雛痢凈中木香及蒼術薄層鑒別方法研究

陳 幸，單乃榮，班燕桃，吳 濤，嚴 寒，嚴 明

（廣西獸藥監察所，廣西南寧 530001）

0 引言

“雛痢凈”是一種由白頭翁、黃連、黃柏、馬齒莧、烏梅、訶子、木香、蒼術、苦參9味中藥組成的復方散劑，具有清熱解毒、澀腸止瀉的功效，主要用于防治雛雞白痢[1]。為《中華人民共和國獸藥典》2020年版二部收載品種。在目前的質量控制方法中，收載了7味中藥的顯微特征鑒別和黃連的薄層鑒別方法，專屬性和質量可控性不夠，難以全面評價該藥品的質量，存在較大的質量安全風險。組方中的木香為菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根，《本草綱目》記載，“木香是三焦氣分之藥，能升降諸氣”。其性味辛、苦、溫，歸脾、大腸、膽經，功效是行氣、調中、止痛。臨床主要用于脾胃氣滯所致的消化不良、腹瀉、下痢、腹痛及肝膽濕熱氣滯等證[2]。木香活性化合物中木香烴內酯和去氫木香內酯等主要化學成分，具有促進胃排空、止瀉、抗胃潰瘍、抗炎鎮痛等藥理作用。蒼術為菊科植物茅蒼術Atractylodes lancea（Thunb）Dc.或北蒼術Atract ylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥根莖，主要有效成分為蒼術素、蒼術酮及β-桉葉醇等揮發油類物質[3]，調節胃腸道，主治泄瀉。近年來有報道木香、蒼術飲片質量情況的主要原因用偽品替代或摻偽[4-5]，誤用混淆品土木香青木香[6]、北蒼術[7-9]。為了完善本產品的質量控制方法，提高產品質量標準，我們選擇木香烴內酯、去氫木香內酯和蒼術素等作為研究的指標性成分，對組方中木香及蒼術的薄層鑒別方法進行了研究。結果表明所建立的方法簡單、快速、靈敏，可以作為該散劑的質量控制標準。

1 儀器與材料

1.1 儀器

電子天平：梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，型號PL602-S（量程0.01 g）、AE240（量程0.01 mg）；超聲清洗儀：昆山市超聲儀器有限公司，型號KQ-250DB；薄層色譜全自動點樣儀：CAMAG公司，型號為ATS 4；雙槽玻璃層析缸；薄層色譜全自動定量噴霧器Biostep DS20；薄層色譜數字成像系統Biostep DD70。

1.2 試藥

木香對照藥材（批號：Z0181811，中國獸醫藥品監察所）。木香烴內酯對照品（批號：111524-201911，中國食品藥品檢定研究院）。去氫木香內酯對照品（批號：111525-201912，中國食品藥品檢定研究院）。蒼術（北蒼術）對照藥材（批號：Z0031306，中國獸醫藥品監察所）。蒼術（茅蒼術）對照藥材（批號：120932-201407，中國食品藥品檢定研究院）。蒼術素對照品（批號：111924-201806，中國食品藥品檢定研究院）。甲醇、環己烷、甲酸乙酯、甲酸、石油醚（60～90℃）、丙酮、乙醇、硫酸、香草醛均為分析純。硅膠G薄層板（德國Merck公司，規格200 mm×200 mm，批號：HX90 309784；青島海洋化工有限公司，規格200 mm×200 mm，批號：20201107）。

1.3 供試品

由廣西玉林市藥材市場購進的原料藥材制粉，過二號篩，按照《中華人民共和國獸藥典》2020年版二部收載的藥材標準檢驗符合規定。根據雛痢凈處方比例除去各藥，按制劑工藝制成自配缺木香的陰性對照樣品1批、缺蒼術的陰性對照樣品1批、自配雛痢凈樣品1批，混勻即得。分別監制獲得A企業雛痢凈3批（批號：20210201、20210202、20210203），B企業雛痢凈3批（批號：20210201、20210202、20210203），C企業雛痢凈3批（批號：20210301、20210302、20210303）。

2 方法與結果

2.1 雛痢凈中木香的薄層色譜鑒別

2.1.1供試品溶液的制備。取本品5 g，加甲醇10 ml，超聲處理30 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.1.2對照溶液的制備。取木香對照藥材0.5 g，同2.1.1項下的方法制成對照藥材溶液。再取木香烴內酯對照品、去氫木香內酯對照品，加甲醇分別制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.3木香陰性對照溶液的制備。取不含木香的“雛痢凈”陰性對照樣品5 g，按照2.1.1項下的方法，制成陰性對照溶液。

