急性心肌梗死患者外周血內(nèi)皮細(xì)胞微粒miR-126和線(xiàn)粒體成分及黏附分子表達(dá)水平及其臨床意義研究

馬藝萍，袁玉娟，尼格熱·阿力木，阿卜拉江·艾合麥提，馬清玉，帕麗達(dá)·玉山江，穆葉賽·尼加提*

1.830000 新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市，新疆醫(yī)科大學(xué)研究生院

2.830000 新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市，新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院心血管內(nèi)科

3.830000 新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市，新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院急救中心

急性心肌梗死（AMI）已導(dǎo)致全球超過(guò)300萬(wàn)人死亡［1］。AMI是缺血性心臟病最常見(jiàn)的急診形式，由易損動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂或疊加血栓形成引發(fā)，導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈閉塞和低灌注區(qū)細(xì)胞死亡［2］。其起病急、病情重，個(gè)體患者病情的發(fā)生難以預(yù)測(cè)。因此，AMI的早期診斷是重要的。

微粒（MPs）是直徑100～1 000 nm的囊泡［3］，包括內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)源的微粒（EMPs）、單核細(xì)胞來(lái)源的微粒和血小板來(lái)源的微粒等，其攜帶各種生物活性分子（miRNA等），在細(xì)胞通訊中發(fā)揮關(guān)鍵作用［4］。內(nèi)皮功能障礙在免疫炎癥反應(yīng)激活和組織損傷中尤為關(guān)鍵，此過(guò)程中內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)的miR-126，是內(nèi)皮細(xì)胞中豐富的miRNA之一，具有抗炎、抗心肌細(xì)胞凋亡的作用。本團(tuán)隊(duì)前期研究發(fā)現(xiàn)，AMI患者冠狀動(dòng)脈血中MPs相關(guān)miR-126水平的降低可能與急性冠狀動(dòng)脈血栓形成事件有關(guān)［5］。此外，miRNA還通過(guò)靶向活性氧（ROS）通路和抗氧化效應(yīng)物來(lái)調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激。結(jié)合國(guó)內(nèi)外研究，MPs及內(nèi)含miRNA成分通過(guò)線(xiàn)粒體ROS依賴(lài)性途徑促進(jìn)黏附分子表達(dá)，單核細(xì)胞黏附、募集和遷移至受損部位加重組織損傷［6］。然而，EMPs和miRNA作為中間通信介質(zhì)對(duì)AMI后心肌損傷影響的作用尚待明確。因此，本研究進(jìn)一步闡明EMPs及其內(nèi)含miR-126在黏附分子表達(dá)中的作用，為探索AMI后助于心肌修復(fù)的微環(huán)境提供新的思路。

本研究在冠狀動(dòng)脈造影前收集AMI患者、穩(wěn)定性冠心?。⊿CAD）患者和健康人外周血，通過(guò)透射電鏡檢測(cè)MPs，納米顆粒追蹤分析MPs，使用CD31+CD42b-標(biāo)記EMPs，進(jìn)行EMPs定性定量分析，檢測(cè)EMPs中miR-126表達(dá)含量及EMPs內(nèi)含ROS水平變化，測(cè)定EMPs表面血管細(xì)胞黏附分子1（VCAM-1）、細(xì)胞間黏附分子1（ICAM-1）、P-選擇素和E-選擇素表達(dá)情況，分析EMPs內(nèi)含miR-126、線(xiàn)粒體成分、黏附分子水平及臨床意義，探討AMI后EMPs及其miR-126通過(guò)ROS依賴(lài)性途徑在調(diào)控黏附分子表達(dá)中的作用，為有效延長(zhǎng)AMI治療時(shí)間窗和減少并發(fā)癥提供科學(xué)依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象與分組

納入2021年9月—2022年9月于新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院就診的AMI患者50例（AMI組），SCAD患者50例（SCAD組），健康者50例（Control組）。AMI患者和SCAD患者均在本院住院并接受冠狀動(dòng)脈介入治療（PCI），健康者為體檢健康者。所有納入者基線(xiàn)資料完整，采集一般資料和生化指標(biāo)。本研究已獲得新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審批（批件號(hào)：KY2020041046），患者均被告知并簽署知情同意書(shū)。

