胃腺癌患者血漿脂肪酸組分變化及其對臨床分期的預測效能

吳生為，丁瀟東，毛偉征

1 南京醫科大學青島臨床醫學院，山東青島 266071；2 青島市市立醫院普外科

中國每年新增胃癌患者47.9萬例，幾乎占了全球胃癌新增病例的一半［1］。胃癌中胃腺癌占比高達95%以上，胃腺癌患者的生存時間及預后與臨床分期密切相關。早期胃腺癌患者通過胃腺癌根治術可以獲得較好的預后，但是多數患者早期癥狀不明顯，確診時已處于中晚期，而這類患者手術治療后的5年生存率低于30%［2］。因此，早期發現并且準確評估胃腺癌分期，對于制定最佳治療方案及患者預后有直接影響。目前，臨床上確定胃腺癌分期以病理檢查結果為金標準，雖然其可以準確診斷患者病情，但是因為病理檢查具有一定的侵入性、創傷性，部分患者的接受度不高。研究表明，腫瘤細胞生長、增殖、分化和轉移均與脂質代謝密切相關［3］。脂肪酸是脂質的重要組成部分，參與了腫瘤細胞的信號傳導，其異常表達與乳腺癌、卵巢癌、結直腸癌和膀胱癌等腫瘤的發生發展密切相關［4-6］。但是，胃腺癌患者血漿脂肪酸譜是否已經發生改變及其是否可以預測患者的臨床分期鮮見報道。2023年1月—8月，本研究比較了不同臨床分期胃腺癌患者的血漿脂肪酸組分，為患者術前確定臨床分期提供依據。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入標準：①行開放或微創胃腺癌根治性切除手術；②術后經病理檢查確診為胃腺癌；③臨床資料完整。排除標準：①合并嚴重的心腦血管疾病、肝腎功能障礙、甲狀腺功能亢進、糖尿病、艾滋病等；②術中聯合其他臟器切除；③術前行放化療、免疫治療及脂肪乳營養支持治療。④術前影像學檢查顯示存在肝、肺等遠處轉移。選擇同期青島市市立醫院收治并符合上述標準的胃腺癌患者40例，根據第8版美國癌癥聯合會（AJCC）的臨床病理分期標準，分為早期組（Ⅰ、Ⅱ期）21例、中晚期組（Ⅲ、Ⅳ期）19例。早期組男16例、女性5例，年齡（66.95 ± 9.48）歲，BMI（24.13 ± 3.84）kg/m2，吸煙3例；中晚期組男13例、女性6例，年齡（66.21 ± 10.92）歲，BMI（22.26 ±2.65）kg/m2，吸煙6例。兩組上述資料均具有可比性（P均＞0.05）。本研究通過青島市市立醫院倫理委員會批準（2023臨審字第180號），患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2 血漿脂肪酸占比檢測 采用氣相色譜法。兩組均在術前留取靜脈血5 mL，3 000 g/min離心15 min，保存血漿。氯仿/甲醇（1∶ 1v/v）浸提血漿中的脂質，與硫酸甲醇3 mL、甲苯1 mL混合，70 ℃條件下保持2 h，生成脂肪酸甲酯。正己烷萃取，使用Sep-Pak硅膠柱過濾。氮吹儀除去溶劑，重新溶解在正己烷中。使用配備Agilent DB-23色譜柱（60 m，0.25 mm ×0.25 μm）的氣相色譜系統，檢測血漿中各類脂肪酸占總脂肪酸的百分比。樣品進口溫度為260 ℃，N2、H2壓力分別為50、75 kPa；溫度程序：140 ℃、0～2 min，140～160 ℃、2～3 min，160 ℃、3～8 min，160～180 ℃、8～9 min，180 ℃、9～21 min，180～200 ℃、21～22 min，200 ℃、22～30 min，200～205 ℃、30～30.25 min，205 ℃、30.25～41.25 min。

1.3 統計學方法 采用SPSS26.0統計軟件。計量資料采用S-W法檢驗正態性，呈正態分布以±s表示，兩組間比較采用Student-t檢驗；非正態分布以M（P25，P75）表示，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗。繪制兩組間比較有差異的血漿脂肪酸單獨及聯合預測患者臨床分期的ROC曲線，計算曲線下面積（AUC），分析其預測價值。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血漿脂肪酸占比比較 按照長短來分：早期組血漿短鏈脂肪酸（SCFA）、中鏈脂肪酸（MCFA）、長鏈脂肪酸（LCFA）占比分別為0.13%（0.04%，0.53 %）、1.66%（0.16%， 2.41%）、96.93%（92.20%， 99.66%），中晚期組分別為0.49%（0.14%， 0.91%）、1.88%（0.24%， 3.52%）、95.64%（93.72%， 98.51%），兩組比較差異均無統計學意義（P均＞0.05）。按照結構來分：兩組血漿飽和脂肪酸（SFA）、單不飽和脂肪酸（MUFA）、多不飽和脂肪酸（PUFA）及PUFA中的Ω-3多不飽和脂肪酸（Ω-3PUFA）、Ω-6多不飽和脂肪酸（Ω-6PUFA）占比比較差異均無統計學意義（P均＞0.05）；中晚期組血漿SFA中的棕櫚酸（PA，C16： 0）占比高于早期組，Ω-3PUFA的α-亞麻酸（ALA，C18： 3n3）占比低于早期組（P均＜0.05）；兩組其他血漿脂肪酸占比比較差異均無統計學意義（P均＞0.05）。見表1。

