淺析五色糯米飯中6 種合成著色劑檢測方法

◎ 梁卓妮，廖潔明，唐成志

（南寧市食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530000）

人工合成著色劑大多以萘、苯、甲苯等化工產品為原料，經過磺化、硝化、鹵化、偶氮化等一系列有機反應制成[1]，有的含有β-萘胺和α-氨基萘酚等致癌物，過多食用會危害人體健康。五色糯米飯是壯族地區的傳統風味小吃，因糯米飯呈黑、紅、黃、白、紫5 種色彩而得名，又稱“烏飯”[2]。每逢農歷三月三節日前后，廣西各族（尤其是壯族）人民都要制作食用五色糯米飯，這一風味美食與祭祖娛神活動融合在一起，充滿著民族、地方情趣。飽含植物清香的五色糯米飯十分誘人，看之色澤鮮艷、五彩繽紛；食之清香彌漫、沁人心脾，其不僅美觀美味，還具有滋補等一定的保健作用，深受廣西壯家人的喜愛，被看作吉祥如意、五谷豐登的象征。面對如此色鮮味美的食物，是否會有商家違規使用添加劑？市民能否放心食用？針對這個問題，本研究開展了五色糯米飯專項風險監測工作。目前，《食品中合成著色劑的測定》（GB/T 5009.35—2016）采用聚酰胺吸附法測定合成著色劑，操作較為煩瑣、耗時，且主要適用于酒類、汽水類、糖類、蜜餞類等食品[3]。五色糯米飯與標準適用的這些食品有所不同，其含有大量的淀粉等天然水溶性成分，這些成分由于容易吸附著色劑而干擾測定[4-6]，所以該方法不太適用于五色糯米飯等成品糧中合成色素的測定。因此，本研究采用最大吸收波長檢測的方法，操作簡單省時，靈敏度和準確度均得以提高，對五色糯米飯中合成著色劑的測定可靠、實用。

1 材料及測定方法

1.1 儀器與試劑耗材

1.1.1 儀器

超高效液相色譜儀（Waters Acquity UPLC H-Class），PDA檢測器；十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多 XS205DU）；超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；離心機（Sigama）。

1.1.2 試劑耗材

（1）乙酸銨溶液（0.02 mol/L）；檸檬酸溶液；甲醇-甲酸溶液（6+4）；氨水；乙醇－氨水溶液。

（2）OASIS WAX 柱（6cc/150 mg）固相萃取柱。

1.1.3 標準品

取胭脂紅、莧菜紅、新紅、檸檬黃、日落黃、亮藍標準溶液，濃度均為1 000 μg·mL-1，混合并稀釋成不同濃度的標準曲線溶液。

1.2 色譜條件

資生堂 MG Ⅲ-C18，直徑× 長度（mm）：（2.0×150 ）mm；PDA 檢測器，檢測波長（檸檬黃430 nm，新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃520 nm，亮藍625 nm）；流動相，以乙腈為B、以0.02 mol·L-1乙酸銨溶液為A，進行梯度洗脫（0～4 min：A 96%～80%；4～7 min：A 80%～5%；7～10 min：A 5%～96%）；流速：0.5 mL·min-1；柱溫30 ℃；進樣量10 μL。

1.3 樣品預處理

稱取5.000 g（精確至0.001 g）粉碎樣品，置于50 mL 刻度離心管中，加入乙醇-氨溶液10 mL，渦旋5 min，5 000 rpm 離心5 min，將上清液過濾，殘渣再重復提取1 次，合并上清液作為樣品溶液。將樣品溶液置于預處理過的固相萃取柱中，待試樣全部流出，依次用5 mL 10%甲酸甲酯溶液、5 mL 水清洗，棄去全部流出液，再用5 mL 25%氨化甲醇洗脫，收集洗脫液，置50 ℃濃縮至近干，用水溶解并定容至25 mL，經0.45 μm 微孔濾膜過濾，濾液上機分析。

1.4 測定法

精密吸取標準曲線溶液和樣品提取液各10 μL，注入超高效液相色譜儀測定。

2 結果與分析

2.1 波長選取

GB 5009.35—2016 方法中采用254 nm 的波長進行測定，存在很多雜峰，往往會干擾目標物質的檢測。本研究針對各合成著色劑標準品溶液，用紫外－可見分光光度計進行光譜掃描，發現目標物質在可見光范圍內有更大的吸收值，最終確定6 種合成著色劑（胭脂紅、莧菜紅、新紅、檸檬黃、日落黃、亮藍），檢測波長如表1 所示。同時，6 種合成著色劑標準溶液在3 個波長通道（430、520、625 nm）的色譜圖，如圖1 所示。

圖1 合成著色劑色譜圖

2.2 檢出限的確定

在最低濃度標準溶液液相色譜圖中，按3 倍信噪比濃度作為檢出限。采用本方法處理，6 種合成著色劑在不同波長測定時的檢出限見表2。

由表2 可以看出，在多波長下測定的檢出限，均較254 nm 單波長下要低，尤其是亮藍。由此可見，本研究設定的波長可以用來測定這6 種合成色素，有效提高檢測靈敏度。

2.3 標準曲線繪制

將標準溶液分別稀釋為0.25、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 mg·L-1，精密吸取10 μL 注入超高效液相色譜儀。以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標做標準曲線進行線性回歸，結果見表3。

表3 標準曲線結果表

由表3 可以看出，在0.25～20 mg·L-1的范圍內，6 種合成著色劑均具有較好的線性關系。

2.4 加標回收測定

精確配制6 種合成著色劑濃度均為10.0 mg·L-1的混合標準溶液，加入空白五色糯米飯樣品基質中進行加標回收實驗，結果見表4。

表4 樣品加標回收試驗結果表

由表4 可以看出，本方法回收率為83%～104%，且實驗所得回收率較穩定。因此，該方法具有較高的準確度和重現性。

3 結語

本研究確立了五色糯米飯中6 種合成著色劑的高效液相色譜檢測方法，用添加乙醇的堿化試液，提取五色糯米飯中的合成著色劑，并進行固相萃取柱凈化。用0.02 mol·L-1醋酸銨溶液作為流動相A、甲醇作為流動相B，進行梯度洗脫，并采用不同波長同時測定提取液中的6 種合成著色劑（胭脂紅、莧菜紅、新紅、檸檬黃、日落黃、亮藍）。該方法中，6 種合成著色劑的檢出限分別為檸檬黃0.4 mg·kg-1、胭脂紅0.1 mg·kg-1、莧菜紅0.2 mg·kg-1、新 紅0.2 mg·kg-1、日落黃0.1 mg·kg-1、亮藍0.1 mg·kg-1，回收率為83%～104%。該方法操作簡單、省時，靈敏度、準確度較高，可以用于測定五色糯米飯中合成著色劑。