miR-200c聯合MORC2檢測在卵巢癌病情及預后評估中的臨床價值

洪佳,黃金玲,楊瓊瓊,汪晶,李晶

卵巢癌的發病機制與環境因素及遺傳因素有關,其中基因表達異常為主要致病病因,研究發現多種基因表達異常與卵巢癌病情及預后密切相關,在卵巢癌病情及預后評估中敏感度及特異度高于傳統的病理分期[1-2]。miR-200c可通過多個信號傳導通路調控腫瘤細胞遷移、侵襲及上皮間質轉化,在卵巢癌等多種惡性腫瘤中表達上調[3-4]。MORC家族CW型鋅指蛋白2(MORC family CW-type zinc finger 2,MORC2)為新近發現的促癌基因,具有調控細胞增殖、自噬及染色質重塑等功能,為乳腺癌等多種惡性腫瘤預后不良的標志物[5-6]。目前miR-200c和MORC2在卵巢癌病情及預后評估中的臨床價值尚無相關研究。本研究旨在探討miR-200c聯合MORC2檢測在卵巢癌病情及預后評估中的臨床價值,報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2017年1月—2019年12月武漢大學人民醫院婦產科診治的卵巢癌患者103例為卵巢癌組,另以同期卵巢良性疾病患者60例(包括卵巢囊腫、卵巢炎等)作為對照組。2組研究對象在年齡、卡氏評分、體表面積、糖尿病史、高血壓史及HPV感染方面比較差異均無統計學意義(P>0.05), 見表1。本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準(WHU-1045),患者或家屬知情同意并簽署知情同意書。

表1 對照組及卵巢癌組患者臨床資料比較

1.2 卵巢癌組病例選擇標準 (1)納入標準:①經病理組織學檢查確診;②初次診治,既往無卵巢癌病史,未行相關治療(包括不限于手術、化療等);③均經增強CT、MR或超聲檢查明確國際婦產科協會(FIGO)分期,臨床病理資料明確;④患者能配合本研究,隨訪未脫落。(2)排除標準:①合并其他良惡性腫瘤、卵巢轉移瘤等;② 合并精神神經疾病。

1.3 觀測指標與方法

1.3.1 miR-200c及MORC2表達檢測:卵巢癌組取腫瘤組織及癌旁組織(距離腫瘤組織>3 cm),對照組患者取卵巢活檢組織。液氮下碾磨組織標本,使用上海碧云天公司TRIzol試劑盒(編號R0016)提取總RNA。采用實時熒光定量PCR法檢測miR-200c及MORC2表達,檢測試劑盒為BeyoFastTMSYBR Green qPCR Mix(購自上海碧云天公司,編號D7260),檢測儀器為美國ABI公司7900HT Fast實時熒光定量PCR系統。引物序列:miR-200c上游5’-GGATAATACTGCCGGGT-3’,下游5’-GTGCGTGTCGTGGAGTC-3’;MORC2上游5’-GGAGGTTCCTTCTCCCAAAGTC-3’,下游5’-CAGAAACTGCGACACTCCGCTT-3’;U6上游5’-GCTTCGGCA GCACATATACTAAAAT-3’,下游5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’;GAPDH上游5’-TGATGGGTGTGAACCACGAG-3’,下游5’-CCCTTCCACGATGCCAAAGT-3’。PCR擴增體系25 μl;反應條件為:94℃預變性5 min、95℃下15 s、60℃退火40 s、61℃延伸擴增40 s,共計38個循環,最后一輪72℃反應8 min。miR-200c選擇U6為內參,MORC2選擇GAPDH為內參,分別計算miR-200c、MORC2相對表達量。

1.3.2 隨訪:卵巢癌組患者每3個月隨訪1次,隨訪時間至2023年10月,隨訪內容包括影像學檢查、腫瘤標志物(CA153)等,統計患者預后狀況(生存、死亡),其中隨訪2年時出現死亡、腫瘤復發進展、嚴重并發癥(完全性腸梗阻、惡病質、直腸陰道瘺)等定義為預后不良。

2 結 果

2.1 2組miR-200c和MORC2表達比較 卵巢癌組患者腫瘤組織miR-200c、MORC2表達高于癌旁組織和對照組(P<0.01),卵巢癌組癌旁組織與對照組miR-200c、MORC2表達的差異無統計學意義(P>0.05),見表2。

表2 對照組和卵巢癌組病變組織miR-200c和MORC2表達比較

2.2 卵巢癌患者miR-200c、MORC2表達在不同臨床病理中差異比較 卵巢癌組患者腫瘤組織miR-200c、MORC2表達在腫瘤低分化、有惡性腹水、腫瘤最大徑≥5 cm、有淋巴結轉移、有遠處轉移及FIGO分期 Ⅲ～Ⅳ期患者高于中-高分化、無惡性腹水、腫瘤最大徑<5 cm、無淋巴結轉移、無遠處轉移及FIGO Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.01),見表3。

表3 卵巢癌患者不同臨床病理因素中腫瘤組織miR-200c、MORC2表達比較

2.3 miR-200c、MORC2預測卵巢癌患者2年預后不良效能 繪制miR-200c、MORC2預測卵巢癌患者2年預后不良效能的ROC曲線,并計算曲線下面積(AUC),結果顯示:miR-200c、MORC2及二者聯合預測卵巢癌患者2年預后不良的AUC分別為0.786、0.792、0.901,二者聯合優于miR-200c、MORC2單獨預測效能(Z=8.239、8.025,P均<0.001),見表4。

