4種抑菌劑對油茶炭疽病和軟腐病的防效

溫如斯 秦榮秀 孟中磊 宋賢沖 黃有德 廖旺姣

摘要? 篩選環保型抑菌劑，為油茶炭疽病和軟腐病綠色防治提供依據。采用室內生長速率法和噴霧法測定了4種抑菌劑對油茶炭疽病菌和軟腐病菌抑制作用及油茶炭疽病苗期防治效果。實驗室抑菌試驗結果表明，納米氧化鐵懸浮劑及油茶殼醋液對油茶炭疽病菌和油茶軟腐病菌均有較好的抑制作用，其中含有殼聚糖的納米氧化鐵懸浮劑的抑制效果最好，1%納米氧化鐵懸浮劑處理對油茶炭疽病抑制率為100%，4%的油茶殼醋液處理對油茶炭疽病抑制率為100%；0.3%的納米氧化鐵懸浮劑處理對油茶軟腐病的抑制率為100%，0.4%的油茶殼醋液處理對油茶軟腐病的抑制率為100%。苗期試驗結果顯示，4種抑菌劑對油茶炭疽病菌均有很好的防治效果，以納米氧化鐵和油茶殼醋液防治效果最好，防治效果達90%左右，與電解質水溶液等處理差異顯著，對照多菌靈和波爾多液防治效果亦較好，達59%以上。

關鍵詞? 抑菌劑；油茶炭疽病；油茶軟腐病；防治效果

中圖分類號? S482.2?? 文獻標識碼? A?? 文章編號? 0517-6611（2024）07-0130-04

doi： 10.3969/j.issn.0517-6611.2024.07.032

Control Effects of Four Antibacterial Agents on Anthrax and Soft Rot of Camellia oleifera

WEN? Ru-si，QIN? Rong-xiu， MENG? Zhong-lei et al

（Guangxi Zhuang Autonomous Region Forestry Science Research Institute，Nanning，Guangxi 530002）

Abstract? In order to screen environmentally friendly antibacterial agents and provide a basis for green prevention and control of Camellia anthracnose and soft rot disease.The inhibition of four kinds of bacteriostatic agents on Colletotrichum gloeosporioides and soft rot of Camellia oleifera and the control effect at seedling stage were determined by indoor growth rate method and spray method.The results showed that both nano iron oxide suspension and Camellia oleifera shell vinegar had good inhibitory effects on Camellia oleifera anthracnose pathogen and Camellia oleifera soft rot pathogen.Among them，nano iron oxide suspension containing chitosan had the best inhibitory effect.The 1% nano iron oxide suspension treatment had a 100% inhibition rate on Camellia oleifera anthracnose，while the 3% Camellia oleifera shell vinegar treatment had a 100% inhibition rate on Camellia oleifera anthracnose;The inhibition rate of 0.3% nano iron oxide suspension treatment on Camellia oleifera soft rot disease was 100%，and the inhibition rate of 0.4% Camellia oleifera shell vinegar treatment on Camellia oleifera soft rot disease was 100%.The results of seedling test showed that four kinds of bacteriostatic agents had good control effects on anthracnose of Camellia oleifera，among which nano iron oxide and Camellia oleifera hull vinegar had the best control effect，with the control effect reaching about 90%，which was significantly different from electrolyte aqueous solution，and the control effect of carbendazim and bordeaux was also good，with the control effect reaching more than 59%。

Key words? Antibacterial agents;Camellia oleifera anthracnose;Camellia oleifera soft rot disease;Control effect

