銅綠假單胞菌對肺血管內皮細胞功能的影響及其機制

張雷 王俊軼 何翔 吳敏 李國平 黃錦偉

基金項目：國家自然科學基金（81970026、82000029、82200079）、四川省自然科學基金（2022NSFSC1324）、成都市高水平臨床重點專科建設項目（ZX20201202020）和澳門科學技術發展基金（0124/2022/A）

摘要：目的? 探究銅綠假單胞菌（PA）感染對肺血管內皮細胞功能的影響，并探討其加重小鼠肺部炎癥反應的可能機制。方法? PAO1菌株感染人肺微血管內皮細胞HULEC-5a 2 h后，采用逆轉錄實時熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測自噬相關基因5（ATG5）、6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2，6-二磷酸酶3（PFKFB3）和鈣黏蛋白5（CDH5）的mRNA表達，免疫熒光檢測ATG5、PFKFB3和血管內皮鈣黏蛋白（VE-cadherin）的蛋白表達。采用小干擾RNA（siRNA）分別敲減ATG5、PFKFB3后，RT-qPCR檢測ATG5、PFKFB3和CDH5的mRNA表達，免疫熒光檢測PFKFB3和VE-cadherin的蛋白表達，并采用乳酸測定試劑盒檢測細胞內乳酸的水平。采用PAO1菌株感染小鼠后，肺組織切片病理染色觀察小鼠肺部炎癥，激光共聚焦顯微鏡觀察并分析熒光標記的內皮細胞PFKFB3和VE-cadherin的表達量。結果? 與對照組比較，PAO1感染HULEC-5a細胞后，PFKFB3 mRNA和蛋白表達均增加（P均<0.05），CDH5 mRNA表達減少（P=0.023），VE-cadherin蛋白表達減少（P<0.001），且連續性被破壞，乳酸含量升高（P=0.017）。與PAO1感染HULEC-5a細胞比較，PAO1感染敲減PFKFB3的HULEC-5a細胞后，CDH5 mRNA表達增加（P=0.043），VE-cadherin熒光連續性得到恢復，乳酸含量降低（P=0.047）；PAO1感染敲減ATG5的HULEC-5a細胞后，PFKFB3 mRNA（P=0.013）和蛋白表達（P=0.003）均增加，CDH5 mRNA（P=0.020）和VE-cadherin蛋白表達（P=0.001）均減少，乳酸含量升高（P=0.015）。PAO1感染小鼠后，病理HE染色結果顯示，肺泡內明顯的紅細胞滲漏，炎癥細胞浸潤，肺泡間隔增寬和部分血管內皮細胞脫落。免疫熒光染色結果顯示，與正常小鼠比較，PAO1感染小鼠內皮細胞PFKFB3表達增加，VE-cadherin熒光減弱，且不連續。結論? PA可能通過AGT5調控PFKFB3通路，破壞肺血管內皮細胞功能，進而加重小鼠肺部炎癥反應。

關鍵詞：銅綠假單胞菌；肺血管內皮細胞；6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2，6-二磷酸酶3；自噬相關基因5；感染

中圖分類號： R378.99+1；R563.1+9? 文獻標識碼： A? 文章編號：1000-503X（2024）01-0001-10

DOI：10.3881/j.issn.1000-503X.15831

Pseudomonas Aeruginosa Affects the Function of Pulmonary Vascular Endothelial Cells

ZHANG Lei1，2，3，WANG Junyi1，2，3，HE Xiang2，WU Min3，4，LI Guoping1，2，Vincent Kam Wai Wong1

1State Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine，Macau University of Science and Technology，Macao 999078，China

2Allergy and Precision Medicine Laboratory，Respiratory Health Research Institute，The Third People‘s Hospital of Chengdu，Chengdu 610000，China

3Department of Biomedical Sciences，School of Medicine and Health Sciences，University of North Dakota，Grand Forks，North Dakota 58203，USA

4Wenzhou Institute of University of Chinese Academy of Sciences，Wenzhou，Zhejiang 325000，China

Corresponding author：Vincent Kam Wai Wong? Tel：853-88972408，E-mail：kawwong@must.edu.mo

