超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞蛋中金剛烷胺和氟蟲(chóng)腈的含量

◎ 劉 璐，毛 震，崔倩倩，朱欣欣，賈松濤，趙林萍

（河南中標(biāo)檢測(cè)服務(wù)有限公司，河南 鄭州 450001)

金剛烷胺是一種廉價(jià)、高效的抗病毒藥物，曾用于禽流感的防治，但是過(guò)量使用金剛烷胺會(huì)對(duì)環(huán)境和人體產(chǎn)生嚴(yán)重危害[1]。氟蟲(chóng)腈是一種廣譜殺蟲(chóng)劑，曾在國(guó)內(nèi)被廣泛使用，但氟蟲(chóng)腈會(huì)通過(guò)生物鏈富集最終對(duì)人體健康產(chǎn)生威脅[2]。金剛烷胺和氟蟲(chóng)腈的常用檢測(cè)方法有液相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫法和免疫層析法等[2-3]。本文采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)雞蛋中的金剛烷胺和氟蟲(chóng)腈的含量，研究出同時(shí)提取雞蛋中金剛烷胺和氟蟲(chóng)腈的前處理方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 樣品

雞蛋，絞碎并均質(zhì)，-18 ℃保存。

1.1.2 試劑

乙腈（色譜級(jí)）、氯化鈉（分析純）、無(wú)水硫酸鈉（分析純）、金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（Dr.Ehrenstorfer GmbH）、金剛烷胺-D6（上海安譜璀世標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司）和4 種氟蟲(chóng)腈及其代謝物混標(biāo)溶液（100 μg·mL-1，F(xiàn)int Standard）。

1.1.3 儀器

TSQ vanquish 超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源；天平：感量為0.01 g 和0.000 01 g；渦旋混合器；振蕩器；離心機(jī)；QuEChERS凈化管（COQ01002 型，深圳逗點(diǎn)生物科技有限公司）；0.22 μm 微孔有機(jī)相濾膜。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶液的配制

（1）金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 μg·mL-1）。精密稱取10 mg 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用乙腈溶解并定容至100 mL，-18 ℃保存。

（2）金剛烷胺內(nèi)標(biāo)工作液（1 μg·mL-1）。精密量取100 μg·mL-1的金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液100 μL 用乙腈溶解并定容至10 mL，-18 ℃保存。

（3）混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（1 μg·mL-1）。準(zhǔn)確吸取100 μL 金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 μg·mL-1）和4 種氟蟲(chóng)腈及其代謝物混標(biāo)溶液（100 μg·mL-1）用乙腈溶解并定容至10 mL，-18 ℃保存。

（4）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。吸取混合標(biāo)準(zhǔn)工作液0.02 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL和2.00 mL 于100 mL 容量瓶中，再分別加入金剛烷胺內(nèi)標(biāo)工作液0.50 mL，用乙腈定容，配制成濃度為0.20 ng·mL-1、0.50 ng·mL-1、1.00 ng·mL-1、2.00 ng·mL-1、5.00 ng·mL-1、10.00 ng·mL-1和20.00 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，含內(nèi)標(biāo)濃度為5.00 ng·mL-1，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.2.2 測(cè)定步驟

①提取。稱取樣品5.00 g（精確到0.01 g）于50 mL離心管中，加入100 μL內(nèi)標(biāo)工作液，渦旋1 min，加入20 mL乙腈，2 g 氯化鈉，6 g 無(wú)水硫酸鈉，振蕩10 min，8 000 r·min-1離心5 min，取上清液，備用[4-6]。②凈化。取1 mL 備用液，加入QuEChERS 凈化管，渦旋混勻1 min，8 000 r·min-1離心3 min，取上清液，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。將試樣溶液注入儀器中，以保留時(shí)間和離子豐度比雙重定性，以金剛烷胺與金剛烷胺-D6峰面積的比值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，以氟蟲(chóng)腈峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。

1.3 儀器條件

1.3.1 色譜條件

（1）金剛烷胺色譜條件。色譜柱：BEH C18柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液（A）+0.1%甲酸甲醇溶液（B）；梯度洗脫：0 ～0.50 min，80%A+20%B；1.25 ～3.25 min，15%A+85%B；4.00 ～5.00 min，80%A+20%B；流速：0.2 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：2 μL。

（2）氟蟲(chóng)腈色譜條件。色譜柱：BEH C18柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相：水（A）+乙腈（B）；梯度洗脫：0 ～0.5 min，80%A+20%B；1.0 ～3.0 min，5%A+95%B；3.5 ～5.0 min，80%A+20%B；流速：0.25 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：2 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源，金剛烷胺為正離子掃描，氟蟲(chóng)腈為負(fù)離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式；毛細(xì)管溫度：350 ℃；噴霧器溫度：350 ℃；鞘氣壓力：40 Arb；輔助氣壓力：15 Arb；噴霧電壓：3 500 V；監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰撞氣能量和去簇電壓參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 待測(cè)物定性離子對(duì)，定量離子對(duì)、碰撞能量、錐孔電壓參數(shù)表

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

質(zhì)譜條件優(yōu)化了待測(cè)物及對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)物，提高了靈敏度，得到了最優(yōu)離子對(duì)以及碰撞能（見(jiàn)表1）和離子色譜圖（見(jiàn)圖1）。

圖1 金剛烷胺離子對(duì)、氟蟲(chóng)腈、金剛烷胺-D6 離子對(duì)色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

在1.3.2 質(zhì)譜條件下測(cè)定，結(jié)果表明金剛烷胺、氟蟲(chóng)腈在0.20 ～20.00 ng·mL-1有良好的線性關(guān)系。相關(guān)系數(shù)R均大于0.999 0。本方法的金剛烷胺定量限為2 μg·kg-1；氟蟲(chóng)腈定量限為5 μg·kg-1。金剛烷胺、氟蟲(chóng)腈線性方程和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。

表2 金剛烷胺和氟蟲(chóng)腈的線性方程和相關(guān)系數(shù)表

2.3 回收率以及精密度實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取空白雞蛋樣品，加入混合中間工作液，分別添加濃度水平為2 μg·kg-1、5 μg·kg-1、20 μg·kg-1的金剛烷胺、氟蟲(chóng)腈溶液，進(jìn)行6 次平行實(shí)驗(yàn)，計(jì)算加標(biāo)回收率和精密度。由表3 可知，樣品回收率在85.0%～103.3%，精密度在1.6%～8.9%。

表3 精密度和加標(biāo)回收率結(jié)果表

3 結(jié)論

本研究建立了一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞蛋中金剛烷胺和氟蟲(chóng)腈的方法。通過(guò)試驗(yàn)優(yōu)化統(tǒng)一前處理過(guò)程，經(jīng)檢測(cè)樣品回收率在85.0%～103.3%，精密度在1.6%～8.9%，結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，此方法更適合于實(shí)驗(yàn)室日常檢測(cè)。