油茶（Camellia oleifera）屬山茶科（Theaceae）山茶屬（Camellia） 植物，是我國特有的油料植物［1］，與油橄欖、油棕、椰子并稱為世界四大木本油料植物［2］。近年來通過國家大力推廣我國油茶種植面積持續增加。油茶病害防治在油茶管理上非常重要［3］。目前報道油茶病害有42種［4］，而油茶的重要病害炭疽病可造成油茶減產20%～30%［5］。油茶軟腐病（Agaricodochium camellia）又稱油茶落葉病、葉枯病，可引起油茶大量落葉、落果、無花芽分化，造成減產，是油茶重要病害之一［6-7］。據報道，在油茶林中一般油茶軟腐病的病株率為20%，嚴重的高達95%［6-10］，因此防治油茶炭疽病、軟腐病對油茶產業意義重大。使用化學殺菌劑是目前防治油茶炭疽病的主要手段，但過量使用，不僅對茶油的品質造成影響，還會對生物多樣性造成破壞，因此目前急需尋求新型環保的生物農藥［11-12］。余傲濤［13］研究表明甲基硫菌靈和腈菌唑對油茶炭疽病有較好的防治效果；尹華慶等［14］研究表明氟菌·肟菌酯、氟硅唑、肟菌·戊唑醇、苯醚甲環唑、戊唑醇對油茶炭疽病菌具有很好的抑制效果；歐陽紅萍等［3］和齊苗等［15-16］研究表明，波爾多液和多菌靈分別對油茶軟腐病和油茶炭疽病具有較好的防治效果。納米材料和技術的發展為開發新的抗菌藥物提供了契機［17］。研究表明納米銀［18］、二氧化鈦、氧化銅等納米材料具有良好的抗菌活性［19-20］，而納米氧化鐵則具有相對較高的生物安全性和環境友好性［21］。董玉昕等［22］研究表明噴施納米銀和納米氧化鐵可顯著提高薄皮甜瓜抗白粉病的能力。目前使用納米氧化鐵對油茶炭疽病和軟腐病的防治鮮見報道。油茶殼醋液是油茶殼熱解之后的產物，包含多種有機物，如有機酸類、酚類、酮類物質等［23］，被廣泛用作土壤改良劑、飼料添加劑、食品添加劑、抗炎癥劑和抗真菌等用途［24］。但油茶殼木醋液的研究鮮有報道。筆者通過實驗室抑菌試驗及田間小區試驗評價納米氧化鐵懸浮液、油茶殼醋液等4種新型防治材料，為油茶炭疽病和軟腐病防治提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1??? 抑菌劑。

抑菌劑共有 4種，分別為納米氧化鐵懸浮液、油茶殼醋液、電解水水溶液、艾蒿油水溶液。

1.1.2??? 供試菌株。

油茶炭疽病菌（Colletotrichum fructicola）和油茶軟腐病菌（Agaricodochium camellia）由廣西壯族自治區林業科學研究院森林保護研究所提供。

1.1.3 ???植物材料。油茶為 1年生油茶幼苗，長勢較差，葉片感染炭疽病較為嚴重。

1.2 試驗地概況

試驗地位于廣西壯族自治區林業科學研究院油茶苗圃（108°21′E，22°56′N），屬亞熱帶季風氣候；年均氣溫21.7 ℃，平均最低氣溫12.8 ℃，平均最高氣溫28.2 ℃；夏季高溫多雨、冬季溫暖少雨，年均降水量1 300 mm，平均相對濕度79%；夏季潮濕，冬季稍顯干燥，干濕季節分明。試驗地土壤情況為全氮含量1.80 g/kg，全磷含量0.1 g/kg，全鉀含量8.63 g/kg［25］。

1.3 試驗設計

共設7個處理，其中4個抑菌劑處理，6%納米氧化鐵懸浮液、6%油茶殼醋液、6%艾蒿油水溶液、6%電解水溶液；以80%波爾多液（CK1）100倍液、50%多菌靈（CK2）500倍液和清水處理為對照（CK）。在油茶炭疽病和軟腐病發病嚴重時，對油茶幼苗進行噴霧處理。每個處理 30 株，重復3次。各試驗小區之間間隔1 m作為保護行，共進行3次噴施，每次間隔7 d。

