綿羊支原體HSP70的原核表達及抗體間接ELISA檢測方法的建立

李祥龍,章志濤,孔令麗,羅雨昕,秦澤亮,王冬英,3*

(1.廣西大學 動物科學技術學院,廣西南寧 530004;2.廣西水產畜牧業協會,廣西南寧 530022;3.廣西壯族自治區獸用生物制品工程研究中心,廣西南寧 530004)

嗜血支原體(HemotropicMycoplasma)是一類寄生于宿主紅細胞表面、血漿及骨髓、具有多種形態、無細胞壁的支原體,最早命名為附紅細胞體,分類為原生動物,后來將其分類為嗜血支原體屬[1]。嗜血支原體可引起貧血、高熱、黃疸、消瘦和流產等臨床癥狀,主要感染羊、牛、豬和鹿等動物及人[2]。羊嗜血支原體病呈世界性分布,主要經吸血節肢動物傳播[3],在我國,多數省份均有過綿羊支原體的報道,其中內蒙古自治區[4]、云南省[1]和遼寧省[5]的羊感染率較高。綿羊支原體不僅對養殖業危害巨大,且已被證實可感染人[6],該病的檢出具有十分重要的意義。

ELISA方法因具有成本低廉、操作簡便等特點,常用于規模養殖場的群體檢測。HSP70蛋白是熱休克蛋白家族中最保守的一類,具有抗原提呈作用,在多種支原體中可誘導和增強機體體液免疫和細胞免疫的發生,這為其成為診斷抗原提供了理論依據[7]。

本研究旨在表達綿羊支原體的HSP70蛋白,建立一種特異性強、靈敏性高的綿羊支原體ELISA檢測方法,為綿羊支原體的監測、診斷及試劑盒的開發提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株與質粒 pET-28a(+)載體,Takara公司產品;DH5α感受態細胞、BL21(DE3)感受態細胞,南京諾唯贊生物科技股份有限公司產品。

1.1.2 血清樣品 30頭山羊全血及血清采自廣西壯族自治……