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）AMI為測(cè)量升高或降低的心臟生物標(biāo)志物（首選肌鈣蛋白），至少有1項(xiàng)超過(guò)參考上限值第99%百分位值以及至少包含以下1種情況：①心肌缺血體征；②新出現(xiàn)的或推測(cè)的明顯的ST段改變或新出現(xiàn)的左束支傳導(dǎo)阻滯；③心電圖出現(xiàn)病理性Q波；④新出現(xiàn)的存活心肌丟失或新出現(xiàn)的局部室壁運(yùn)動(dòng)異常的影像證據(jù)；⑤血管造影或解剖發(fā)現(xiàn)冠狀動(dòng)脈內(nèi)血栓。所有患者經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)冠狀動(dòng)脈病變（具體參考：《急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南（2019）》［7］，歐洲心臟病學(xué)會(huì)非ST段抬高型急性冠狀動(dòng)脈綜合征管理指南［8］）。

（2）SCAD為在冠狀動(dòng)脈固定性嚴(yán)重狹窄的基礎(chǔ)上，由于心肌負(fù)荷的增加引起的短暫缺血缺氧臨床綜合征。選取冠狀動(dòng)脈造影術(shù)中診斷冠心病，同時(shí)需要行支架植入術(shù)的患者（具體參考《穩(wěn)定性冠心病診斷與治療指南》［9］）。

（3）體檢胸部X線(xiàn)片、心電圖、肝腎功能、生化指標(biāo)正常，無(wú)其他疾病史，視為健康者。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）嚴(yán)重肝腎功能不全；（2）腫瘤性疾??；（3）造血系統(tǒng)疾?。唬?）類(lèi)風(fēng)濕、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和舍格倫綜合征；（5）腦梗死和肺栓塞。

1.1.3 標(biāo)本采集：靜息狀態(tài)下采集Control組外周血，AMI組和SCAD組患者均在冠狀動(dòng)脈造影前靜息狀態(tài)下進(jìn)行外周血采集，均為5～10 mL。AMI患者在胸痛發(fā)作24 h內(nèi)，用枸櫞酸鈉抗凝管收集（美國(guó)BD公司），但在操作過(guò)程中需要注意：用枸櫞酸鈉抗凝管收集的標(biāo)本，通過(guò)3 000×g離心10 min，取血漿3等份分到小試管中-80 ℃保存，以便后期用于EMPs鑒定和miR-126定量分析，線(xiàn)粒體成分、黏附分子水平測(cè)定。

1.2 主要儀器與試劑

主要儀器：顯微鏡（NIKON，H550S）、酶標(biāo)儀（Thermo fisher，Multiskan 51119000）、組織攤片機(jī)（浙江科迪儀器設(shè)備，KD-P）及電熱恒溫培養(yǎng)箱（常州智博瑞，SHZ-82）等。試劑：無(wú)水乙醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑，100092683）、二甲苯（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑，1330-20-7）、蘇木素（珠海貝索，BA4097）、伊紅染液（珠海貝索，BA4099）等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 MPs的透射電子顯微鏡（TEM）檢測(cè)：血漿樣本1 550×g常溫離心15 min，將血漿上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中。18 800×g離心30 min，將上清液去除，加入磷酸鹽緩沖液（PBS）重懸沉淀，18 800×g離心30 min，沉淀即為MPs，用戊二醛固定后備用。取5～10 μL MPs溶液加到Formvar-carbon載樣銅網(wǎng)上；取100 μL PBS加到封口膜上，用鑷子將銅網(wǎng)（Formvar膜面朝下）放在PBS液滴上清洗。將銅網(wǎng)放在50 μL 1%戊二醛液滴上5 min；將銅網(wǎng)放在100 μL ddH2O 洗2 min（洗8次）；將銅網(wǎng)放在50 μL草酸雙氧鈾液滴上（pH 7.0）5 min；將銅網(wǎng)放在50 μL甲基纖維素液滴上10 min，冰上操作；銅網(wǎng)放到樣品臺(tái)頂端的不銹鋼環(huán)上，在濾紙上吸去多余液體?？諝飧稍?～10 min；將銅網(wǎng)放在樣品盒里，TECNAI 10透射電子顯微鏡下拍攝電鏡照片。