1.4 抑菌劑的制備

1.4.1??? 納米氧化鐵懸浮液。

稱量0.2 g納米氧化鐵，加入1 L蒸餾水、5 g殼聚糖，攪拌機（析牛，型號os30pro）2 000 r/min攪拌1 min充分混勻后待用。納米氧化鐵由廣西林業科學研究院林化所實驗室提供。殼聚糖供試公司為西安妙果生物科技有限公司。

1.4.2??? 油茶殼醋液。油茶殼醋液由廣西林業科學研究院林化所實驗室提供。

1.4.3??? 電解水溶液。

將40 g氯化鈉加入1 L蒸餾水中，用氧化電位水生成器電解10 min，制成弱酸性次氯酸鈉水溶液，氧化電位水生成器供試公司為深圳億綠源環保科技有限公司。

1.4.4??? 艾蒿油水溶液。

取4 mL艾蒿精油，加入艾蒿純露1 L，混合后待用，艾蒿精油和艾蒿純露由廣西林業科學研究院林化所實驗室提供。

1.4.5??? 對照。

50%多菌靈可濕性粉劑，江蘇三山農藥有限公司生產；80%波爾多液為可濕性粉劑，美國仙農有限公司生產。

1.5 抑菌劑抑制效果測定

采用菌絲生長速率法進行測定，將供試抑菌劑分別配成目標系列濃度梯度50倍母液，使用移液器各取1 mL分別加入熔化降溫至50 ℃的49 mL PDA 培養基中，充分搖勻后分別倒入直徑9 cm培養皿內，制成含抑菌劑培養基平板，供試菌株25 ℃培養7 d 后，用內徑6 mm打孔器在菌落邊緣打取菌絲塊，接種到上述平板培養基上，以加滅菌水PDA平板為空白對照。25 ℃黑暗培養7 d后，用“十”字交叉法測量菌落生長直徑，求出各抑菌物質對菌絲生長的抑制率。

菌絲生長抑菌率= （對照菌落直徑－處理菌落直徑）／（對照菌落直徑-菌絲塊直徑）×100％

1.6 調查方法與病害程度分級

參考方中達［26］制定的標準進行劃分，在抑菌劑防治前，采用隨機取樣法調查油茶炭疽病發病情況，每個處理調查30株，每株記錄10張葉片的發病情況，根據炭疽病分級標準對調查葉片進行分級，統計發病率和病情指數，抑菌劑防治后病情指數調查法與之相同，炭疽病發病嚴重程度分為 5個等級（表1）。

根據油茶病害分級標準［27］統計病情指數，計算防治效果，計算公式：病情指數=∑（病級病葉數×代表數值）/（調查總葉數×發病最重級的代表數值）；防效=［1-（對照藥前病情指數×處理藥后病情指數）/（對照藥后病情指數×處理藥前病情指數）］×100%。

2 結果與分析

2.1 抑菌劑對油茶炭疽病菌抑制作用

由表2可知，4種不同抑菌劑不同濃度對炭疽病菌抑制作用不同，其中以納米氧化鐵懸浮液抑制效果最好，4種不同濃度抑制效果均為100%，其余3種處理隨著抑菌劑濃度加大，抑制率提高。油茶殼醋液濃度4%～6%時對炭疽病菌抑制效果可達100%；艾蒿油水溶液4種濃度抑制率相差不大，抑制率為50%～70%；電解質水溶液與其他3種處理相比，抑制率偏低，濃度1%～2%時，抑制率低于10%（圖1、2）。

2.2 抑菌劑對油茶軟腐病菌抑制作用

由表3可知，4種抑菌劑對油茶軟腐病菌均有不同程度的抑制作用。同等濃度?以納米氧化鐵和油茶殼醋液抑制效果較好。納米氧化鐵濃度0.2%時，抑制率達50%以上，0.3%濃度以上，抑制率可高達100%，油茶殼醋液濃度0.3%及以上，抑制率達87%以上；艾蒿油和電解質水溶液使用濃度0.4%及以上，抑制率達70%以上，抑制效果較好（圖3、4）。