2.1.4薄層色譜鑒別。吸取上述五種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，預飽和30 min，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，觀察結果。

2.1.5結果。供試品色譜中，在與木香對照藥材色譜和木香烴內酯、去氫木香內酯對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，斑點清晰、圓整、無拖尾。陰性對照樣品在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上無斑點、無干擾。此方法可以用于雛痢凈中木香的質量控制。圖譜見圖1、圖2。

圖1 木香的薄層圖譜（普通G板 德國Merck）

圖2 木香的薄層圖譜（普通G板 青島海洋）

2.2 雛痢凈中蒼術的薄層色譜鑒別

2.2.1供試品溶液的制備。取本品3 g，加甲醇10 ml，超聲處理15 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.2.2對照溶液的制備。各取蒼術（北蒼術）對照藥材，蒼術（茅蒼術）對照藥材0.8 g，同2.2.1項下的方法制成對照藥材溶液。再取蒼術素對照品，加甲醇制成每1 ml含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3蒼術陰性對照溶液的制備。取不含蒼術的“雛痢凈”陰性對照樣品3 g，按照2.2.1項下的方法，制成陰性對照溶液。

2.2.4薄層色譜鑒別。吸取上述五種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）－丙酮（9∶2）為展開劑，預飽和30 min，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰，觀察結果。

2.2.5結果。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同的污綠色主斑點。陰性對照樣品在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上無此斑點、無干擾。圖譜見圖3、圖4。

圖3 蒼術的薄層圖譜（普通G板 德國Merck）

圖4 蒼術的薄層圖譜（普通G板 青島海洋）

3 討論

3.1 優化提取方法

3.1.1在木香的TLC實驗中，分別對展開劑和顯色劑進行了考察。考察了木香藥材及含木香制劑常用的展開劑系統，比較了環己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液、石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯（9∶1）、環己烷-乙酸乙酯（9∶1）、環己烷-丙酮（10∶3）、甲苯-甲醇（27∶1）等展開系統，最終確定采用獸藥典木香藥材的展開系統，即環己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液，此系統相較于其他系統分離效果更好。對不同的點樣量進行了篩選，分別點樣2、5、10 μl，根據實驗結果，最終確定供試品、對照品溶液及對照藥材溶液均為5 μl，樣品和對照品斑點大小相近、斑點顏色清晰、分離度好。

3.1.2在蒼術的TLC實驗中，分別對提取方法、展開劑進行了優化考察。提取方法的優化，考察了不同溶劑、溶劑用量比例及提取方式。

1）取樣品加正己烷超聲提取，濾過，濾液作為供試品溶液。

2）取樣品加無水乙醚室溫放置2 h，濾過，濾液揮去乙醚，殘渣加無水乙醇溶解作為供試品溶液。

3）取樣品加甲醇超聲處理，濾過，濾液作為供試品溶液。結果為此方法甲醇超聲提取效果較好，斑點圓整清晰。

展開劑的優化。進行了氯仿一甲醇、正己烷一乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）－丙酮等試劑不同配比試驗研究，結果表明以石油醚（60～90℃）－丙酮（9∶2）作為展開劑得到的色譜分離度及斑點相對位置重現性好。

3.2 對比實驗

木香、蒼術的TLC實驗均用進口薄層板和國產薄層板進行了對比實驗，均達到較好的分離效果，說明本方法具有較強的耐用性。

薄層色譜法（TLC）在中藥和藥物輔料的檢測中占有非常重要的地位，據統計，在《中華人民共和國獸藥典》2020版二部中有大部分的品種使用了TLC作為質量控制分析方法。盡管柱液相色譜、質譜發展迅速，但TLC成本低、操作靈活便捷、樣品前處理簡單、通量高、儀器聯用便捷等優勢仍是柱液相色譜難以達到的[10]。本實驗在薄層色譜鑒別中，保留原處理凈標準黃連的鑒別，增加了另外兩味藥木香和蒼術的薄層鑒別方法，使該標準更加完善，因為TLC法不僅能夠定性，還具有半定量的效果，對該產品的質量控制水平提升有重要意義。