1.3.2 MPs的納米顆粒追蹤（NTA）分析：MPs使用1 mL PBS重懸。取50 μL MPs樣本加入100 μL PBS稀釋后加入nanosight粒徑分析檢測(cè)臺(tái)，檢測(cè)MPs粒徑大小。

1.3.3 EMPs的流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)：將血漿樣本從-80 ℃冰箱中取出，室溫靜置10 min使其溶化，待血漿溶化成液體后，上下輕輕顛倒混勻，取400 μL血漿樣本轉(zhuǎn)移至新的EP管中，1 550×g常溫離心15 min。將上清液轉(zhuǎn)移至新的EP管中，18 800×g離心30 min，去除上清液，加入500 μL PBS緩沖液重懸沉淀，18 800×g，常溫離心30 min，沉淀為分離的MPs。MPs沉淀加入400 μL PBS-1% BSA溶液重懸，分離100 μL的樣本至新的EP管中，分別加入FITC-CD31和PE-CD42b抗體，按照1∶100的比例加入?？贵w輕輕混勻后室溫避光孵育1 h?？贵w避光孵育后，將樣本置于離心機(jī)中，18 800×g常溫離心30 min，沉淀中加入400 μL PBS緩沖液混勻，立刻用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，使用前向散射光（FSC）和側(cè)向散射光（SSC）觀(guān)察MPs的大小及復(fù)雜性分布，圈取MPs的散點(diǎn)簇，再使用FL1（CD31）和FL2（CD42b）進(jìn)行分析，分析占全部MPs細(xì)胞的比例。

1.3.4 EMPs內(nèi)含miR-126的PCR檢測(cè)：取200 μL血漿樣本1 550×g常溫離心15 min，將血漿上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，18 800×g離心30 min，將上清液去除，加入PBS重懸沉淀，18 800×g，離心30 min，沉淀即為MPs，加入0.5 mL RNAiso plus，充分裂解后轉(zhuǎn)移至EP管中。加入氯仿100 μL，用力振搖15 s，室溫靜置15 min，離心（4 ℃，12 000×g，15 min）。加入50 μL DEPC水溶解，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度，-80 ℃冰箱保存。

逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)步驟按照miRcute增強(qiáng)型miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒，具體逆轉(zhuǎn)錄體系如下：試劑（Total RNA，1 μg；2×miRNA RT Reaction Buffer，5 μL；miRNA RT Enzyme Mix，1 μL；DEPC水，補(bǔ)至10 μL），注：按照以上方法混合后，置于PCR儀中進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，條件為42 ℃ 60 min，95 ℃ 3 min。熒光定量PCR（cDNA，2 μL；PCR上游引物，0.4 μL；PCR下游引物，0.4 μL；SYBR Green solution，10 μL；滅菌雙蒸水，7.2 μL；總量，20 μL）。反應(yīng)條件：預(yù)變性95.0 ℃、2 min；變性95.0 ℃、3 s，退火60.0 ℃、30 s，40個(gè)循環(huán)；溶解曲線(xiàn)：95.0 ℃、15 s，60.0 ℃、1 min，95.0 ℃、15 s。

1.3.5 EMPs線(xiàn)粒體ROS的ELISA檢測(cè)：將血漿樣本從-80 ℃冰箱中取出，室溫靜置10 min使其溶化，待血漿溶化成液體后，上下輕輕顛倒混勻，取200 μL血漿樣本轉(zhuǎn)移至新的EP管中，1 550×g常溫離心15 min。將上清轉(zhuǎn)移至新的EP管中，18 800×g離心30 min，去除上清，加入500 μL PBS重懸沉淀，18 800×g，常溫離心30 min，沉淀為分離的MPs。將96孔板中置于熒光酶標(biāo)儀中，設(shè)置激發(fā)光波長(zhǎng)為396 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為610 nm時(shí)檢測(cè)每個(gè)樣本的熒光OD值。

1.3.6 EMPs內(nèi)含黏附分子的ELISA檢測(cè)：將血漿樣本從-80 ℃冰箱中取出，室溫靜置10 min使其溶化，待血漿溶化成液體后，上下輕輕顛倒混勻，取400 μL血漿樣本轉(zhuǎn)移至新的EP管中，1 550×g常溫離心15 min。將包被好的96孔板取出，加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，貼上封口膜。置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育。培養(yǎng)2 h后，去除溶液。每孔加入100 μL生物素標(biāo)記的抗體，貼上封口膜。置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育。每孔加入90 μL TMB反應(yīng)底物，貼上封口膜。置于37 ℃培養(yǎng)箱中避光孵育。每孔加入50 μL終止緩沖液，輕輕混勻。在酶標(biāo)儀上450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用（±s）表示，兩組間比較采用成組t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用M（P25，P75）表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用單因素和多因素Logistic回歸分析探討AMI發(fā)生的影響因素。繪制miR-126、ROS、P-選擇素預(yù)測(cè)AMI的受試者工作特征（ROC）曲線(xiàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般資料和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較

