豆粉與乳清蛋白復(fù)配增強(qiáng)免疫功能的研究

摘 要：目的：通過小鼠免疫功能試驗評估豆粉、乳清蛋白粉、復(fù)配蛋白粉3種受試物是否具有增強(qiáng)免疫力的功效。方法：利用隨機(jī)分組法進(jìn)行實驗，將200只昆明種小鼠分為對照組、豆粉組、乳清蛋白粉組和復(fù)配蛋白粉組，分別評估不同受試物的免疫功能。結(jié)果：豆粉、乳清蛋白粉、復(fù)配蛋白粉均能有效增強(qiáng)小鼠免疫功能，豆粉有效劑量為600 mg·kg-1 bw·d-1，乳清蛋白粉有效劑量為400 mg·kg-1 bw·d-1，復(fù)配蛋白粉有效劑量為1 g·kg-1 bw·d-1。結(jié)論：3種受試物均能有效增強(qiáng)小鼠免疫功能，其中復(fù)配蛋白粉的效果最好。

關(guān)鍵詞：豆粉；乳清蛋白粉；復(fù)配蛋白粉；細(xì)胞免疫；體液免疫

Abstract： Objective： The mouse immune function test was used to evaluate whether three test substances： soy flour， whey protein powder and compound protein powder have the effect of enhancing immunity. Method： 200 SPF grade Kunming mice were randomly divided into a soybean powder group， a whey protein powder group， and soybean and whey protein composition powder composition group. And the immune functions of different test substances were evaluated. Result： Soybean powder， whey protein powder and compound protein powder could effectively enhance the immune function of mice. The effective dose of soybean powder was 600 mg·kg-1 bw·d-1， the effective dose of whey protein powder was 400 mg·kg-1 bw·d-1， and the effective dose of compound protein powder was 1 g·kg-1 bw·d-1. Conclusion： The three test substances can effectively enhance the immune function of mice， and the effect of compound protein powder is the best.

Keywords： soy flour; whey protein powder; compound protein powder; cellular immunity; humoral immunity

豆粉含有豐富的營養(yǎng)元素，包括優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)、人體必需脂肪酸、微量元素、維生素及多種礦物質(zhì)，是理想的營養(yǎng)元素補充劑[1]。有研究表明，食用豆類蛋白可以有效降低人體中膽固醇含量并預(yù)防心血管疾病[2]。乳清蛋白富含免疫球蛋白等具有功能特性的蛋白質(zhì)[3]。這些組分能夠通過對抗自由基和清除自由基來增強(qiáng)人體免疫力[4]。研究發(fā)現(xiàn)，以含有磷脂的乳清蛋白粉和牛磺酸為主要原料制成的營養(yǎng)粉能夠有效改善小鼠的記憶力[5]。豆粉、乳清蛋白等單一蛋白質(zhì)含有較為豐富的營養(yǎng)元素，但單一蛋白質(zhì)很難滿足人體對大量營養(yǎng)元素的全部需求。為解決這一問題，利用豆粉及乳清蛋白開發(fā)具有免疫功能的雙蛋白產(chǎn)品是行之有效的思路。本研究通過動物功能評價試驗評估了豆粉、乳清蛋白粉、復(fù)配蛋白粉的免疫功能，為開發(fā)增強(qiáng)人體免疫功能的新型蛋白補充劑提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 受試物及用量

豆粉：沖服，成年人每日推薦用量66.67 mg·kg-1 bw；乳清蛋白粉：沖服，成年人每日推薦用量50 mg·kg-1 bw；復(fù)配蛋白粉（含豆粉40%，乳清蛋白粉30%，輔料30%）：沖服，成年人每日推薦用量167 mg·kg-1 bw。