ABSTRACT：Objective? To investigate the impact of Pseudomonas aeruginosa（PA） infection on the function of pulmonary vascular endothelial cells，and explore the mechanism of this bacterium in exacerbating lung inflammation in mice.Methods? Two hours after human lung microvascular endothelial cell（HULEC-5a） were infected with the PA strain PAO1，the mRNA levels of autophagy-related gene 5（ATG5），6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2，6-bisphosphatase 3（PFKFB3），and calcium adhesion protein 5（CDH5） were determined by reverse transcription real-time fluorescent quantitative PCR（RT-qPCR）.The protein levels of ATG5，PFKFB3，and vascular endothelial calcium adhesion protein（VE-cadherin） were detected by immunofluorescence.After the expression of ATG5 and PFKFB3 was respectively knocked down by small interfering RNA（siRNA），RT-qPCR was employed to measure the mRNA levels of ATG5，PFKFB3，and CDH5，and immunofluorescence to detect the protein levels of PFKFB3 and VE-cadherin.In addition，the lactate assay kit was used to determine the level of lactate in the cells.After mice were infected with PAO1，lung inflammation was assessed through histopathological section staining.Confocal microscopy was employed to capture and analyze fluorescence-labeled PFKFB3 and VE-cadherin in endothelial cells.Results? Compared with the control group，the HULEC-5a cells infected with PAO1 showed up-regulated mRNA and protein levels of PFKFB3（all P<0.05），down-regulated mRNA level of CDH5（P=0.023），disrupted continuity and down-regulated protein level of VE-cadherin（P<0.001），and elevated lactate level（P=0.017）.Compared with PAO1-infected HULEC-5a cells，knocking down PFKFB3 led to the up-regulated mRNA level of CDH5（P=0.043），lowered lactate level（P=0.047），and restored continuity of VE-cadherin；knocking down ATG5 led to up-regulated mRNA and protein levels of PFKFB3（P=0.013 and P=0.003），elevated lactate level（P=0.015），and down-regulated mRNA level of CDH5（P=0.020） and protein level of VE-cadherin（P=0.001）.The HE staining results showed obvious red blood cell leakage，inflammatory cell infiltration，alveolar septal widening，and partial detachment of vascular endothelial cells in the alveoli of PA-infected mice.Immunofluorescence staining showed up-regulated expression of PFKFB3 and decreased fluorescence signal of VE-cadherin in endothelial cells of infected mice compared with normal mice.Conclusion? PA may regulate the PFKFB3 pathway via AGT5 to disrupt the function of pulmonary vascular endothelial cells，thereby exacerbating the inflammation in the lungs of mice.

Key words：Pseudomonas aeruginosa；pulmonary vascular endothelial cell；6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2，6-biphosphatase 3；autophagy-related gene 5；infection

Acta Acad Med Sin，2024，46（1）：1-10

銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）是醫院內下呼吸道感染的常見病原菌，在我國醫院獲得性肺炎病原譜中，PA占16.9%～22.0%，僅次于鮑曼不動桿菌，是重癥肺炎、呼吸機相關性肺炎以及結構性肺病患者的重要致病菌［1］。PA致病機制復雜，且存在多種耐藥特性，其感染率居高不下。因此，PA是目前院內下呼吸道感染防治的重點和難點［2-3］。探討PA致病的分子機制和關鍵調控環節，尋找有效干預靶點，對于院內PA下呼吸道感染的預防和治療有重要意義。

肺血管內皮細胞是一種半滲透的生物力學屏障，也可以作為一種免疫反應細胞，根據環境條件產生抗炎、促炎和保護反應［4］。內皮細胞能調節血管張力，參與先天免疫及調節細胞與細胞的相互作用和血管壁的細胞代謝等重要生理和病理過程。最近研究認為肺血管內皮細胞是急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）炎癥風暴中心［5］。內皮細胞損傷會導致內皮下水腫，加重敗血癥引起的凝血異常［6］。一些針對內皮功能障礙的藥物可以有效治療心血管疾病和許多其他疾病，包括肺動脈高壓、ARDS和腫瘤等［7-8］。據文獻報道，PA的膜囊泡可導致內皮屏障損傷和肺衰竭，但具體機制不清［9］。探討PA感染對肺血管內皮細胞功能障礙的機制，有望為ARDS及膿毒血癥等感染性疾病的治療提供新的視角和方向。6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2，6-二磷酸酶3（6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2，6-biphosphatase 3，PFKFB3）作為糖酵解調節劑，能催化果糖-2，6-二磷酸（F-2，6-P2）的合成，其是糖酵解關鍵限速酶6-磷酸果糖-1-激酶最有效的變構激活劑［10］。PFKFB3在細胞代謝過程中具有重要的催化作用。在所有組織細胞中，PFKFB3在內皮細胞中表達最顯著。已有文獻報道PFKFB3介導巨噬細胞的糖酵解，通過影響巨噬細胞的積累和活化在小鼠肺動脈高壓的發展中發揮重要作用［11］。然而，關于PFKFB3在感染性疾病中對內皮細胞影響的研究較少。因此，本研究重點探究PA感染后PFKFB3在肺血管內皮細胞功能障礙中的作用及可能機制，為PA相關疾病的治療提供新的靶點。