三組吸煙史、高血壓史、糖尿病史、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、葡萄糖（GLU）、肌酐（Cr）及阿司匹林、氯吡格雷、β受體阻滯劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）/血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）、他汀類(lèi)用藥史比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；三組年齡、性別、BMI、飲酒史、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、C反應(yīng)蛋白（CRP）、纖維蛋白原（FIB）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、尿素氮（BUN）比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

2.2 三組MPs透射電鏡下表現(xiàn)

通過(guò)透射電鏡觀(guān)察到，分離的MPs膜結(jié)構(gòu)完整，輪廓清晰，圓盤(pán)狀結(jié)構(gòu)呈形態(tài)均一的類(lèi)球形，直徑大小不一，為100～400 nm，見(jiàn)圖1。

圖1 MPs透射電鏡檢測(cè)Figure 1 TEM detection of MPs

2.3 三組MPs的NTA水平比較

由NTA檢測(cè)結(jié)果可知，Control組MPs粒徑幾乎在600 nm以?xún)?nèi)，而AMI組和SCAD組在600～800 nm處仍有少量MPs存在，見(jiàn)圖2。

圖2 MPs NTA檢測(cè)Figure 2 NTA detection of MPs

2.4 EMPs的流式檢測(cè)情況

從圖3中可以看出，血漿中分離的MPs表面TSG101、HSP70蛋白陽(yáng)性，說(shuō)明分離的樣本為MPs。流式檢測(cè)結(jié)果顯示，三組CD31+/CD42b-MPs、CD31+/CD42b+MPs、CD31-/CD42b-MPs水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中，AMI組CD31+/CD42b-MPs水平高于Control組、SCAD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），見(jiàn)圖4和表2。

圖3 EMPs流式鑒定圖Figure 3 Flow identification of EMPs

圖4 EMPs流式圖Figure 4 Flow of EMPs

表2 三組EMPs流式細(xì)胞學(xué)比較（±s）Table 2 Comparison of flow cytometry of the three groups of EMPs

表2 三組EMPs流式細(xì)胞學(xué)比較（±s）Table 2 Comparison of flow cytometry of the three groups of EMPs

注：MPs=微粒。

組別例數(shù)CD31+/CD42b-CD31+/CD31-/CD42b-MPs Control組501.87±0.723.37±1.7593.36±1.57 SCAD組501.63±0.623.25±1.6094.02±1.38 AMI組509.06±2.644.09±1.4084.88±3.50 F值341.104.16234.40 P值＜0.0010.018＜0.001 MPs CD42b+MPs

2.5 三組EMPs內(nèi)含miR-126水平比較

Control組血漿EMPs中miR-126表達(dá)水平為0.97（0.67，1.53），SCAD組血漿EMPs中miR-126表達(dá)水平為1.22（0.63，2.12），AMI組血漿EMPs中miR-126表達(dá)水平為0.45（0.32，0.73），三組血漿EMPs中miR-126表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=40.459，P＜0.001）；其中，AMI組血漿EMPs中miR-126表達(dá)水平低于Control組、SCAD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。

2.6 三組EMPs線(xiàn)粒體ROS水平比較

Control組血漿EMPs中ROS表達(dá)水平為（180 627.41±98 230.28），SCAD組血漿EMPs中ROS表達(dá)水平為（454 913.43±159 697.70），AMI組血漿EMPs中ROS表達(dá)水平為（782 150.95±309 841.66），三組血漿EMPs中ROS表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=94.296，P＜0.001）；其中，SCAD組血漿EMPs中ROS表達(dá)水平高于Control組，AMI組血漿EMPs中ROS表達(dá)水平高于Control組、SCAD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。