表1 兩組血漿脂肪酸占比比較［%，M（P25，P75）］

2.2 血漿PA、ALA單獨及聯合對胃腺癌分期的預測價值 血漿PA、ALA單獨及聯合預測胃腺癌分期的AUC及95%CI分別為0.697（0.534～0.860）、0.703（0.528～0.878）、0.797（0.657～0.937），敏感度分別為58.0%、66.7%、63.2%，特異度分別為76.0%、84.2%、90.5%。見表2及圖1 ～ 3。

圖1 血漿PA預測胃腺癌患者臨床分期的ROC曲線

圖2 血漿ALA預測胃腺癌患者臨床分期的ROC曲線

圖3 血漿PA和ALA聯合預測胃腺癌患者臨床分期的ROC曲線

表2 胃腺癌患者血漿中PA和ALA的ROC 曲線分析結果

3 討論

腫瘤轉移及侵襲是中晚期胃腺癌患者預后不良的關鍵因素，脂質代謝參與了細胞膜合成、能量穩定以及細胞信號傳導等過程，血漿中脂肪酸的代謝異常會為腫瘤細胞提供有利于其生存的腫瘤微環境，也是腫瘤發生發展的主要特征之一［3］。為了探究血漿脂肪酸代謝組學與胃腺癌臨床病理分期的關系，本研究采用氣相色譜法對40例胃腺癌患者的血漿脂肪酸占比進行分析；結果顯示，中晚期胃腺癌患者較早期患者的血漿PA占比升高、ALA占比降低，并且二者聯合檢測有助于臨床分期的預測，可以用于指導術前臨床分期，進而選擇治療方案。

PA是人體血液中的一種主要SFA，也是高脂飲食中的主要脂肪酸。研究顯示，PA可以為腫瘤細胞提供能量，并參與調節促進腫瘤進展的細胞內信號分子，從而促進腫瘤細胞增殖和轉移［7］。PA可以通過CD36依賴性方式促進黑色素瘤、口腔癌和乳腺癌轉移，還可以通過激活STAT3信號通路促進前列腺癌細胞增殖［8］。最近的一項研究顯示，PA還可以受到代謝酶酰基輔酶 A氧化酶1（ACOX1）去磷酸化誘導發生重編程，促進β-連環蛋白棕櫚酰化和穩定激活β-連環蛋白信號傳導，從而促進結直腸癌的進展［9］。動物實驗顯示，外源性PA可以由脂肪酸的細胞表面受體CD36介導，通過Akt蛋白磷酸化，促進腹膜種植胃腺癌小鼠的轉移［10］。這與本研究觀察到的中晚期胃腺癌患者血漿PA占比升高的結果相符。另外，該研究還發現，同樣是SFA的硬脂酸具有潛在抑制胃腺癌轉移的生物學效應，這表明不同SFA的生物學功能也會存在差異［10］。因此，通過氣相色譜法分析每種脂肪酸在胃腺癌中的代謝組學特征是非常有必要的。但是也有研究發現，PA在胃腺癌組織中表達下調，并且高濃度PA可特異性抑制AGS、SGC-7901和MGC-803胃腺癌細胞增殖、侵襲和轉移［11］。因此，PA對于不同腫瘤細胞的影響目前是有爭議的，需要更多大樣本實驗明確其作用。

ALA作為人體的必需脂肪酸，主要存在于綠葉蔬菜的葉綠體中，同時也是Ω-3PUFA家族的母體脂肪酸，可以轉化為其他具有生物活性的物質，如二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA），這些脂質代謝物可以生成炎癥特化促消退介質（SPMs），從而影響腫瘤微環境［12］。一項針對胃腺癌病變進展的長期前瞻性隨訪研究發現，ALA與胃腺癌早期上皮內瘤變和胃腺癌總體風險呈負相關關系，尤其是與腸化生進展的負相關系數較高［13］。本研究結果顯示，中晚期胃腺癌患者血漿脂肪酸中ALA占比下降。ALA可以通過脂質過氧化、增加腫瘤細胞中活性氧的產生以及線粒體功能障礙等方式，抑制腫瘤細胞生長和誘導其凋亡［14］。在腫瘤微環境中，ALA等Ω-3PUFA的減少有助于腫瘤細胞從鐵死亡（一種與氧化脂質相關的鐵依賴性和非凋亡形式的細胞死亡形式）中逃逸［15］。因此，過量攝入Ω-3PUFA可能是一種選擇性輔助抗腫瘤方式。

綜上所述，中晚期胃腺癌患者血漿PA占比高于早期患者、ALA占比低于早期患者，二者聯合檢測有助于胃腺癌患者術前判斷臨床分期。但本研究只針對代謝組學中的脂肪酸進行了差異比較，未全面考慮其他代謝通路，后續還需對其他代謝通路進行全面研究。