血清miR-134-5p、miR-181a-5p聯合檢測對良惡性肺結節的鑒別價值

周鑫志 張松 魏小棟

大部分肺結節為良性,但有相當一部分是早期的、潛在可治愈的惡性腫瘤,判斷結節的良性或惡性是肺癌早期發現的關鍵[1]。微小RNA(miRNA)是一種非編碼、短、單鏈RNA,通過miRNA通過結合mRNA的3'-UTR區在轉錄后水平調節基因轉錄和翻譯參與生物體的病理生理過程[2]。miRNA的異常表達參與腫瘤細胞的增殖、轉移、侵襲和血管生成,最近miRNA作為判斷肺結節性質的生物標志物被研究[3]。微小RNA(miR)-134-5p在非小細胞肺癌和鼻咽癌中起抗腫瘤作用[4]。miR-181a-5p是miR-181家族的成員,抑制非小細胞肺癌進展[5]。本研究探討聯合測定肺結節病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平在鑒別良惡性肺結節中的價值。

對象與方法

一、對象

2021年1月～2021年12月收治的肺結節病人124例,根據病理結果分為良性組和惡性組,每組各62例。納入標準:(1)病理確診為肺結節[6];(2)無肺癌病史;(3)知情且同意;(4)臨床資料完整。排除標準:合并惡性腫瘤、免疫系統、血液系統以及腎臟功能障礙疾病;有肺部放化療或手術治療史;入組前3個月有激素、抗生素治療史;肺部感染、慢性肺病或肺結核;妊娠期或哺乳期。本研究經醫院倫理委員會批準。

二、方法

1.一般資料收集:收集病人年齡、性別、體質指數、吸煙史、結節直徑、結節個數、結節位置等資料。與良性組相比較,惡性組病人結節直徑顯著增大,差異有統計學意義(P<0.05);兩組年齡、性別、體質指數、吸煙史、結節個數、結節位置比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平測定:采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢查。就診當日清晨空腹靜脈血5 ml,4 ℃冰箱保存,5 000 r/min離心8分鐘,取上清液,超低溫冰箱保存備用。采用總RNA提取試劑盒提取血清樣本總RNA,并測定RNA產物濃度。采用RT-PCR試劑盒進行qRT-PCR檢測miR-134-5p和miR-181a-5p水平,以U6為內參基因,每個樣品設置3個技術重復。

三、統計學方法

結果

1.兩組血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平比較見表2。與良性組比較,惡性組病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平均顯著降低,差異有統計學意義(P<0.05)。

表2 兩組血清miR-134-5p,miR-181a-5p水平比較

2.血清miR-134-5p水平與miR-181a-5p相關性分析:Pearson相關分析顯示,肺結節病人血清miR-134-5p水平與miR-181a-5p呈正相關(r=0.547,P<0.05)。見圖1。

圖1 血清miR-134-5p水平與miR-181a-5p相關性分析

3.血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平與惡性肺結節臨床病理特征相關性:以惡性組肺結節病人血清miR-134-5p平均值0.73為臨界值將惡性肺結節病人血清miR-134-5p水平分為高水平和低水平,分別為32例和30例;以惡性組肺結節病人血清miR-181a-5p水平平均值0.97為臨界值將惡性肺結節病人血清miR-181a-5p水平分為高水平和低水平,分別31例和31例。血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平與病人淋巴結是否轉移、結節直徑相關(P<0.05);血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平與病人性別、癥狀、組織學類型、肺部位置無關(P>0.05)。見表3。

表3 血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平與惡性肺結節臨床病理特征相關性(例,%)

4.肺結節惡性因素多因素Logistic回歸分析:以肺結節是否為惡性(是=1,否=0)作為因變量,以血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平、結節直徑為自變量進行多因素Logistic回歸分析。結果顯示,高水平miR-134-5p、miR-181a-5p為病人肺結節為惡性的獨立保護因素(P<0.05);結節直徑為病人肺結節為惡性的獨立危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 肺結節惡性影響因素Logistic回歸分析