1? 材料和方法

1.1? 材料

PA01菌株由美國馬薩諸塞州波士頓哈佛醫學院Lory S博士提供，北達科他大學醫學院Wu M博士實驗室保留。細菌在溶原性肉湯中生長，在37 ℃下振蕩培養至光密度值600在0.6～0.8之間。人肺微血管內皮細胞HULEC-5a購自美國ATCC細胞庫，逆轉錄試劑盒購自日本Takara公司，逆轉錄實時熒光定量PCR（reverse transcription quantitative real-time PCR，RT-qPCR）試劑盒購自美國Applied Biosystems公司，L-乳酸檢測試劑盒（貨號：ab65330）購自美國Abcam公司，PFKFB3購自美國Proteintech公司，自噬相關基因5（autophagy-related gene 5，ATG5）、血管內皮鈣黏蛋白（vascular endothelial cadherin，VE-cadherin）購自美國Cell Signaling公司，TRIzol試劑、Lipofectamine RNAiMAX轉染試劑、山羊抗兔Alexa FluorTM 488和594抗體購自美國Invitrogen公司，DAPI購自美國Thermo Fisher公司。激光共聚焦顯微鏡購自日本Olympus公司，CFX ConnectTM熒光定量PCR檢測系統購自美國Bio-Rad公司。

1.2? 實驗動物及分組

6～8周齡C57BL/6J雄性小鼠購自美國Jackson實驗室，飼養于美國北達科他大學實驗動物中心SPF級動物房。本研究經北達科他大學動物管理和使用委員會批準，并根據動物護理和機構指南進行規范操作。10只C57BL/6J小鼠隨機等分為PAO1處理的感染組（PA感染組）和PBS處理的對照組，適應性喂養1周后，用氯胺酮（80 mg/kg）和甲苯噻嗪（10 mg/kg）麻醉小鼠，PA組采用PBS稀釋的30 μL 3×107 CFU的PAO1經氣道滴注感染小鼠，對照組用等體積的PBS做相同處理，24 h后，小鼠經CO2麻醉脫頸處死，留取肺組織做后續實驗。

1.3? 細胞培養及處理

HULEC-5a細胞使用含10%胎牛血清、10 ng/mL表皮生長因子、1 μg/mL氫化可的松、10 mmol/L L-谷氨酰胺、1%鏈霉素和青霉素的MCDB131培養基，置于5% CO2、37 ℃恒溫恒濕細胞培養箱中培養。以2.5×105個/孔的密度均勻接種于6孔板中，分別用感染復數（multiplicity of infection，MOI）為10和20的PAO1感染HULEC-5a細胞2、4 h后，收集細胞進行后續實驗。

1.4? 細胞轉染

HULEC-5a細胞以2.5×105個/孔的密度均勻接種于6孔板中，培養12 h后，按照RNAiMAX轉染試劑商品說明書，用每孔30 pmol的小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）轉染細胞，6～8 h后更換培養基進行后續實驗。si-ATG5和si-PFKFB3均由美國Santa Cruz生物公司合成。

1.5? RT-qPCR實驗

采用TRIzol試劑提取細胞總RNA，按照TAKARA逆轉錄試劑盒說明書合成cDNA，并以cDNA為模板進行RT-qPCR。反應條件：95 ℃變性30 s，95 ℃變性5 s，60 ℃退火34 s，共40個循環。以β-actin為內參基因，采用2-ΔΔCt法計算PFKFB3、ATG5、CDH5的相對表達量。引物序列：ATG5上游引物5-GGACGAAACAGC-TTCTGAAT-3，下游引物5-GATGGGATTGCAAAATGACA-3；PFKFB3上游引物5-CCATGAAAGTCCGGAAGCAATG-3，下游引物5-GCTTTTGACATCTCTCAAGGCAG-3；CDH5上游引物5-TTGGAACCAGA-TGCACATTGAT-3，下游引物5-TCTTGCGACTCACG-CTTGAC-3；β-actin上游引物5-AAATCTGGCACCAC-ACCTTC-3，下游引物5-GGGGTGTTGAAGGTC-TCAAA-3。

