肉制品中酸性紅和誘惑紅含量測定盲樣考核探究

薛曉偉

摘 要：目的：通過參加實驗室認可CNAS現場評審考核肉制品中酸性紅和誘惑紅的測定，證實并提高實驗室的著色劑測定能力。方法：參照《食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定》（GB 5009.35—2023），優化了提取方法和色譜條件，采用外標法定量。結果：肉制品中酸性紅和誘惑紅的測定結果分別為1.92 mg·kg-1 、5.37 mg·kg-1，盲樣真值分別為2.07 mg·kg-1 、5.35 mg·kg-1。結論：盲樣考核結果滿意，本實驗室具備一定的著色劑檢測能力。

關鍵詞：酸性紅；誘惑紅；高效液相色譜法

Validation of the Determination Ability of Acid Red and Alluring Red in Meat Products

Abstract： Objective： To confirm and improve the ability of the laboratory to determine the acid red and alluring red in meat products by participating in CNAS field assessment. Method： According to the GB 5009.35—2023， the extraction method and chromatographic conditions were optimized， and external standard method was used for quantification. Result： The determination results of acid red and alluring red in meat products were1.92 mg·kg-1 and?5.37 mg·kg-1，the true values of blind samples were 2.07 mg·kg-1 and 5.35 mg·kg-1，respectively. Conclusion： The result of blind sample examination is satisfactory， and the laboratory has certain capabilities in detecting colorants.

Keywords： acid red; alluring red; high-performance liquid chromatography

肉制品含有豐富的營養成分，對人體健康有益。隨著生活水平的逐步提升，人們的要求也越來越高。除了最基本的衛生要求外，也會對色、香、味有所要求[1]。而合成色素因具有改善色澤的特點，在現代食品加工業中有非常廣泛的應用[2]。但合成色素大多數是由苯、甲苯、萘等化工產品經化學合成而來，具有潛在的致瀉性、臟器功能損害與致癌性，因此對化學色素的檢測監管相當重要[3]。針對合成著色劑含量檢測，部分文獻、專利中已經有過相關的報道，且我國也有相應的檢測標準。但GB 5009.35—2023中樣品前處理過程過于復雜，試驗所用時間較長，在日常面對大批量的檢驗任務時效率太低。本文通過優化提取方法和色譜條件，使得方法的實用性更強，能有效排除基質干擾，同時顯著提高回收率。

盲樣考核是對未知樣品進行測定，是為了驗證實驗室檢測能力，確保日常檢測結果的準確可靠而必須進行的一項質量控制活動。它是中國合格評定國家認可委員會（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）和中國計量認證（China Metrology Accreditation，CMA）認證評審的考核內容，能直接反映實驗室儀器設備和人員檢測技術的實際水平和出具報告的能力[4-7]。本次盲樣評估是通過參加實驗室認可CNAS現場評審考核肉制品中酸性紅和誘惑紅的測定，檢驗實驗室的著色劑檢測能力，提高實驗室在著色劑檢測技術上的競爭力。本實驗參照《食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定》（GB 5009.35—2023），優化了提取方法和色譜條件，采用外標法定量。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

酸性紅（1 000 ?g·mL-1）、誘惑紅（1 000 ?g·mL-1），北京海岸鴻蒙標準物質技術有限責任公司；甲醇（色譜純）；乙酸銨（色譜純）；無水乙醇（分析純）；氨水（分析純）；超純水；XS204梅特勒-托利多電子天平；IKA? MS3漩渦混合器；HC-3018高速離心機；KQ-500DE 超聲波清洗器；戴安U3000 高效液相色譜儀（DAD 檢測器）。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），序列號：USCL134794；流動相A為20 mmol·L-1乙酸銨溶液，B為甲醇；梯度洗脫；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：10 μL；柱溫：30 ℃。檢測器：二極管陣列檢測器波長范圍400～800 nm，檢測波長：520 nm。

1.2.2 標準曲線的制備

分別精密量取0.5 mL酸性紅、誘惑紅標準溶液，加超純水定容至10 mL，得到酸性紅、誘惑紅質量濃度均為50 ?g·mL-1的混合標準儲備液。分別吸取一定量的上述混合標準儲備液于容量瓶中，用超純水定容至10 mL，得到質量濃度分別為0.2 ?g·mL-1、0.5 ?g·mL-1、1.0 ?g·mL-1、2.0 ?g·mL-1、5.0 ?g·mL-1和10.0 ?g·mL-1的混合標準工作溶液。