1.2 主要儀器和試劑

TopPette移液器，大龍興創(chuàng)實驗儀器（北京）股份公司；SPX-70標(biāo)準(zhǔn)生化培養(yǎng)箱，上海賽倫生物技術(shù)股份有限公司；BS-600M全自動生化分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；TGL20M高速冷凍離心機(jī)，江蘇新春蘭科學(xué)儀器有限公司。

刀豆蛋白（Con A），西安萊葆生物技術(shù)有限公司；小牛血清，美國GIBCO公司；異丙醇（分析純），云南新藍(lán)景化學(xué)工業(yè)有限公司；DNFB，美國Sigma公司。

1.3 實驗方法

選擇重量18～22 g的SPF級昆明種小鼠200只，分為對照組、豆粉組、乳清蛋白粉組及復(fù)配蛋白粉組。豆粉組用量為600 mg·kg-1 bw·d-1，乳清蛋白粉組用量為400 mg·kg-1 bw·d-1，復(fù)配蛋白質(zhì)粉組用量為1 g·kg-1 bw·d-1。所有實驗動物均通過口腔途徑每日灌胃一次，每次灌胃量為20 mL·kg-1 bw，對照組使用等容積的純凈水通過口腔途徑每日灌胃一次。動物實驗嚴(yán)格遵循《實驗動物管理條例》。

1.3.1 細(xì)胞免疫功能試驗

小鼠耳廓腫脹度試驗：對小鼠進(jìn)行25 d藥物注射，處理后摘除小鼠左側(cè)和右側(cè)耳朵，稱量并比較左右耳朵的質(zhì)量差異。ConA誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗：小鼠給藥30 d后處死，無菌條件下摘除脾臟制成單細(xì)胞懸液，并加入80 μL的ConA液，對照組加入相同量的培養(yǎng)液，培養(yǎng)72 h后加入500 μL異丙醇并充分混勻。使用酶標(biāo)儀測定570 nm位置處的光吸收值。脾淋巴細(xì)胞的增殖能力通過Con A孔的吸光度值減去無Con A孔的吸光度值進(jìn)行計算。

1.3.2 體液免疫功能試驗

用小鼠血清溶血素生成試驗評估小鼠的體液免疫功能。在小鼠給藥30 d后，進(jìn)行眼眶采血，低溫冷凍離心并取血清，用生理鹽水將血清稀釋。取100 μL放入血凝試驗盤里，然后向每孔添加100 μL的山羊血壓積紅細(xì)胞懸浮液（0.5%，v/v），混合均勻，計算抗體積數(shù)。

1.3.3 小鼠廓清試驗

小鼠施用藥物30 d后，眼眶取血20 μL，加入到2 mL 0.1% Na2CO3的溶液中，用酶標(biāo)儀測量其在600 nm波長處的光密度數(shù)值，并計算吞噬指數(shù)。

1.3.4 小鼠NK細(xì)胞活性試驗

小鼠給藥30 d后處死，無菌條件下摘除脾臟。將摘除的脾臟研磨并過200目篩網(wǎng)，制成單細(xì)胞懸液，用完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度。將100 μL的靶細(xì)胞和脾淋巴細(xì)胞分別加入96孔板中。按流程操作完成后，使用酶標(biāo)儀測量490 nm處的光密度值（OD），并計算NK細(xì)胞活性。

1.4 統(tǒng)計與分析

使用SPSS 20.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，并進(jìn)行單因素方差分析和非參數(shù)檢驗，P＜0.05表示差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)胞免疫功能

豆粉、乳清蛋白粉、復(fù)配蛋白粉對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響如表1所示。相比于對照組，3類測試樣本的DTH指數(shù)沒有顯著差別（P＞0.05）；復(fù)配蛋白粉可以促進(jìn)小鼠淋巴細(xì)胞增殖，并且與對照組相比差異具有顯著性（P＜0.05）。結(jié)果表明，復(fù)配蛋白粉能有效提高小鼠淋巴細(xì)胞的增殖能力。