5.血清miR-134-5p、miR-181a-5p在鑒別良惡性肺結節中的價值:以血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平為檢驗變量,以肺結節是否為惡性肺結節為狀態變量(是=1,否=0)繪制ROC曲線,結果見圖2、表5。血清miR-134-5p、miR-181a-5p聯合鑒別肺結節良惡性的效能均優于兩者單獨鑒別,差異有統計學意義(P<0.05)。

圖2 血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平鑒別良惡性肺結節的ROC曲線

表5 血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平在鑒別良惡性肺結節中的效能分析

討論

如何通過無創的方式實現對良惡性肺結節綜合評估是目前臨床研究趨勢,確定這些肺結節的性質對于病人治療計劃的制定具有重要意義。本研究發現,惡性組肺結節病人結節直徑較良性結節直徑顯著增大,且結節直徑較大為病人肺結節為惡性的獨立危險因素,提示肺結節性質與其直徑大小具有一定相關性。

miRNA可在生理或病理條件下由正常細胞分泌到體液中,也可以由凋亡和壞死細胞分泌到體液中。miR-134-5p與抑制癌細胞生長、侵襲和遷移有關,其表達在腎癌、結直腸癌和肝癌等已被證實[7]。miR-134-5p過表達能夠減少SGC7901細胞的增殖、集落形成和侵襲[8]。miR-134-5p的表達在非小細胞肺癌中顯著下調,且與非小細胞肺癌進展呈負相關[9]。本研究發現,惡性組肺結節病人血清miR-134-5p水平顯著降低,與饒德新等[9]研究結果一致。

miR-181a-5p作為一種功能性miRNA,已經在包括肺癌在內多種癌癥類型中進行研究,且miR-181a-5p是炎癥蛋白的關鍵上游調節因子,具有抗炎活性[10]。miR-181a-5p在非小細胞肺癌細胞中的表達降低,miR-181a-5p過表達可阻止非小細胞肺癌細胞增殖、遷移和侵襲[11]。miR-181a-5p通過靶向STAT3信號傳導緩解克雷伯菌肺炎感染引起的肺損傷[12]。miR-181a-5p在肺癌組織和細胞系中表達顯著降低,過表達miR-181a-5p的肺腺癌細胞可顯著抑制肺腺癌細胞系A549的增殖和遷移[13]。本研究發現,惡性組肺結節病人血清miR-181a-5p水平顯著降低,與Wang等[13]研究結果一致。本研究還顯示,血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平與病人淋巴結是否轉移、結節直徑相關,低水平miR-134-5p、miR-181a-5p病人淋巴結轉移概率更高、結節直徑更大,提示低水平miR-134-5p、miR-181a-5p與肺結節病人惡性發展具有一定相關性。高水平miR-134-5p、miR-181a-5p均為病人肺結節為惡性的獨立保護因素,且肺結節病人血清miR-134-5p水平與miR-181a-5p呈正相關,推測miR-134-5p、miR-181a-5兩者在肺結節的發展中具有協同作用,抑制肺結節的惡性發展。進一步ROC分析顯示,血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平鑒別病人肺結節為良惡性的AUC分別為0.867、0.868,兩者聯合鑒別的AUC為0.931,均優于兩者單獨鑒別,提示miR-134-5p、miR-181a-5p聯合在鑒別良惡性肺結節中具有一定潛在價值。

綜上所述,惡性肺結節病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平較良性病人均顯著降低,兩者聯合檢測對良惡性肺結節的鑒別具有重要價值。本研究樣本數量有限,后續本研究將繼續擴大樣本量并納入健康樣本作為對照組,進一步分析二者水平變化,并深入探究病人結節中miR-134-5p、miR-181a-5p水平變化及其潛在的作用機制。