1.6? 細胞免疫熒光染色

HULEC-5a細胞以1.0×105個/孔的密度均勻接種于24孔板中，PAO1感染處理后，4%多聚甲醛固定15 min，0.05% Tween 20透膜10 min，10%山羊血清室溫下封閉1 h，然后分別加入VE-cadherin抗體（1∶300）、PFKFB3抗體（1∶200）、ATG5（1∶200）4 ℃孵育過夜，加入二抗室溫孵育2 h，DAPI對細胞核進行染色，抗熒光淬滅劑封片后，采用激光共聚焦顯微鏡觀察，拍照記錄。

1.7? 乳酸含量檢測（熒光標定法）

在10 cm的細胞培養皿上接種1.0×106個HULEC-5a細胞，PAO1感染處理后，裂解細胞，4 ℃離心，用4 mol/L高氯酸和2 mol/L氫氧化鉀對上清液進行脫蛋白，按照L-乳酸檢測試劑盒（熒光標定法）說明書在96孔板上樣，在激發波長535 nm、吸收波長587 nm處檢測光密度值。每個實驗獨立重復3次，分析細胞內乳酸的含量。

1.8? 病理染色

小鼠處死后取部分右肺，4%多聚甲醛溶液固定48 h后，70%乙醇脫水，石蠟包埋，制備成4 μm厚度的切片，行HE染色，光學顯微鏡下觀察支氣管及血管周圍肺組織炎癥細胞浸潤，拍照記錄。根據支氣管周圍炎癥的嚴重程度進行評分：0分：正常；1分：僅有少量炎癥細胞；2分：1圈1個細胞層深的炎癥細胞；3分：1圈2～4個細胞層深的炎癥細胞；4分：1圈>4個細胞層深的炎癥細胞［12］。

1.9? 肺組織多重免疫熒光染色

小鼠肺組織冰凍切片室溫復溫后，0.05% Tween 20透膜10 min，10%山羊血清室溫孵育1 h封閉非特異性抗體，然后分別加入VE-cadherin抗體（1∶400）、PFKFB3抗體（1∶200）4 ℃孵育過夜，加入二抗室溫孵育2 h，DAPI染色，抗熒光淬滅劑封片后，置于激光共聚焦顯微鏡下觀察。

1.10? 統計學處理

采用Graphpad Prism 8.0.2軟件，對所有數據進行DAgostino-Pearson正態性檢驗，符合正態分布且方差齊的計量資料以均數±標準誤表示，兩獨立樣本比較采用t檢驗，多組間比較采用ANOVA單因素方差分析和Tukey-Kramer檢驗。雙側P<0.05為差異有統計學意義。

2? 結果

2.1? PAO1感染對HULEC-5a細胞PFKFB3表達量的影響

RT-qPCR結果顯示，與對照組比較，MOI值為10、20的PAO1處理2 h后，HULEC-5a細胞PFKFB3 mRNA表達顯著增加（P=0.025，P=0.008），處理4 h后PFKFB3 mRNA表達顯著增加（P=0.006，P=0.001）（圖1A）。采用PAO1（MOI=10）感染HULEC-5a細胞2 h后，免疫熒光染色結果顯示，PAO1組細胞PFKFB3蛋白熒光表達較對照組顯著增加（701.88±109.41比471.57±105.16，P<0.001）（圖1B）。

2.2? PAO1感染HULEC-5a細胞中PFKFB3對VE-cadherin表達的影響

免疫熒光染色結果顯示，PAO1組細胞VE-cadherin熒光表達顯著低于對照組（333.33±50.67比584.45±58.62，P<0.001），且熒光連續性被破壞（圖2A）。RT-qPCR結果顯示，與對照組比較，PAO1組細胞CDH5 mRNA表達顯著減少（0.62±0.10比1.00±0.10，P=0.016）；與PAO1組比較，si-PFKFB3+PAO1組細胞CDH5 mRNA表達增加（1.05±0.14比0.71±0.06，P=0.043）（圖2B）。多重免疫熒光染色結果顯示，si-PFKFB3+PAO1組細胞VE-cadherin熒光表達顯著高于PA01組（445.23±79.76比333.33±50.67，P<0.001）（圖2C），且熒光連續性部分恢復。

