小反芻獸疫病毒競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)方法的建立

許 芳,蔡 杰,薛華平,羅 均,蔣永青*,郭霄峰*

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,廣東廣州 510642;2.深圳市綠詩(shī)源生物技術(shù)有限公司,廣東深圳 518120)

小反芻獸疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由PPRV感染反芻動(dòng)物引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病,主要感染山羊和綿羊,具有高發(fā)病率和致死率[1]。該病目前主要流行于撒哈拉以南的非洲、中東地區(qū)和印度次大陸,由于PPR的高致死率(70%～80%)[2-4],世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(WOAH)將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病,也是全球計(jì)劃根除的動(dòng)物疫病[5]。我國(guó)于2007年7月在西藏阿里首次發(fā)現(xiàn)了該病的疫情[6],因其具有極高的發(fā)病率和致死率,2022年我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部修定的《一、二、三類動(dòng)物疫病病種名錄》仍將其列為一類動(dòng)物疫病。小反芻獸疫在流行國(guó)家和地區(qū)對(duì)當(dāng)?shù)匦竽翗I(yè)造成了毀滅性的打擊,造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[7],因此建立小反芻獸疫快速診斷方法是非常必要的。

小反芻獸疫病毒為單股負(fù)鏈RNA病毒,在病毒基因組上依次分布著6個(gè)編碼基因 N、P、M、F、H、L,分別編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白(N、P、M、F、H、L 蛋白)及2種非結(jié)構(gòu)蛋白(C、V 蛋白)[8]。其中,核衣殼(N)蛋白相對(duì)保守,是病毒的核衣殼的主要組成成分,是最為豐富的蛋白,能夠保護(hù)病毒基因組免受核糖核酸酶Ⅰ的降解,與P蛋白共同參與病毒基因組的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。N蛋白具有較強(qiáng)的免疫反應(yīng)原性,能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答,在PPRV陽(yáng)性血清中針對(duì)N蛋白的抗體占主導(dǎo)地位,常作為診斷抗原,用于診斷研究[9]。目前,PPRV抗體檢測(cè)方法主要有血清中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、免疫層析等,血清中和試驗(yàn)是國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的抗體測(cè)定方法,但中和試驗(yàn)因其操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)、對(duì)人員和實(shí)驗(yàn)室要求均較高等缺點(diǎn),不適于基層全面推廣。……