種豬常溫精液新舊國標比對分析

解冰輝，段曉紅，李同川，王貴江，羅文學，駱菲，馬軍紅，張軍輝

（河北省畜牧良種工作總站，河北石家莊 050000）

傳統的豬常溫精液檢測使用的是人工判斷精子活力和密度，檢測方法比較落后，人為誤差較大， 而隨著精準智能化的研發和推廣新型的豬精液檢測儀器CASA 系統出現，多數中大型公豬站已經采用， 它更快捷和精準的檢測出精子活力和密度；舊標準的技術要求比較單一，深部輸精技術在實際生產中的應用效果顯著； 舊標準使用的福爾馬林固定液， 從環保的角度對人員和環境已經不太適用。 新標準及時修訂實施使種豬常溫精液生產經營行為更標準更規范更具有先進性和科學性， 筆者對新舊標準進行了梳理，便于檢測人員操作、避免出現數據誤差和保證檢測技術方法一致性。

1 常溫精液質量要求的比對

新舊比對，一是檢測項目減少2 項：外觀和有效期；二是劑量，舊標準：地方品種40～50 毫升，其他80～100 毫升；新標準：常規輸精≥80.0毫升,深部輸精≥60.0 毫升，地方品種≥40.0 毫升；三是精子活力新舊不變≥60.0%；四是每劑量中直線前向運動精子數，舊標準：地方品種≥10 億，其他≥25 億；新標準：常規輸精≥18.0 億,深部輸精≥12.0 億，地方品種≥10.0 億；五是精子畸形率新舊不變≤20%。

2 抽樣的比對

舊標準： 抽樣方法與批次化生產實際不符，不便于操作。

新標準：抽樣方法條理清晰，可操作性強。出廠檢驗：以每批次生產量隨機抽取，取樣量不少于10%。 型式檢驗： 以每批次生產量隨機抽取，取樣量不少于15%。 抽樣時間：產品分裝后2 小時至保質期截止前24 小時。

3 檢測方法的比對

3.1 劑量的檢測

舊標準量筒法： 取兩個劑量全部倒入量筒內，讀取其精液量，兩個劑量平均數為樣品劑量值。 為了降低誤差，以及避免對活力的影響，需要將量筒洗凈晾干，緩緩倒入精液，將精液瓶置于量筒上方30 秒以上，盡量使精液全部移入量筒內，讀出劑量值。 實際工作中需要準備大量量筒否則檢測時間過長影響后面的檢測內容，量筒內精液也倒不干凈， 檢測誤差大、 操作不方便。

新標準稱量法：電子臺秤，清零后稱量待檢產品，記錄數值，再使用與受檢產品同一批次未使用的空包裝稱量記錄數值， 兩個數值之差為劑量值。 根據精液密度約等于水的密度，用臺秤稱量精液質量， 將精液質量數值直接等同于體積數值。 測量結果保留至小數點后1 位。

新舊檢測方法對比， 稱量法與量筒法的比較優勢：簡單、快捷，更好地體現科學性、先進性， 更符合生產實際。 種豬常溫精液密度約為1.0038 克/毫升與水的密度1.000 克/毫升(4℃)接近，1 份80 毫升的種豬常溫精液誤差約為0.304 克，使用量筒法時其殘留在原容器的精液量約為0.5930 毫升，約0.5952 克。 可見量筒法誤差大。量筒法在操作過程中對精子損傷較大，可能對后續活力和畸形檢測結果產生影響。

3.2 精子活力和前向運動精子數的檢測

精子活力檢測方法比對，舊標準使用人工目測判斷；新標準使用儀器法檢測。 舊標準：活力：取兩個劑量精液搖勻，各取1 毫升水浴鍋加熱，分別滴1 滴于載玻片上，加蓋玻片，37℃條件下，估算精子活力，每個樣片觀察3 個視野，計算平均值。

前向運動精子數檢測方法比對，舊標準使用血球計數板法；新標準使用儀器法檢測。舊標準：用移液器取950 微升3%的氯化鈉， 再取50 微升的精液與之混勻，取一滴稀釋后的精液于血蓋片邊緣，使精液自行慢慢流入計數室，均勻充滿后立刻停止，放置5 分鐘，然后在顯微鏡下數上下兩個計數室，每個計數室選左上右上左下右下中間5 個中方格計數， 取兩個計數室平均數，如果計數結果誤差超過5%，則應重檢。 通過公式計算出每劑量前向運動精子數。