表4 miR-200c、MORC2預測卵巢癌患者2年預后不良效能分析

2.4 卵巢癌患者死亡危險因素Logistic回歸分析 以卵巢癌患者死亡為因變量(賦值:是為“1”;否為“0”),以上述結果中P<0.05項目為自變量進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示:miR-200c≥0.78、MORC2≥0.65、低分化、有惡性腹水、腫瘤最大徑≥5 cm、有淋巴結轉移、有遠處轉移、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期是卵巢癌患者死亡的獨立危險因素(P<0.01),見表5。

表5 卵巢癌患者死亡危險的多因素Logistic回歸分析

2.5 miR-200c、MORC2表達與卵巢癌生存期的關系 卵巢癌組miR-200c≥0.78且MORC2≥0.65的患者中位生存期(27.4±5.8)月低于miR-200c<0.78或MORC2<0.65的中位生存期(34.8±6.5)月(Log-Rankχ2=16.371,P<0.05),見圖1。

圖1 卵巢癌患者miR-200c、MORC2表達與生存期的關系

3 討 論

卵巢癌的發病機制與各種誘因導致基因表達異常有關,其中miRNA在卵巢癌發生、發展及轉歸中扮演重要角色,具體機制包括調控細胞周期、凋亡、遷移、侵襲及腫瘤免疫微環境等[7]。研究發現miRNA貫穿卵巢癌的整個病程,與病情嚴重程度及生存期相關,可作為卵巢癌病情及預后評估的標志物,檢測miRNA變化可為卵巢癌臨床診療提供客觀證據[8-9]。miR-200c具有調控腫瘤細胞遷移侵襲、微血管生成及上皮間質轉化等功能,與惡性腫瘤發病機制及預后相關,miR-200c表達升高為預后不良的危險因素[10-11]。Kang等[12]研究發現腫瘤組織miR-200c-3p為結直腸癌預后評估的標志物,miR-200c-3p表達與總生存期呈負相關。Guo等[13]研究發現miR-200c 通過下調 PTEN 表達促進乳頭狀甲狀腺癌細胞增殖、遷移和侵襲。Ankasha等[14]發現miR-200c-3p通過靶向DLC1的3'-非翻譯區而發揮在高級別漿液性卵巢癌進展中的促進作用。本研究中卵巢癌患者miR-200c表達顯著高于癌旁組織和對照組,進一步研究發現miR-200c表達與腫瘤分化程度、惡性腹水、腫瘤最大徑、淋巴結轉移、遠處轉移及FIGO分期相關,且miR-200c≥0.78為卵巢癌患者死亡的獨立危險因素,提示miR-200c與卵巢癌發病機制、病情及預后相關。

研究發現MORC2在染色質重塑、DNA損傷修復、表觀遺傳調控和轉錄調控中扮演關鍵角色,在多種惡性腫瘤中可檢測到MORC2表達異常,為惡性腫瘤潛在的治療靶點[15-16]。Saroha等[17]研究發現MORC2通過β-catenin信號通路促進乳腺癌細胞增殖及遷移。Guddeti等[18]發現MORC2和MAX有助于糖酵解酶的表達、乳腺癌細胞的增殖和遷移。Liao等[19]研究發現MORC2高表達的三陰性乳腺癌患者對新輔助化療敏感度下降,為預后不良的標志物。結合國內外新近研究進展,推測MORC2在卵巢癌中具有促癌作用,為其預后不良的影響因素。本研究中卵巢癌患者MORC2表達顯著高于癌旁組織和對照組,進一步研究發現MORC2表達與腫瘤分化程度、惡性腹水、腫瘤最大徑、淋巴結轉移、遠處轉移及FIGO分期相關,且MORC2≥0.65為卵巢癌患者死亡的獨立危險因素,提示MORC2表達與卵巢癌病情及預后相關。

目前卵巢癌病情及預后評估指標包括腫瘤標志物及病理組織分期,但存在敏感度及特異度低、普適性差及可重復性低等缺點,研究卵巢癌新型標志物在改善卵巢癌療效及預后中至關重要[20-21]。隨著檢測技術的提高及卵巢癌分子機制的闡明,基因水平的檢測在卵巢癌中的臨床價值更高,但單個基因水平的檢測指標因缺乏組織特異性而導致其敏感度及特異性低,臨床上可通過多項指標聯合檢測以顯著提高敏感度及特異度[22-23]。本研究中,miR-200c聯合MORC2預測卵巢癌2年預后不良敏感度、特異度及AUC均高于單獨預測,表明二者聯合檢測可顯著提高預測卵巢癌預后不良的效能,在卵巢癌臨床診療中應密切監測miR-200c及MORC2以提高診療水平。

綜上所述,卵巢癌患者miR-200c及MORC2表達顯著升高,在卵巢癌病情及預后評估中具有重要臨床價值,兩者聯合檢測時可顯著提高預測卵巢癌預后不良的敏感度及特異度。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

洪佳:設計研究方案,實施研究過程,論文撰寫;黃金玲:進行統計學分析;楊瓊瓊、汪晶:實施研究過程,資料搜集整理,論文修改;李晶:提出研究思路,分析試驗數據,論文審核