1.2.3 樣品制備

準確稱取試樣2 g（精確至0.00l g），置于50 mL具塞離心管中，加入25 mL乙醇氨水溶液，渦旋1 min，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，渦旋混勻，于80 ℃水浴超聲30 min，8 000 r·min-1離心5 min，取10 mL上清液于50 ℃氮氣濃縮至近干，準確加入2 mL pH值為9.0的乙酸銨緩沖溶液溶解，溶液用針筒過濾器，孔徑0.45 μm的濾膜過濾，棄去5滴濾液，取續濾液作為待測液。空白試驗同上。

2 結果與分析

2.1 提取條件的選擇

選取已知酸性紅和誘惑紅含量的鹵肉陽性樣品，以乙醇氨水溶液為提取劑，在相同提取時間下，比較不同溫度超聲水浴的提取效率，實驗結果如表1所示。當溫度≥80 ℃后，提取效果趨于穩定，回收率≥92%，符合《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）要求。綜合考慮節約能效以及實驗安全問題，決定選擇80 ℃水浴超聲提取方式。

2.2 流動相的選擇

試驗以甲醇和20 mmol·L-1乙酸銨溶液為流動相，以色譜圖為依據，考察了不同洗脫梯度對實驗的影響，在保證分離效果的情況下，綜合考慮酸性紅和誘惑紅保留時間、峰形、峰面積以及靈敏度等因素，選擇流動相梯度比例如表2所示。

2.3 標準曲線的繪制

按1.2.2項方法配制標準系列溶液，以質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得到線性方程及相關系數。酸性紅：y=0.463 1x-0.063 7（r=0.999 6）；誘惑紅：y=0.429 9x-0.010 7（r=0.999 9）。在質量濃度為0.2～10.0 μg·mL-1 時，酸性紅、誘惑紅的峰面積線性關系良好。

2.4 方法驗證

2.4.1 回收率試驗

稱取鹵肉陰性樣品9份，添加3個不同水平的酸性紅和誘惑紅混合標準儲備液（50 ?g·mL-1）進行回收率實驗：第1、2、3份加入標準儲備液0.04 mL，第 4、5、6份加入標準儲備液0.08 mL，第7、8、9份加入標準儲備液0.40 mL。回收率測定結果見表3。由3表可知，回收率符合國家標準《實驗室質量控制規范食品理化檢驗》（GB/T 27404—2008）附錄F要求[5]。

2.4.2 精密度試驗

取回收試驗鹵肉加標樣品3份（每個水平各1份），連續測定6次，記錄峰面積，計算精密度。結果見表4。

2.4.3 檢出限確定

稱取鹵肉陰性樣品1份，取混合標準儲備液（50 ?g·mL-1）0.01 mL，按試樣分析步驟處理測定，目標物各組分色譜峰信噪比：酸性紅為S/N=8.2（＞3），誘惑紅為S/N=12.3（＞3）。由實驗結果可知，當稱樣量為2 g，各目標組分的方法檢出限為酸性紅：0.3? mg·kg-1，誘惑紅：0.3? mg·kg-1。

2.5 盲樣考核試驗

實驗室盲樣考核能力驗證一般以《ISO13528實驗室間能力比對試驗》經典Z值法評估實驗室的檢驗檢測水平，Z值的大小代表實驗室的結果與中位值的偏離程度，而符號“+”和“-”代表與中位值的偏離方向，一般|Z|≤1為結果滿意[6]。

本次對盲樣進行檢測，稱取兩份盲樣考核鹵肉制品進行試驗，采用已建立的方法進行測試，做2次平行試驗。酸性紅和誘惑紅測定結果分別為1.92 mg·kg-1、5.37 mg·kg-1，盲樣真值分別為2.07 mg·kg-1 、5.35 mg·kg-1，Z值分別為-0.65和0.17，|Z|均小于1，結果均為滿意。

2.6 方法應用

隨機抽取市內各大市場及商超的鹵肉樣品共30批次，應用本方法進行合成著色劑的測定。其中1份樣品檢出酸性紅，檢出濃度為0.92 mg·kg-1，其余29批均未檢出。該方法更適用于實驗室日常大批量的監督抽檢任務。

3 結論

盲樣考核能夠在一定程度上評價實驗室的管理水平和檢測者的綜合檢測能力。本次參加實驗室認可CNAS現場評審考核肉制品中酸性紅和誘惑紅的測定，準確性較高，考核結果為滿意。本研究總結了該盲樣評估試驗的實驗過程，優化后的方法簡便高效、精密度好，回收率高，能準確且快速地測定鹵肉制品中著色劑的含量。

參考文獻

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