2.3 苗圃防治效果

由表4可知，4種抑菌劑對油茶炭疽病菌均有很好的防治效果，以納米氧化鐵和油茶殼醋液防治效果較好，防治效果為90%左右，與電解質水溶液等處理差異顯著，對照多菌靈和波爾多液防治效果也較好，達59%以上。

3 結論與討論

研究表明，長時間使用化學農藥防治油茶炭疽病容易引起油茶炭疽病原抗藥性的產生，減緩抗藥性產生的主要辦法是輪換應用不同殺菌 劑［28］ 。納米材料具有良好的抑菌能力、不產生耐藥性、安全無污染等特性，目前已成功在農業生產、植物保護和植物營養等領域應用［22］。該研究納米氧化鐵1%對油茶炭疽病菌具有很好的抑制作用，與Tyagi等［29］報道FeNPs可以作為抗病原體的抗菌劑的結論相似。該研究0.2%納米氧化鐵苗期防治炭疽病效果，與董玉昕等［22］的10 μmol/mL納米氧化鐵能顯著降低甜瓜葉片的病情指數結論相似。

木醋液是由生物質熱解產生的一種黃色或紅棕色液體副產物，研究表明該物質對真菌有抑制作用［23］。該試驗結果顯示30%油茶殼醋液對炭疽病菌抑菌率高達100%，與郭運玲等［30］的25.25 mg/mL木醋液對玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）菌絲生長抑制率100%結論相似，苗期防治效果達90%，可供苗期炭疽病防治使用。

艾蒿 （Artemisia argyi L.）又稱艾草，菊科蒿屬野生草本植物，在我國分布廣泛。研究證明艾蒿具有一定的抑菌、抗病毒作用［31-32］。該研究結果顯示，3%艾蒿油水溶液對炭疽病菌抑制率達60%以上，0.3%及以上對油茶軟腐病菌抑制率達60%以上，與艾蒿對油茶炭疽病菌分生孢子萌發的抑制作用最強的結論相似。

綜上所述，供試的納米氧化鐵、油茶殼醋液和艾蒿油抑菌劑對油茶炭疽病菌和油茶軟腐病菌均有較好的抑制作用，可供苗期防治使用，林間防治效果有待進一步驗證。

參考文獻

［1］?鄧小軍，周國英，劉君昂，等.湖南油茶林叢枝菌根真菌多樣性及其群落結構特征［J］.中南林業科技大學學報，2011，31（10）：38-42.

［2］ 莊瑞林.中國油茶［M］.2版.北京：中國林業出版社，2008：66-68.

［3］ 歐陽紅萍，楊歡.不同化學藥劑對油茶軟腐病防治效果試驗［J］.林業調查規劃，2018，43（6）：84-86.

［4］ 郝亞倫，唐劍泉，柏浩東，等.油茶炭疽病生物防治研究進展［J］.現代農業科技，2021（22）：87-90.

［5］ 秦紹釗，張柱亭，王洪，等.貴州油茶炭疽病Colletotrichum kahawae 病原鑒定研究［J］.現代園藝，2020（4）：6-7.

［6］ 吳萍.油茶軟腐病無公害綜合治理技術［J］.現代農業科技，2011（18）：202.

［7］ 李春平，李清華，鐘偉.油茶常見病害的發生與防治［J］.安徽農業科學，2003，31（6）：1061，1079.

［8］ 魏安靖，戚英鶴，杜紅亮.油茶軟腐病防治研究［J］.南京林業大學學報（自然科學版），1987，11（3）：82-87.

［9］ 劉錫琎，魏安靖，樊尚仁，等.油茶軟腐病病原菌的研究［J］.微生物學報，1981，21（2）：154-163.

［10］? 林雪堅，吳光金，王稼銑.油茶軟腐病發病規律的研究［J］.中南林學院學報，1981，1（1）：78-84.

