不同產(chǎn)地桑樹桑黃的總黃酮量和部分金屬元素含量的比較

李婉茹 何峰

摘要：本試驗(yàn)采用分光光度法測(cè)定了云南麻栗坡、山東夏津、西藏波密、吉林長(zhǎng)白山、云南麗江5個(gè)產(chǎn)地的野生桑樹桑黃和西藏波密人工養(yǎng)殖的桑樹桑黃的總黃酮量，經(jīng)測(cè)定結(jié)果表明，野生桑樹桑黃的總黃酮量含量較高，其中西藏波密的野生桑樹桑黃的總黃酮量含量最高，并采用電子耦合等離子體發(fā)射光譜法測(cè)定了這六個(gè)樣品的部分金屬元素含量，結(jié)果得到西藏波密野生桑黃的K和Zn含量較高。

關(guān)鍵詞：桑樹桑黃；總黃酮；金屬元素含量

桑黃俗稱桑黃菇、桑臣和桑耳，野生桑樹桑黃的藥用價(jià)值極高，具有抗發(fā)炎、止血、治婦女病的功效，在我國(guó)已證實(shí)的產(chǎn)地有西藏、四川、云南、山東、河南、吉林等地，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究中，桑黃在治療癌癥領(lǐng)域的真菌中排名第一[1]，桑黃中提取的黃酮具有抗腫瘤的功效[2]，桑黃營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富[3]，具有保健的功效，被制成茶包[4]等產(chǎn)品，學(xué)者們關(guān)于桑樹桑黃的分類屬性爭(zhēng)論不休，在近十年來對(duì)桑黃這類真菌的分類屬性達(dá)成共識(shí)，認(rèn)為它們是擔(dān)子菌門（Basidiomycota）蘑菇綱（Agaricomycetes）銹革菌目（Hymenochaetales）銹革菌科（Hymenochaetaceae）的大型多孔菌[5]。

近年來，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)中藥的藥效與所含微量元素及其含量比值有關(guān)。這些微量元素是有著重要的生理功能、營(yíng)養(yǎng)作用和臨床診斷意義比如Zn能參與多種酶的合成與激活，并直接參與生長(zhǎng)發(fā)育、內(nèi)分泌、免疫遺傳功能，還可以參與防衰老抗癌腫[6]。現(xiàn)已經(jīng)由實(shí)驗(yàn)證實(shí)，黃酮與金屬元素所形成的配合物的OH-1自由基清除能力要強(qiáng)于黃酮，同時(shí)也表現(xiàn)出黃酮與金屬元素之間的抗活性氧的協(xié)同作用，OH-1自由基清除能力順序?yàn)椋憾r(jià)鋅配合物＞三價(jià)鐵配合物[7]，現(xiàn)有研究中對(duì)桑黃金屬元素含量和黃酮含量的比較分析較少。為研究各產(chǎn)地的桑樹桑黃是否由于地域差異存在差異，本研究比較了云南麻栗坡、山東夏津、西藏波密、吉林長(zhǎng)白山、云南麗江5個(gè)產(chǎn)地的野生桑樹桑黃的總黃酮量和部位金屬元素含量，同時(shí)，桑黃作為一類珍貴的食藥用菌，具有良好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、藥用價(jià)值及保健功效，在抗菌消炎、抑制腫瘤、降血糖等方面均有重要作用[8]，為探討種植桑黃是否與野生桑黃存在差異，選取了西藏波密養(yǎng)殖桑樹桑黃進(jìn)行比較分析，為更地開發(fā)和利用該資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

1.1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為2023年7～11月從各地采購(gòu)，經(jīng)送樣檢測(cè)后，利用PCR法進(jìn)行測(cè)定，1—6號(hào)樣品經(jīng)瓊脂糖跑膠鑒定均檢出650 bp大小片段，根據(jù)桑樹桑黃的引物對(duì)比較后，確定送檢樣品均為桑樹桑黃。

1.1.2 試驗(yàn)試劑

蘆丁標(biāo)樣（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司），試驗(yàn)所需硝酸鋁、醋酸鉀、硝酸、高氯酸等均為優(yōu)級(jí)純。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 桑黃中總黃酮的提取

桑黃總黃酮量的測(cè)定采用分光光度法[9]，將材料經(jīng)過粉碎后，過14目篩，混勻，稱取1.000 g粉碎后的樣品置于燒杯中，加入95%的乙醇約30 mL，65℃水浴加熱45 min攪拌萃取黃酮，冷卻后迅速過濾上清液，殘?jiān)?5%乙醇洗至無色，再用95%乙醇稀釋至50 mL定容，搖勻后取5～10 mL樣品置于50 mL容量瓶中使用95%乙醇定容，搖勻。

1.2.2 桑黃中總黃酮含量的測(cè)定

（1）配置濃度為100 g·L－1的硝酸鋁溶液：稱取17.60 g Al（NO3）3·9H2O，加水溶解后定容至

100 mL。

（2）配置濃度為9.8 g·L－1的硝酸鋁溶液：稱取醋酸鉀9.814 g，加水溶解后定容至100 mL。

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確稱取干燥后的蘆丁

50 mg，加無水乙醇定容至50 mL的容量瓶中，取蘆丁標(biāo)樣0、1、2、3、5、7、10 mL分別置于50 mL容量瓶中；再用吸量管依次加入配置好的硝酸鋁溶液1 mL，配置好的醋酸鉀溶液1 mL，15 mL 95%乙醇，加水定容后搖勻靜置1 h后待測(cè)，使用分光光度計(jì)，調(diào)至波長(zhǎng)為415 nm處，依次測(cè)定吸光度，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（4）待測(cè)樣品測(cè)定：移取1.2.1中的1.0 mL，置于50 mL容量瓶中，再依次加入1 mL硝酸鋁溶液、1 mL醋酸鉀溶液和15 mL 95%乙醇，加水定容。使用分光光度計(jì)在415 nm處測(cè)量得到待測(cè)樣品的吸光值。