2.3? PAO1感染HULEC-5a細胞中ATG5對PFKFB3表達的影響

RT-qPCR結果顯示，與對照組比較，PAO1組細胞ATG5 mRNA表達減少（0.78±0.07比1.00±0.02，P=0.010）（圖3A）；與PAO1組比較，si-PFKFB3+PAO1組細胞PFKFB3 mRNA表達增加（7.46±0.43比5.01±0.39，P=0.013）（圖3B）。多重免疫熒光染色結果顯示，與對照組比較，PAO1組細胞PFKFB3綠色熒光表達增加，ATG5紅色熒光表達減少；si-PFKFB3+PAO1組細胞PFKFB3蛋白熒光表達顯著高于PAO1組（837.26±62.12比730.97±80.55，P=0.003）（圖3C）。

2.4? PAO1感染HULEC-5a細胞中ATG5介導PFKFB3對細胞乳酸代謝的影響

與對照組比較，PAO1組細胞內乳酸水平升高（2.70±0.41比1.72±0.11，P=0.017）；與PAO1組比較，si-PFKFB3+PAO1組細胞乳酸水平降低（2.01±0.07比2.70±0.41，P=0.047），si-ATG5+PAO1組細胞乳酸水平升高（3.06±0.03比2.22±0.35，P=0.015）。

2.5? PAO1感染HULEC-5a細胞中ATG5對VE-cadherin表達的影響

RT-qPCR結果顯示，si-ATG5+PAO1組細胞CDH5 mRNA表達較PAO1組減少（0.60±0.02比0.77±0.06，P=0.020）（圖4A）。多重免疫熒光染色結果顯示，si-ATG5+PAO1組細胞VE-cadherin蛋白紅色熒光表達顯著低于PAO1組（489.12±94.93比592.31±36.70，P=0.001）（圖4B、4C）。

2.6? PAO1感染小鼠對肺血管內皮細胞自噬和PFKFB3表達的影響

HE染色結果顯示，PA感染組小鼠肺組織可見大量炎性細胞浸潤，肺泡間隔增寬，肺泡壁結構破壞，肺泡壁及肺泡腔可見較多紅細胞，而對照組未見上述異常改變（圖5A）。炎癥評分結果顯示，與對照組比較，PA感染組炎癥評分明顯增高（3.85±0.25比0.75±0.19，P<0.001）（圖5B）。多重免疫熒光染色顯示，PA感染組小鼠肺血管內皮細胞VE-cadherin熒光較對照組減弱，且不連續；PFKFB3熒光較對照組明顯增強（圖5C）。

3? 討論

PA是一種革蘭氏陰性機會致病菌，由于處于生物膜狀態的PA能夠在低氧或其他惡劣的環境中存活，包括在潮濕的表面上繁殖，所以其可以廣泛存在于醫療設備中［13］，患有慢性阻塞性肺疾病、囊性纖維化、癌癥、燒傷、膿毒血癥和呼吸機相關性肺炎等免疫功能低下的患者容易發生急性或慢性PA感染。PA通過分泌多種毒力因子來適應宿主體內的不利環境，從而使宿主成功感染并致病，如脂多糖、外膜蛋白、鞭毛、菌毛和其他黏附素、6型分泌系統等。宿主的先天免疫系統通過多種機制來抵御細菌的感染，包括模式識別受體、質膜信號、細胞內酶和細胞因子/趨化因子參與的炎癥反應。同時，生物信息學、代謝組學、單細胞測序、納米顆粒、藥物篩選和噬菌體治療等新興技術，也已被用于對PA發病機制和宿主防御的研究中。然而，PA致病與宿主免疫應答之間的關系仍有待探究［14-15］。2023年中國細菌耐藥監測網（http：//www.chinets.com/）數據顯示，從臨床分離的致病菌株中，PA是繼大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌和鮑曼不動桿菌之后的第5種醫院感染病原體，占7.46%。截至2023年，對碳青霉烯類耐藥的PA檢出率為23.3%，對替卡西林/克拉維酸耐藥的PA檢出率為30.8%。因此，耐藥PA感染的治療面臨巨大挑戰［16-17］。探索PA的致病機制，確定PA潛在的藥物治療靶點，開發新的抗生素和有效疫苗，是當下科研人員和臨床醫生關注的焦點和亟待解決的科學問題。