2.2 體液免疫功能

小鼠溶血素生成實驗可以測定被測物質(zhì)對小鼠體液免疫功能的影響[6]。由表2可知，對照組小鼠溶血空斑數(shù)為9.42±0.76（×103個/全脾）。與對照組相比，豆粉組、乳清蛋白粉組和復(fù)配蛋白粉組小鼠的溶血空斑數(shù)量都有所增加。小鼠抗體積分?jǐn)?shù)也是檢測小鼠體液免疫功能的重要指標(biāo)。對照組小鼠抗體積分?jǐn)?shù)為45.36±8.75。與對照組相比，豆粉組、乳清蛋白粉組和復(fù)配蛋白粉組小鼠抗體積數(shù)均有顯著增強(qiáng)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 小鼠廓清試驗及NK細(xì)胞活性試驗

由表3可知，對照組小鼠廓清試驗吞噬指數(shù)為4.31±0.42。相較于對照組，豆粉組、乳清蛋白粉組和復(fù)配蛋白粉組小鼠的吞噬指數(shù)都得到了明顯的提高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。其中，復(fù)配蛋白粉對于小鼠免廓清試驗吞噬指數(shù)的影響最為明顯，表明相比于豆粉和乳清蛋白粉，復(fù)配蛋白粉對小鼠免疫力的增強(qiáng)效果更好。

小鼠NK細(xì)胞活性試驗是檢測受試物提高免疫功能效果的重要指標(biāo)[7]。由表3可知，對照組小鼠NK細(xì)胞活性為20.36%±2.75%。相較于對照組，豆粉組、乳清蛋白粉組、復(fù)配蛋白粉組小鼠的NK細(xì)胞活力都有顯著提高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。其中，復(fù)配蛋白粉改善小鼠免疫力的效果明顯好于豆粉和乳清蛋白粉。

3 討論

豆粉和乳清蛋白粉均含有大量人體必需氨基酸，是人體補充蛋白質(zhì)的理想來源[8]。但單一來源的蛋白質(zhì)營養(yǎng)元素組成豐富性較差，不能滿足人體的全部需求。因此，本文利用豆粉和乳清蛋白粉開發(fā)了復(fù)配蛋白粉。小鼠細(xì)胞免疫試驗、小鼠體液免疫試驗、小鼠廓清試驗和小鼠NK細(xì)胞活性試驗結(jié)果表明，豆粉劑量為600 mg·kg-1 bw·d-1時能夠有效增強(qiáng)小鼠的免疫功能，乳清蛋白粉劑量為400 mg·kg-1 bw·d-1時能夠顯著增強(qiáng)小鼠免疫功能，復(fù)配蛋白粉劑量為1 g·kg-1 bw·d-1時能夠有效增強(qiáng)小鼠免疫功能。綜上所述，復(fù)配蛋白粉對小鼠免疫功能的增強(qiáng)作用更加顯著。

4 結(jié)論

本研究系統(tǒng)評價了豆粉、乳清蛋白粉、復(fù)配蛋白粉對小鼠免疫功能的影響。試驗結(jié)果顯示，與對照組小鼠相比，豆粉組、乳清蛋白粉組合復(fù)配蛋白粉組小鼠的抗體積分?jǐn)?shù)、NK細(xì)胞活性、廓清試驗吞噬指數(shù)均有不同程度的提高，且復(fù)配蛋白粉還能夠顯著增強(qiáng)小鼠的淋巴細(xì)胞增殖能力，表明3種受試物均能增強(qiáng)小鼠的免疫功能，且均不會使小鼠產(chǎn)生不良反應(yīng)，復(fù)配蛋白粉增強(qiáng)小鼠免疫功能的效果最好。本研究為利用不同類型的蛋白質(zhì)開發(fā)功能更加強(qiáng)大的雙蛋白補充劑提供了理論基礎(chǔ)和研究方向。

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作者簡介：劉雙全（1993—），男，山東德州人，本科，工程師。研究方向：食品藥品檢測。