（5）根據(jù)式①計(jì)算總黃酮量。

式中：

X——總黃酮含量，%；

m——由吸光度值計(jì)算出的蘆丁的質(zhì)量，mg；

W——樣品的質(zhì)量，g；

d——稀釋比例。

1.2.3 桑黃金屬含量的測(cè)定

金屬元素含量的測(cè)定采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法。

（1）樣品處理：使用濕法消解，使用萬分位天平準(zhǔn)確稱取0.2～1 g樣品于150 mL高型燒杯中，加入9.0 mL 5%硝酸和1 mL高氯酸，置于電熱板上，控制電熱板溫度為130～150℃，待大量棕色煙消失后，加熱至180℃后繼續(xù)消解，當(dāng)消解液變?yōu)楹谏蠹尤肷倭康?%硝酸，直至冒白煙，消解液呈透明，冷卻后移入25 mL容量瓶中，多次洗滌合并入容量瓶中，定容，用相同的方法做空白樣。

（2）樣品測(cè)定：根據(jù)儀器操作說明，配置待測(cè)元素標(biāo)液后，上機(jī)測(cè)定各待測(cè)的光譜強(qiáng)度，再由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)金屬元素的含量。

（3）根據(jù)②式計(jì)算各元素的含量。

式中：

X——待測(cè)元素含量，mg/kg；

ρ——待測(cè)元素濃度，μg/mL；

ρ0——待測(cè)元素空白濃度，μg/mL；

V——待測(cè)樣體積， mL；

N——試樣稀釋倍數(shù)；

m——試樣質(zhì)量，g。

1.3 主要儀器和設(shè)備

紫外可見分光光度計(jì)（TU-1810），電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀（ICAP7000），分析天平

（ME204E）。

2 結(jié)果分析

2.1 不同產(chǎn)地桑黃的總黃酮量比較

由表1可知，西藏波密產(chǎn)的野生桑黃（編號(hào)4）總黃酮含量最高，達(dá)到918.2 mg/100 g，是這6種產(chǎn)地中黃酮含量最高的。山東夏津產(chǎn)的野生桑黃（編號(hào)5）總黃酮含量為896.5 mg/100 g，居于第二位。吉林長(zhǎng)白山產(chǎn)的野生桑黃（編號(hào)3）總黃酮含量也很高，達(dá)到371.8 mg/100 g，居于第三位。云南麗江產(chǎn)的野生桑黃（編號(hào)6）總黃酮含量為159.1 mg/100 g，居于較低水平。云南麻栗坡（編號(hào)2）和西藏波密產(chǎn)的人工養(yǎng)殖桑黃（編號(hào)1）總黃酮含量較低，分別為37.07 mg/100 g和

60.87 mg/100 g。可以認(rèn)為野生桑黃的總黃酮含量普遍高于人工養(yǎng)殖的桑黃，而且不同產(chǎn)地的野生桑黃總黃酮含量也存在差異。

2.2 不同產(chǎn)地桑黃的Mg、K、Ga、Fe、Zn含量比較

取樣0.2～0.4 g，樣品編號(hào)同表1，濕法消解后定容，經(jīng)測(cè)定得到不同金屬含量。各個(gè)樣品的Mg含量數(shù)據(jù)見圖1。樣品1和樣品6分別是西藏波密人工養(yǎng)殖桑黃和云南麗江野生桑黃，這兩個(gè)樣品的Mg含量較高，吉林長(zhǎng)白山（樣品3）的Mg含量最低。

各個(gè)樣品的K含量數(shù)據(jù)見圖2。西藏波密野生桑黃（樣品4）的K含量較高，其他樣品的K含量都較低。

各個(gè)樣品的Ca含量數(shù)據(jù)見圖3。云南麻栗坡野生桑黃（樣品2）的Ca含量較高。

各個(gè)樣品的Fe含量數(shù)據(jù)見圖4。云南麻栗坡野生桑黃（樣品2）的Fe含量較低，其余桑黃的Fe含量差距不大。

各個(gè)樣品的Zn含量數(shù)據(jù)見圖5。西藏波密野生桑黃（樣品4）的Zn含量較高。

3 討論

在6個(gè)樣品的比價(jià)中，種植桑黃與野生桑黃相比，總黃酮含量較低，其余各產(chǎn)地的野生桑黃中，產(chǎn)地為西藏波密的野生桑黃總黃酮量最高。在幾種金屬元素的比價(jià)分析中，西藏波密的野生桑黃的含Zn、K量較高，云南麗江的野生桑黃含Mg量較高，云南麗江和云南麻栗坡野生桑黃的Ca含量較高，不同產(chǎn)地桑黃因地域差異總黃酮量和金屬元素含量具有一定的差異。考慮到現(xiàn)有研究中認(rèn)為形成黃酮與金屬元素形成的配位作用的抗氧化性更強(qiáng)，西藏野生桑黃的藥用價(jià)值相較而言更高，而針對(duì)抗氧化能力這一指標(biāo)，則需要通過試驗(yàn)進(jìn)一步進(jìn)行探討。

本研究中，選取了同為西藏波密的野生桑黃和人工養(yǎng)殖桑黃進(jìn)行了比較，無論是總黃酮量還是金屬含量上都存在較大的差異，而種植方式是否影響桑樹桑黃的藥用效果，種植桑黃經(jīng)過改良種植條件后是否能與野生桑黃具有等同的藥用價(jià)值，都是值得進(jìn)一步研究的問題。

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