2.7 三組EMPs內(nèi)含黏附分子水平比較

三組血漿EMPs中VCAM-1、ICAM-1、E-選擇素、P-選擇素表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中，SCAD組和AMI組VCAM-1、ICAM-1、E-選擇素、P-選擇素表達(dá)水平均高于Control組，AMI組ICAM-1表達(dá)水平高于SCAD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 三組EMPs中黏附分子比較Table 3 Comparison of adhesion molecules in EMPs among the three groups

2.8 Logistic回歸分析

以是否發(fā)生AMI為因變量（賦值：是=1，否=0），以miR-126、ROS、VCAM-1、ICAM-1、E-選擇素和P-選擇素以及臨床認(rèn)為對(duì)AMI的發(fā)生、發(fā)展具有影響作用的自變量如吸煙、年齡、性別（賦值：男=1，女=0）、BMI、TC、TG、糖尿?。ㄙx值：是=1，否=0）和高血壓（賦值：是=1，否=0）分別為自變量進(jìn)行單因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示miR-126、ROS、ICAM-1和P-選擇素具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，miR-126是AMI發(fā)生的保護(hù)因素，ROS、P-選擇素是AMI發(fā)生的危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 AMI影響因素的單因素和多因素Logistic回歸分析Table 4 Univariate and multivariate Logistic regression analysis of influencing factors for AMI

2.9 miR-126、ROS、P-選擇素對(duì)AMI的診斷價(jià)值

ROC曲線(xiàn)顯示，miR-126診斷AMI的ROC曲線(xiàn)下面積（AUC）為0.816，ROS診斷AMI的AUC為0.892，P-選擇素診斷AMI的AUC為0.728，miR-126、ROS、P-選擇素聯(lián)合診斷AMI的AUC為0.950，見(jiàn)圖5。

圖5 miR-126、ROS、P-選擇素單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)AMI患者的ROC曲線(xiàn)Figure 5 ROC curve of miR-126，ROS，and P-selectin single and combined to predict AMI patients

3 討論

AMI是一種嚴(yán)重的心血管疾病（CVD），也是全球發(fā)病和死亡的主要原因。脂肪酸和膽固醇的積累參與了動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程，隨后的炎癥和免疫系統(tǒng)受累驅(qū)動(dòng)晚期纖維斑塊的發(fā)展，累積病灶的潰瘍或破裂和急性血栓形成導(dǎo)致AMI的發(fā)生［10］。盡管AMI發(fā)病率很高，但其早期診斷仍是一個(gè)重大的臨床挑戰(zhàn)。

本研究通過(guò)對(duì)AMI患者外周血中EMPs的成分分析，揭示了AMI急性事件的潛在發(fā)病機(jī)制，為認(rèn)識(shí)該病提供了新的方向。考慮AMI患者與SCAD患者的臨床差異，主要與急性和穩(wěn)定狀態(tài)的病理生理學(xué)有關(guān)，選擇SCAD患者和健康者分別作為對(duì)照。本團(tuán)隊(duì)既往研究發(fā)現(xiàn)，MPs在CVD的發(fā)生和發(fā)展中起著極其重要的作用［11］。因此，在這項(xiàng)研究中，分析AMI患者外周血中EMPs內(nèi)含miR-126、線(xiàn)粒體成分、黏附分子水平及臨床意義，探討AMI后EMPs及其miR-126通過(guò)ROS依賴(lài)性途徑在調(diào)控黏附分子表達(dá)中的作用，為有效延長(zhǎng)AMI治療時(shí)間窗和減少并發(fā)癥提供科學(xué)依據(jù)。

本研究首先對(duì)AMI患者、SCAD患者、健康者外周血中的MPs進(jìn)行了檢測(cè)，通過(guò)透射電鏡可以觀(guān)察到，分離的MPs膜結(jié)構(gòu)完整，直徑大小不一，為100～400 nm。因此，證實(shí)了在AMI患者外周血中MPs的存在。MPs膜結(jié)構(gòu)完整，才能將各種物質(zhì)（包括核酸）輸送到影響細(xì)胞表型的局部和遠(yuǎn)處細(xì)胞。MPs是由各種活化和凋亡細(xì)胞產(chǎn)生釋放的，包括EMPs等，由于MPs上的表面標(biāo)志物反映其親本細(xì)胞來(lái)源，因此這些蛋白質(zhì)可用于選擇性分離和鑒定細(xì)胞類(lèi)型特異性MPs。在本研究中，血漿中分離的MPs表面TSG101、HSP70蛋白陽(yáng)性，說(shuō)明分離的樣本為MPs。EMPs是由于活化（CD62e）或細(xì)胞凋亡（CD31/CD42b）而從內(nèi)皮脫落的小膜囊泡。用CD31+/CD42b-標(biāo)記EMPs，發(fā)現(xiàn)AMI患者血漿中CD31+/CD42b-標(biāo)記的EMPs水平與SCAD患者和健康者血漿中CD31+/CD42b-標(biāo)記的EMPs水平相比顯著升高。研究表明，miRNA在多種疾病的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用［12-13］，與CVD相關(guān)的miRNA水平的變化引起了人們的關(guān)注，因?yàn)槠渚哂兄匾脑\斷價(jià)值。本研究發(fā)現(xiàn)，AMI患者外周血中獲得的EMPs中的miR-126水平顯著低于SCAD患者及健康者；然而，導(dǎo)致這種現(xiàn)象的具體分子機(jī)制仍然未知，需要探索。

