高效液相色譜法測(cè)定飲料中8種人工合成著色劑的含量

郭璞

摘 要：建立了固相萃取法結(jié)合高效液相色譜法測(cè)定飲料中8種著色劑含量的方法。結(jié)果表明，8種著色劑在0.5～50.0 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999；精密度實(shí)驗(yàn)RSD在0.7%～2.2%；平均加標(biāo)回收率為91.67%～93.79%，RSD≤3.8%。對(duì)20批不同類型飲料中8種人工合成著色劑進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示飲料中色素均未超出規(guī)定限值。本方法簡(jiǎn)便、高效，可用于同時(shí)測(cè)定飲料中8種人工合成著色劑。

關(guān)鍵詞：飲料；高效液相色譜法；人工合成著色劑

Determination of 8 Synthetic Colorants in Beverages by High Performance Liquid Chromatography

Abstract： A method for the determination of eight colorants in beverages by solid-phase extraction coupled with high performance liquid chromatography （HPLC） was established. The results showed that the linearity of the eight colorants was good in the concentration range of 0.5～50.0 μg·mL-1 with the correlation coefficients greater than 0.999; the RSD of the precision experiments were in the range of 0.7%～2.2%; and the average spiked recoveries were in the range of 91.67%～93.79% with the RSD≤3.8%. Eight artificial colorants in 20 batches of different types of beverages were measured， and the results showed that none of the pigments in the beverages exceeded the prescribed limit. This method is simple and efficient， and can be used for the simultaneous determination of 8 synthetic colorants in beverages.

Keywords： beverage; high performance liquid chromatography; synthetic colorant

飲料作為常見(jiàn)飲品，深受市場(chǎng)消費(fèi)者歡迎，但外觀多彩的飲料大多添加了人工合成著色劑。食用過(guò)量人工合成著色劑對(duì)人體健康有害[1-5]，因此通過(guò)有效方法測(cè)定飲料中人工合成著色劑，對(duì)維護(hù)消費(fèi)者權(quán)益以及確保市場(chǎng)飲料安全具有重大意義。本文建立了液相色譜法[6-10]測(cè)定飲料中人工合成著色劑的方法，并對(duì)檢出限、精密度、回收率進(jìn)行了方法確認(rèn)，結(jié)果顯示該方法適用于不同類型飲料中人工合成著色劑的同時(shí)測(cè)定，為其他類型食品中人工合成著色劑的測(cè)定提供了參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

LC 300型高效液相色譜儀（帶二極管陣列檢測(cè)器），珀金埃爾默股份有限公司；HZY6202電子天平（十萬(wàn)分之一），華志科學(xué)儀器有限公司；PHS-3C pH計(jì)，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；Dura Elit 10超純水系統(tǒng)，和泰儀器有限公司；C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），納譜分析技術(shù)（蘇州）有限公司；WX1506萃取柱（150 mg/6 mL），博納艾杰爾。

甲醇，優(yōu)級(jí)純，購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、新紅、誘惑紅、檸檬黃、日落黃和亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液，購(gòu)于壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

1.2 樣品來(lái)源

于市場(chǎng)采集不同類型飲料樣品共20批，見(jiàn)表1。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

精密量取莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、新紅、誘惑紅、檸檬黃、日落黃和亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液適量，用水稀釋配制成濃度為0.5 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、20.0 μg·mL-1和50.0 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.3.2 樣品處理

準(zhǔn)確稱取5 g樣品放入50 mL容量瓶中（固體飲料加適量水溶解）定容至刻度，然后加入萃取柱中（提前經(jīng)5 mL水、5 mL甲醇活化）。容量瓶經(jīng)水沖洗3次后分別加入小柱，再分別用3 mL水、3 mL甲醇進(jìn)行淋洗，隨后用洗耳球吹干小柱。用4 mL氨化甲醇（2%）進(jìn)行洗脫并收集洗脫液，洗脫液氮吹近干，用水定容至5 mL，微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣分析。

1.3.3 高效液相色譜測(cè)試條件

色譜柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相：0.02 mol·L-1乙酸銨-甲醇，梯度洗脫條件見(jiàn)表2。檢測(cè)波長(zhǎng)：莧菜紅、新紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅和赤蘚紅為520 nm，檸檬黃為415 nm，亮藍(lán)為610 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性

取標(biāo)準(zhǔn)溶液和加標(biāo)樣品溶液（20 mg·kg-1），按照1.3.3項(xiàng)下條件進(jìn)樣，8種著色劑的色譜峰能完全分離，見(jiàn)圖1。

2.2 線性考察和檢測(cè)限、定量限

取1.3.1項(xiàng)下配制好的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣測(cè)定，以日落黃、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、亮藍(lán)、赤蘚紅、誘惑紅和新紅的濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y。用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得到各元素的標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)系數(shù)。以儀器10倍信噪比為定量限，以儀器3倍信噪比為檢出限。結(jié)果見(jiàn)表3，人工合成著色劑在0.5～50.0 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999 0，定量限及檢出限均滿足分析要求。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取具有代表性的飲料樣品，按照樣品制備項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照高效液相色譜測(cè)試條件分別重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定8種著色劑含量，并分別計(jì)算對(duì)應(yīng)的RSD。結(jié)果顯示，莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、新紅、誘惑紅、檸檬黃、日落黃和亮藍(lán)RSD分別為0.7%、1.6%、2.0%、1.2%、1.1%、0.8%、1.0%、1.2%、2.2%，精密度滿足實(shí)驗(yàn)要求。

2.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取具有代表性的飲料樣品18份，精確稱量后，加入低、中、高（5 mg·kg-1、20 mg·kg-1、50 mg·kg-1）3種不同濃度混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照樣品制備項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照高效液相色譜條件測(cè)定，計(jì)算8種著色劑的回收率，結(jié)果見(jiàn)表4。莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、新紅、誘惑紅、檸檬黃、日落黃和亮藍(lán)的平均回收率分別為93.26%、93.79%、91.67%、91.79%、91.80%、92.31%、92.06%和92.74%，RSD分別為2.3%、1.1%、2.8%、3.8%、2.9%、2.8%、2.4%和3.7%，結(jié)果符合分析要求。

2.5 實(shí)際樣品測(cè)定

取樣品YL1～YL20，精密稱定5 g，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表5。《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）規(guī)定莧菜紅的限值為0.5 g·kg-1，胭脂紅的限值為0.6 g·kg-1，新紅的限值為0.05 g·kg-1，誘惑紅的限值為0.1 g·kg-1，檸檬黃的限值為0.1 g·kg-1，日落黃的限值為0.1 g·kg-1，亮藍(lán)的限值為0.02 g·kg-1。由表中數(shù)據(jù)可知，樣品YL-17、YL-18、YL-20未檢測(cè)到上述8種著色劑；20批次飲料中均未檢測(cè)到赤蘚紅；20批飲料樣品中8種著色劑含量均未超出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限值。

3 結(jié)論

本文采用固相萃取法處理樣品，建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定樣品中莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、新紅、誘惑紅、檸檬黃、日落黃和亮藍(lán)含量的方法。該方法準(zhǔn)確度、精密度符合要求，適用于飲料樣品中8種著色劑含量的測(cè)定。測(cè)定20批飲料樣品，結(jié)果表明飲料中著色劑的添加水平整體在安全范圍內(nèi)。

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