氣相色譜法測定醫用膠中α-氰基丙烯酸正丁酯和檸檬酸三乙酯的含量

＊梅煒華 吳小紅 汪家升 董芳芳

（浙江伽奈維醫療科技有限公司 浙江 310000）

α-氰基丙烯酸酯粘合劑是目前應用最廣泛的醫用膠粘合劑之一，這類粘合劑的開發、研究備受矚目，發展非常迅速，主要用于迅速止血、組織及器官等局部部位的粘結及栓塞等，解決了一些傳統方法無法達到的預期效果的問題，與其他粘合劑相比，其單組分、無溶劑、聚合速度快、粘結強度大、毒性小及良好的生物相容性等優良特性，已經成為臨床應用的良好醫學材料[1]。檸檬酸三乙酯是膠粘劑較為常用的增塑劑，在醫用膠中加入適宜的增塑劑可以明顯地改善其柔韌性，使膜性能由彎曲易折斷改善為耐彎折無硬物，使用中放熱不明顯，達到醫用要求。

國家食品藥品監督管理總局發布的2016年第6號《α-氰基丙烯酸酯類醫用粘合劑注冊 技術審查指導原則》[2]中明確對產品主體成分含量要求質量控制；目前尚未制定對該類產品的國家標準或行業標準，并且相關文獻資料也相對匱乏。其中，氣相色譜-質譜法測定醫用膠a-氰基丙烯酸正丁酯的含量[3]，CN113447587A是一種氰基丙烯酸酯類化合物的純度測定方法[4]，氰基丙烯酸甲氧基乙酯中微量雜質的毛細管氣相色譜分析[5]，毛細管氣相色譜法測定檸檬酸三乙酯含量[6]，以上幾篇文獻單個成分檢測有相應的介紹但并不完善。本方法主要針對α-氰基丙烯酸正丁酯及其增塑劑檸檬酸三乙酯兩種成分在同一條件下進行檢測，經過方法學驗證確保準確性。

1.實驗部分

(1)儀器與試劑

8860型氣相色譜儀，配備氫火焰離子化檢測器，美國安捷倫科技公司；色譜柱：HP-5（30m×0.32mm×0.25μm），美國安捷倫科技公司；ME204E分析天平，梅特勒-托利多公司。

α-氰基丙烯酸正丁酯標準品（上海甄準生物科技有限公司）；檸檬酸三乙酯對照品（中國食品藥品檢定研究院）；丙酮（色譜純，國藥集團化學試劑有限公司）。

(2)色譜條件

色譜柱為HP-5（30m×0.32mm×0.25μm），程序升溫：初始溫度100℃保持2min，以10℃/min的速率升溫至180℃，保持3min；進樣口溫度：230℃；檢測室溫度：250℃；柱流速：2mL/min；進樣量：1.0μL，分流比30:1。

(3)實驗方法

空白溶液配制：用移液槍移取1mL丙酮，置于進樣小瓶中，密封，作為空白溶液。

標準曲線配制：分別量取適量氰基丙烯酸正丁酯對照品用丙酮定容至10mL得到10mg/mL氰基丙烯酸正丁酯中間液和適量檸檬酸三乙酯對照品用丙酮定容至10mL得到10mg/mL檸檬酸三乙酯中間液，再取5mL氰基丙烯酸正丁酯中間液和1mL檸檬酸三乙酯中間液用丙酮定容至配制成5mg/mL的氰基丙烯酸正丁酯和1mg/mL檸檬酸三乙酯溶液，作為標準儲備液。

分別移取上述標準儲備液0.2mL、0.5mL、0.8mL、1.0mL和1.2mL，用丙酮定容至10mL，配制成含α-氰基丙烯酸正丁酯0.1mg/mL、0.25mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL和檸檬酸三乙酯0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.08mg/mL、0.10mg/mL、0.12mg/mL的標準溶液混合溶液。