新標準： 開啟精子質量分析儀預熱至少5分鐘，恒溫臺設置溫度為37℃；物鏡轉換到相差顯微鏡頭，調節至視野光線最佳；專用定容玻片預熱大于1 分鐘；樣品在18℃～25℃室溫下輕搖2～3 分鐘；保持精液瓶與視線水平，使其傾斜約45°， 將移液器吸頭伸入液面下15～20 毫米處，避開凝結絮狀物，吸取3～5 微升，滴于定容玻片進樣口處，讓其自行流入腔室，同樣方法做一平行樣；點樣后預熱1～3 分鐘，在200 倍條件下，在3 分鐘內完成兩個樣點的檢測。 每個樣點至少讀取3 個視野的數據， 記錄每個樣點的平均值。相對偏差大于5% ，則應重檢。算出活力平均值，保留小數點后1 位。 同樣方法在儀器軟件界面讀取并記錄精子密度值，通過公式計算出前向運動精子數，保留小數點后1 位。

新標準中精子質量分析儀的優勢： 步驟簡單、操作快速、讀數準確、重復性好，提高檢測效率。 舊標準中，聘用職工流動性大，而且每個人判定標準各異，人為誤差較大，嚴重影響數據的準確性。 而使用質量分析儀， 讀數一視同仁，降低了人工誤差，避免了糾紛。 質量分析儀需要定期采用血球計數法進行校準，一般1 年1 次。

3.3 精子畸形率檢測

精子畸形率新舊比對，舊標準使用姬姆薩染色法染色時間需要1.5 小時；新標準使用姬姆薩染色法需要15～30 分鐘或者使用伊紅苯胺黑快速染色法，時間更短，檢測更快。 舊標準使用了福爾馬林固定液，新標準刪除了中性福爾馬林的固定步驟。

新標準染色法優勢：染色時間縮短，染色效果不變；中性福爾馬林為有毒有害試劑，屬于管制試劑， 刪去固定步驟不影響精子畸形率的檢測，環保安全；伊紅苯胺黑快速染色法能快速檢測精子畸形率，有效縮短檢測時間，提高檢測效率，對生產企業具有絕對優勢。

4 檢驗分類的比對

4.1 出廠檢驗

舊標準為常規檢驗，只檢驗外觀和活力。

新標準檢驗項目：產品劑量、精子活力和前向運動精子數。 主要是在封裝入庫前和銷出時檢驗。 判定規則：所檢項目有一項不符合本標準規定時，則判定該抽檢樣品不合格。

4.2 型式檢驗

舊標準檢驗項目：全部檢驗項目，每兩周抽檢1 次。

新標準檢驗項目：全部檢驗項目。 正常生產時，至少每半年進行1 次型式檢驗。 有特殊情況隨時進行型式檢驗。 判定規則：任何項目不符合本標準規定時，則判定該抽檢樣品不合格。 若該抽檢樣品在其保質期內可進行復檢。 批次判定規則：每個批次中所有抽檢樣品合格，則判定該批次合格；其中有任一抽檢樣品不合格，則判定該批次不合格。

5 新標準增加了標簽和隨行文件的內容

5.1 標簽標識信息

種豬常溫精液、品種名稱、種公豬個體編號、生產企業名稱及聯系方式、生產時間、適用受體、授精方式、保存條件、保質期，以及規定的產品質量參數最低保證值。

非生產企業經營常溫精液產品時，其標簽信息還應包括經營企業的名稱和聯系方式等。若是混合精液則應注明。

使用電子標簽（如二維碼標簽）的標簽信息至少應包括本條款規定的信息，還可包括生產企業商標或徽標，以及可追溯的其他信息。

5.2 隨行文件

隨行文件至少應包括種畜禽生產經營許可證和動物防疫合格證復印件，以及種公豬系譜檔案復印件。

6 包裝、貯存、運輸和保質期

新標準更為詳細、具體，可操作性更強。

包裝：包裝的容量應大于規定的對應產品的最低劑量的110%。 如40 毫升包裝容量應不低于44 毫升。

貯存：恒溫箱避光保存，16℃～18℃，保質期內每間隔8～12 小時搖勻1 次。

運輸：16℃～18℃避光密封容器中運輸，避免強烈振動和碰撞。

保質期：應不少于72 小時。

7 新標準增加了不合格產品的處置

不應出售和使用檢驗不合格的產品。不合格產品應按有關規定進行無害化處理。新標準對不合格產品的處置提供了參考依據。

8 新標準新增定義內容

種豬：體型外貌和性能質量符合本品種標準要求且具有種用價值的公豬。 對公豬質量可靠性的要求。

精子密度：每毫升精液中所含的精子個數。

批次：同一生產線、同一時間，使用同一份或混合精液稀釋分裝生產的一批常溫精液產品。

保質期：自產品生產之時起，在滿足種豬常溫精液產品規定的保存和運輸條件下，其產品符合質量要求的最長期限。

混合精液：同一品種兩頭及以上種豬的常溫精液混合產品。