超高效液相色譜串聯質譜法測定雞蛋中金剛烷胺和氟蟲腈的含量

◎ 劉 璐，毛 震，崔倩倩，朱欣欣，賈松濤，趙林萍

（河南中標檢測服務有限公司，河南 鄭州 450001)

金剛烷胺是一種廉價、高效的抗病毒藥物，曾用于禽流感的防治，但是過量使用金剛烷胺會對環境和人體產生嚴重危害[1]。氟蟲腈是一種廣譜殺蟲劑，曾在國內被廣泛使用，但氟蟲腈會通過生物鏈富集最終對人體健康產生威脅[2]。金剛烷胺和氟蟲腈的常用檢測方法有液相色譜法、液相色譜串聯質譜法、酶聯免疫法和免疫層析法等[2-3]。本文采用超高效液相色譜串聯質譜法檢測雞蛋中的金剛烷胺和氟蟲腈的含量，研究出同時提取雞蛋中金剛烷胺和氟蟲腈的前處理方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 樣品

雞蛋，絞碎并均質，-18 ℃保存。

1.1.2 試劑

乙腈（色譜級）、氯化鈉（分析純）、無水硫酸鈉（分析純）、金剛烷胺標準物質（Dr.Ehrenstorfer GmbH）、金剛烷胺-D6（上海安譜璀世標準技術服務有限公司）和4 種氟蟲腈及其代謝物混標溶液（100 μg·mL-1，Fint Standard）。

1.1.3 儀器

TSQ vanquish 超高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜儀：配有電噴霧離子源；天平：感量為0.01 g 和0.000 01 g；渦旋混合器；振蕩器；離心機；QuEChERS凈化管（COQ01002 型，深圳逗點生物科技有限公司）；0.22 μm 微孔有機相濾膜。

1.2 實驗方法

1.2.1 溶液的配制

（1）金剛烷胺標準儲備液（100 μg·mL-1）。精密稱取10 mg 標準物質用乙腈溶解并定容至100 mL，-18 ℃保存。

（2）金剛烷胺內標工作液（1 μg·mL-1）。精密量取100 μg·mL-1的金剛烷胺標準儲備液100 μL 用乙腈溶解并定容至10 mL，-18 ℃保存。

（3）混合標準工作液（1 μg·mL-1）。準確吸取100 μL 金剛烷胺標準儲備液（100 μg·mL-1）和4 種氟蟲腈及其代謝物混標溶液（100 μg·mL-1）用乙腈溶解并定容至10 mL，-18 ℃保存。

（4）標準溶液的配制。吸取混合標準工作液0.02 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL和2.00 mL 于100 mL 容量瓶中，再分別加入金剛烷胺內標工作液0.50 mL，用乙腈定容，配制成濃度為0.20 ng·mL-1、0.50 ng·mL-1、1.00 ng·mL-1、2.00 ng·mL-1、5.00 ng·mL-1、10.00 ng·mL-1和20.00 ng·mL-1的系列標準溶液，含內標濃度為5.00 ng·mL-1，供液相色譜-串聯質譜儀測定。

1.2.2 測定步驟

①提取。稱取樣品5.00 g（精確到0.01 g）于50 mL離心管中，加入100 μL內標工作液，渦旋1 min，加入20 mL乙腈，2 g 氯化鈉，6 g 無水硫酸鈉，振蕩10 min，8 000 r·min-1離心5 min，取上清液，備用[4-6]。②凈化。取1 mL 備用液，加入QuEChERS 凈化管，渦旋混勻1 min，8 000 r·min-1離心3 min，取上清液，過0.22 μm微孔濾膜，供液相色譜-串聯質譜儀測定。將試樣溶液注入儀器中，以保留時間和離子豐度比雙重定性，以金剛烷胺與金剛烷胺-D6峰面積的比值帶入標準曲線定量，以氟蟲腈峰面積帶入標準曲線定量。

1.3 儀器條件

1.3.1 色譜條件

（1）金剛烷胺色譜條件。色譜柱：BEH C18柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；流動相：0.1%甲酸水溶液（A）+0.1%甲酸甲醇溶液（B）；梯度洗脫：0 ～0.50 min，80%A+20%B；1.25 ～3.25 min，15%A+85%B；4.00 ～5.00 min，80%A+20%B；流速：0.2 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進樣量：2 μL。

（2）氟蟲腈色譜條件。色譜柱：BEH C18柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；流動相：水（A）+乙腈（B）；梯度洗脫：0 ～0.5 min，80%A+20%B；1.0 ～3.0 min，5%A+95%B；3.5 ～5.0 min，80%A+20%B；流速：0.25 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進樣量：2 μL。

1.3.2 質譜條件

電噴霧離子源，金剛烷胺為正離子掃描，氟蟲腈為負離子掃描，多反應監測方式；毛細管溫度：350 ℃；噴霧器溫度：350 ℃；鞘氣壓力：40 Arb；輔助氣壓力：15 Arb；噴霧電壓：3 500 V；監測離子對、碰撞氣能量和去簇電壓參數見表1。

表1 待測物定性離子對，定量離子對、碰撞能量、錐孔電壓參數表

2 結果與分析

2.1 質譜條件的優化

質譜條件優化了待測物及對應內標物，提高了靈敏度，得到了最優離子對以及碰撞能（見表1）和離子色譜圖（見圖1）。

圖1 金剛烷胺離子對、氟蟲腈、金剛烷胺-D6 離子對色譜圖

2.2 標準曲線和檢出限

在1.3.2 質譜條件下測定，結果表明金剛烷胺、氟蟲腈在0.20 ～20.00 ng·mL-1有良好的線性關系。相關系數R均大于0.999 0。本方法的金剛烷胺定量限為2 μg·kg-1；氟蟲腈定量限為5 μg·kg-1。金剛烷胺、氟蟲腈線性方程和相關系數見表2。

表2 金剛烷胺和氟蟲腈的線性方程和相關系數表

2.3 回收率以及精密度實驗

準確稱取空白雞蛋樣品，加入混合中間工作液，分別添加濃度水平為2 μg·kg-1、5 μg·kg-1、20 μg·kg-1的金剛烷胺、氟蟲腈溶液，進行6 次平行實驗，計算加標回收率和精密度。由表3 可知，樣品回收率在85.0%～103.3%，精密度在1.6%～8.9%。

表3 精密度和加標回收率結果表

3 結論

本研究建立了一種超高效液相色譜串聯質譜法測定雞蛋中金剛烷胺和氟蟲腈的方法。通過試驗優化統一前處理過程，經檢測樣品回收率在85.0%～103.3%，精密度在1.6%～8.9%，結果準確，靈敏度高，此方法更適合于實驗室日常檢測。