內皮細胞是血管壁上的單層細胞，通過動態調節血管張力、血管生成、止血以及抗氧化、抗炎和抗血栓等，在維持多器官正常生理功能和穩態方面發揮著關鍵作用。血管內皮功能障礙表現為內皮依賴性血管舒張受損、慢性炎癥、白細胞黏附和過度滲透以及細胞衰老等。與內皮細胞的其他功能相比，內皮細胞代謝是一個相對較新的研究領域［18］。內皮細胞的主要能量來源是糖酵解。研究發現人臍靜脈內皮細胞中約80%的三磷酸腺苷是通過糖酵解途徑產生的［19］。在糖酵解過程中，85%的ATP是在PFKFB3催化下通過將葡萄糖轉化為乳酸產生的［20］。PFKFB3缺陷的內皮細胞中磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶水平較低，細胞內乳酸顯著降低［21］。血清中乳酸水平被認為是組織缺氧的標志物［22］。本研究結果發現，PA感染后PFKFB3調控的糖酵解代謝增加。

內皮細胞的代謝重編程和免疫防御功能存在關聯［23-24］。研究表明PFKFB3不僅調控感染后內皮細胞的代謝活動，

也可能參與內皮細胞抗炎及黏附等功能［25］。內皮細胞PFKFB3通過活化B細胞的核因子-κ輕鏈增強子信號通路調控黏附因子的表達及炎癥因子的釋放，從而促進由于過度炎癥反應造成的組織細胞損傷，PFKFB3敲減可減輕小鼠內毒素誘導的急性肺損傷。內皮細胞間連接由黏附、緊密和間隙連接的蛋白質復合物組成［26］。VE-cadherin完整性受損導致黏附連接分解，是造成病理狀態下組織水腫的主要原因。在敗血癥、局部缺血和創傷等疾病中，內皮細胞屏障完整性的破壞均會導致血管高滲透性和組織腫脹/水腫［27］。本研究中，PA感染通過PFKFB3途徑影響內皮細胞的代謝，促進內皮細胞黏附連接受損，加重組織水腫和炎癥反應。

自噬作為一種溶酶體依賴性分解代謝過程，被認為是維持能量穩態的微調和關鍵過程［28］。自噬維持線粒體代謝以滿足生物合成和能量需求［29］。研究顯示大鼠肉瘤激活的肺癌細胞敲減ATG5和ATG7后會損害線粒體功能，導致線粒體膜電位喪失和線粒體呼吸、細胞能量以及三羧酸循環代謝物的水平降低［30］。自噬損傷可參與內皮-間質轉化的細胞代謝紊亂［13］。巨噬細胞可以通過糖酵解重編程以響應自噬、炎性因子激活和細胞焦亡來清除細菌［31］。研究發現，PFKFB3能夠與自噬復合體中螯合體1蛋白的泛素結合域進行結合，降低PFKFB3的表達，并誘發乳腺癌干細胞進入休眠狀態［32］。同時，也有研究發現，PFKFB3通過調節自噬，影響缺氧誘導的肺動脈高壓中的血管重塑［33］。本研究中，PA感染后內皮細胞可以通過自噬關鍵基因ATG5調控PFKFB3介導的代謝重編程，進而調節內皮細胞黏附連接，維持內皮細胞的屏障功能。因此，PA感染后內皮細胞通過自噬抑制PFKFB3表達是一種自我保護的調控機制。據文獻報道，平滑肌細胞特異性敲減PFKFB3后，能夠抑制肺動脈高壓發展過程中的肺血管重構［11，25，33］。其機制可能是通過降低生長因子、促炎細胞

因子和細胞黏附因子的表達，抑制缺氧誘導的肺動脈高壓的進展，從而減輕內毒素誘導的小鼠急性肺損傷。

綜上，本研究結果表明，PA感染后肺血管內皮細胞通過ATG5調控PFKFB3表達，促進細胞無氧糖酵解，導致細胞代謝紊亂，內皮細胞間連接被破壞，導致小鼠肺組織水腫，炎癥反應加重。PFKFB3有可能成為一個治療PA下呼吸道感染的潛在靶點。

利益沖突? 所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明? 張雷、王俊軼：設計并實施實驗、統計數據、撰寫論文；何翔、吳敏、李國平：設計實驗、指導研究、提供基金支持；黃錦偉：指導研究、修改論文

參? 考? 文? 獻

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（收稿日期：2023-09-06）

勘? 誤

2022年第44卷第5期794～801頁《異丹葉大黃素對脂多糖誘導的小鼠急性肺損傷的影響》一文，圖7更改如下：