［11］ 覃麗萍，蘇琴，謝玲，等.杧果炭疽病菌 Colletotrichum asianum 和 C.fructicola 的危害特征及對殺菌劑的敏感性初探［J］.植物保護，2020，46（1）：197-202.

［12］ 彭開富.農藥污染現狀與環境保護措施［J］.南方農業，2017，11（23）：108，110.

［13］ 余傲濤.油茶炭疽病林間防治藥劑的篩選［J］.吉林農業，2019（14）：60-61.

［14］ 尹華慶，王建田，劉敏.油茶炭疽病病原菌鑒定及防治藥劑篩選［J］.湖南農業科學，2020（6）：70-72，75.

［15］ 齊苗，李曼曼.油茶炭疽病防治研究進展［J］.安徽農業科學，2018，46（3）：13-14.

［16］ 秦紹釗，張柱亭，王洪.油茶炭疽病防治技術探析［J］.南方農機，2020，51（8）：10.

［17］? SINGH R，SMITHA M S，SINGH S P.The role of nanotechnology in combating multidrug resistant bacteria［J］.Journal of nanoscience and nanotechnology，2014，14（7）：4745-4756.

［18］? COURTNEY C M，GOODMAN S M，MCDANIEL J A，et al.Photoexcited quantum dots for killing multidrugresistant bacteria［J］.Nature materials，2016，15：529-534.

［19］ DURN N，DURN M，DE JESUS M B，et al.Silver nanoparticles：A new view on mechanistic aspects on antimicrobial activity［J］.Nanomedicine，2016，12（3）：789-799.

［20］ PELGRIFT R Y，FRIEDMAN A J.Nanotechnology as a therapeutic tool to combat microbial resistance［J］.Advanced drug delivery reviews，2013，65（13/14）：1803-1815.

［21］ TOUMEY C.Quick lessons on environmental nanotech［J］.Nature nanotechnology，2015，10：566-567.

［22］ 董玉昕，鄭植，王文康，等.納米銀和納米氧化鐵對甜瓜白粉病防治研究［J］.中國農業科技導報，2022，24（11）：137-147.

［23］ 劉星宇.木醋液抑菌功能性及應用研究［D］.長春：吉林大學，2022.

［24］ 郭根茂.木醋液成分分析與工藝優化研究［D］.海口：海南大學，2021.

［25］ 溫如斯，吳方圓，郭麗梅，等.兩種微生物液體肥對香花油茶幼苗生長的影響［J］.廣西林業科學，2022，51（2）：255-258.

［26］ 方中達.植病研究方法［M］.北京：中國農業出版社，1998.

［27］ 陳紹紅，孫思，王軍.14種殺菌劑對油茶炭疽病的防治研究［J］.廣東林業科技，2007，23（2）：42-45.

［28］? 王翠蘭，左璐瑩，張紹勇，等.7種殺菌劑和5種植物抗病激活劑對油茶炭疽病病菌活性研究［J］.西北林學院學報，2022，37（2）：176-179.

［29］ TYAGI P K， GUPTA S， TYAGI S， et al.Synthesis of iron nanoparticles from spinach leaf and banana peel aqueous extracts and evaluation of antibacterial potential ［J］. Journal of nanomaterials， 2021， 2021（Pt5）： 1-11.

［30］ 郭運玲，董建悅，張淑紅，等.木醋液對玉米大斑病菌的抑制作用［J］.河南農業科學，2019，48（1）：90-93.

［31］ 王璐.艾蒿的抑菌作用研究進展［J］.山東化工，2021，50（24）：103-105.

［32］ 張亮.4種植物提取物對茶炭疽病菌及對茶樹防御酶的影響［D］.合肥：安徽農業大學，2012.

基金項目?? 廣西林科院基本科研業務費（林科202115號）。

作者簡介?? 溫如斯（1985—），女，廣西上林人，工程師，碩士，從事農林剩余物加工與利用、林化產品研究。*通信作者，高級工程師，碩士，從事林木病蟲害防治研究。