脛骨短，生長遲滯[2]，有學者指出，此病毒可能是通過影響腸道菌群從而導致發病[3]。該病首次報道是在1971年的法國西南地區，在我國最早出現在臺灣[4]，而后分別于1995年和2000年在波蘭和匈牙利暴發[5]。2014年以后我國許多地區如福建、山東、河北、河南、安徽、江西等地暴發該病，給養鴨業造成了巨大經濟損失[6]。

自D-GPV暴發以來，許多學者紛紛建立各種檢測方法，王劭等[7]建立了PCR-RFLP技術，有效杜絕了假陽性，但是檢測敏感性較低；劉銘[8]通過重組VP2建立了D-GPV ELISA檢測方法；Liu等[9]將重組酶聚合酶擴增（recombinase polymerase amplification,RPA）技術與垂直流（vertical flow, VF）可視化試紙相結合，該方法特異性好和敏感性高，但是由于還沒有用于RPA檢測的引物設計軟件，因此方法的普及受到限制。實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR, qPCR）技術，通過在PCR反應體系中加入熒光染料，實時監測整個過程中熒光信號的累計強度，從而達到對反應產物進行定量的目的，省去了普通PCR需要借助核酸電泳進行分析的步驟，結果一目了然，減少了檢測時間，大大增加了檢測效率，具有快速、簡便、特異性好、敏感性高、穩定性好等特點，自問世以來就受到廣泛的青睞[10]。

1 材料和方法

1.1 病毒和實驗動物 鴨源鵝細小病毒（Duckorigin goose parvovirus, D-GPV）、番鴨細小病毒（Muscovy duck parvovirus, MDPV）、鴨瘟病毒（Duck plague virus, DPV）、鴨圓環病毒……