急性心肌缺血期間的線(xiàn)粒體功能障礙是AMI后細(xì)胞死亡的關(guān)鍵決定因素，因?yàn)榫€(xiàn)粒體在產(chǎn)生維持正常心臟收縮功能所需的ATP方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用［14］。本研究發(fā)現(xiàn)，AMI患者外周血中EMPs內(nèi)含ROS水平顯著高于SCAD患者及健康者。筆者推測(cè)，AMI后EMPs通過(guò)遞送miR-126，激活線(xiàn)粒體誘導(dǎo)ROS水平增高，從而介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞早衰。有趣的是，AMI患者冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞釋放更多與炎癥相關(guān)的MPs，其表面表達(dá)豐富的VCAM-1。研究發(fā)現(xiàn)，VCAM-1是miR-126的直接靶點(diǎn)基因［15］，miR-126通過(guò)與VCAM-1的3'非翻譯區(qū)相結(jié)合［16］，抑制VCAM-1蛋白質(zhì)和mRNA表達(dá)水平，減少單核細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞的黏附和募集［17］，從而發(fā)揮抗炎修復(fù)作用。本研究發(fā)現(xiàn)，與健康者比較，AMI患者血漿EMPs中VCAM-1、ICAM-1、E-選擇素及P-選擇素表達(dá)上調(diào)。JASIEWICZ等［18］研究表明，急性冠脈綜合征的循環(huán)衰竭直接影響肝血流量，導(dǎo)致肝細(xì)胞功能障礙以及AST升高。眾所周知，吸煙、年齡、性別、BMI、TC、TG、糖尿病和高血壓在對(duì)AMI疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。本研究多因素Logistic回歸分析結(jié)果表明，miR-126是AMI的保護(hù)因素，ROS、P-選擇素是AMI的危險(xiǎn)因素。同時(shí)，本研究通過(guò)ROC曲線(xiàn)分析，EMPs中miR-126、ROS、P-選擇素以及三者聯(lián)合指標(biāo)均對(duì)AMI有診斷價(jià)值，并且三者聯(lián)合指標(biāo)診斷價(jià)值最高，這表明其可能為AMI患者的潛在診斷指標(biāo)。

然而，本研究還存在一定的局限性。由于本研究的血樣為外周血，并無(wú)重復(fù)監(jiān)測(cè)EMPs相關(guān)miR-126、ROS、P-選擇素的水平。而且，本研究樣本量較小，計(jì)劃在未來(lái)擴(kuò)大樣本量，以確保結(jié)果的穩(wěn)健性。本研究團(tuán)隊(duì)還旨在收集隨訪(fǎng)數(shù)據(jù)，以研究EMPs相關(guān)miR-126、ROS、P-選擇素水平與AMI患者預(yù)后之間的關(guān)系。此外，還需要研究將冠狀動(dòng)脈血中EMPs中miR-126、ROS、P-選擇素水平與AMI急性血栓事件的發(fā)生聯(lián)系起來(lái)的分子機(jī)制。

作者貢獻(xiàn)：馬藝萍負(fù)責(zé)論文起草、最終版本修訂；袁玉娟、尼格熱·阿力木、帕麗達(dá)·玉山江負(fù)責(zé)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析、繪制圖表等；阿卜拉江·艾合麥提、馬清玉負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)研究；穆葉賽·尼加提提出研究思路、設(shè)計(jì)研究方案。

本文無(wú)利益沖突。