2.結果與討論

(1)定性分析

溶劑丙酮的出峰位置不影響α-氰基丙烯酸正丁酯和檸檬酸三乙酯的定性和定量，如圖1所示。

圖1 丙酮與α-氰基丙烯酸正丁酯、檸檬酸三乙酯的色譜圖

(2)精密度與系統適用性

配制6份含α-氰基丙烯酸正丁酯0.6mg/mL和檸檬酸三乙酯0.12mg/mL的供試品溶液，由一個分析人員在相同的條件下進行測試，所得6份供試液的含量在＞100.0μg/mL，100～1000μg/mL時，物質的相對標準差（RSD）應不大于3.0%。α-氰基丙烯酸正丁酯、檸檬酸三乙酯精密度與系統適用性試驗結果，如表1所示。

表1 精密度與系統適用性試驗結果

(3)線性

線性系指在設計的范圍內，線性試驗結果與試樣中被測物濃度直接呈比例關系的能力。可用同一對照品儲備液經精密稀釋或分別精密稱取對照品，制備一系列對照品溶液的方法進行測定，至少制備5個不同濃度水平。以含量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸分析。α-氰基丙烯酸正丁酯、檸檬酸三乙酯各自所得線性方程，如表2所示，線性關系圖見圖2、圖3。

表2 兩種物質的線性方程

圖2 α-氰基丙烯酸正丁酯線性圖

圖3 檸檬酸三乙酯線性圖

(4)準確度

分別配制含α-氰基丙烯酸正丁酯0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL；檸檬酸三乙酯0.04mg/mL、0.08 mg/mL、0.10mg/mL的供試品溶液各三份，分別測定其含量。含量＞10.0μg/mL，≤100μg/mL的物質的相對標準差（RSD）應不大于4.0%；含量＞100.0μg/mL，≤1000μg/mL的物質的相對標準差（RSD）應不大于3.0%。α-氰基丙烯酸正丁酯、檸檬酸三乙酯加標回收率試驗結果，如表3所示。

表3 加標回收率試驗結果

(5)定量限

主峰與噪音峰信號的強度比應不得小于10。所測6份溶液濃度＞1μg/mL，≤10μg/mL時物質的含量相對標準差（RSD）應不大于6.0%，所測6份溶液主峰的保留時間相對標準差（RSD）應不大于2.0%。α-氰基丙烯酸正丁酯定量限試驗結果，如表4所示。

表4 定量限試驗結果

(6)檢出限

主峰與噪音峰信號的強度比不得小于3。α-氰基丙烯酸正丁酯的最小檢出量為0.4μg/mL；檸檬酸三乙酯最小檢出量為1.0μg/mL。

3.討論

醫用膠屬于生物醫學特殊功能性膠粘劑，在我國作為Ⅲ類醫療器械管理。然而，由于目前國內缺乏針對這類產品的國家標準或行業標準，企業在注冊產品時無依據可循，因此難以有效控制產品質量。一方面，α-氰基丙烯酸正丁酯本身較高黏度，樣品濃度應適宜。當樣品濃度過高時（20mg/mL），進樣針易堵塞，且目標物峰拖現象較為明顯。通過降低樣品濃度至5mg/mL，并調高分流比，可以有效改善拖尾現象，但同時易產生殘留物質，在多次進樣后會導致目標峰濃度偏高。最終將樣品濃度降至0.5mg/mL時，重復進樣不會使目標物濃度增加，因此該濃度下的進樣效果更佳。另一方面，α-氰基丙烯酸正丁酯遇水極易固化，因此，在配制時需注意環境保持干燥，以免樣品長時間暴露在空氣中吸收水分并引起聚合現象。同時，在現有的α-氰基丙烯酸正丁酯檢測方法的基礎上，對檸檬酸三乙酯的檢測方法進行優化驗證。結果表明，在該條件下，兩種物質均能夠良好地響應。

4.結論

實驗結果表明，該方法適用于醫用膠中α-氰基丙烯酸正丁酯和檸檬酸三乙酯的含量檢測。該方法簡單易行，結果準確可靠，重現性良好，為醫用膠中α-氰基丙烯酸正丁酯和檸檬酸三乙酯的含量測定及生產監控提供了有力支持。