HPLC 法測定44%砜吡草唑·異丙隆懸浮劑中有效成分含量

李曉昀，譚盼，崔郭勤

(廣西速竟科技有限公司，南寧 530007)

砜吡草唑(pyroxasulfone)是日本組合化學株式會社開發的植物細胞分裂抑制劑，主要登記用于防除玉米、大豆及小麥等作物田禾本科和闊葉雜草[1]，而異丙隆(isoproturon)屬取代脲類除草劑，主要登記用于防除麥田禾本科雜草和一些闊葉雜草[2]。2 者復配不僅能擴大殺草譜，降低使用量，提高安全性，而且還能延緩雜草抗藥性的發生發展。關于砜吡草唑和異丙隆單一成分的檢測分析已有報道[3-6]，但2 者同柱分析目前尚未見有公開報道?；诖耍P者以44%砜吡草唑·異丙隆懸浮劑為研究對象，采用高效液相色譜法開展了砜吡草唑和異丙隆同柱分析測定方法的研究，以期為該產品的質量控制提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

98%砜吡草唑標準品(國家農藥質量監督檢驗中心)；98%異丙隆標準品(北京勤誠亦信科技開發有限公司)；44%砜吡草唑·異丙隆懸浮劑(廣西田園生化股份有限公司自制)；甲醇(色譜級，美國天地色譜試劑)；色譜級超純水：實驗室采用專用超純水機制備儀(四川優普超純科技有限公司)制備。

U3000 型高效液相色譜儀配集成自動進樣器、柱溫箱和可變波長檢測器(美國賽默飛公司)；BCE95I-10CN 電子分析天平(賽多利斯科學儀器有限公司)；KQ-250DE 數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；過濾器，濾膜孔徑0.45 μm(津騰)。

1.2 色譜操作條件

色譜柱為C18不銹鋼柱，250 mm×4.6 mm(i.d.)，填料0.45 μm；流動相為ψ(甲醇∶水)=60∶40(體積比)，經0.45 μm 微孔濾膜過濾后超聲波脫氣20 min；流量為1.0 mL/min；柱溫為30 ℃；檢測波長為220 nm；進樣體積為5 μL。在該色譜條件下砜吡草唑和異丙隆的保留時間分別約為8.5、10.1 min。HPLC 色譜如圖1 所示。

圖1 44%砜吡草唑·異丙隆懸浮劑中砜吡草唑和異丙隆的高效液相色譜圖

1.3 測定步驟

1.3.1 標樣溶液配制

稱取砜吡草唑標樣0.05 g(精確至0.000 01 g)于50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲振蕩5 min，取出恢復至室溫，搖勻，此為A 溶液。稱取異丙隆標樣0.05 g (精確至0.000 01 g)于另一50 mL 容量瓶中，準確吸取上述A 溶液5 mL 于該容量瓶中。用甲醇稀釋至刻度，超聲振蕩5 min，取出恢復至室溫，搖勻備用。

1.3.2 試樣溶液配制

稱取試樣0.13 g(精確至0.0002 g)于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲振蕩5 min，取出恢復至室溫，搖勻，經微孔過濾器過濾，濾液待測。

1.3.3 測定方法

在1.2 色譜操作條件下，待儀器基線穩定后，連續注入數針標樣溶液，直至相鄰2 針響應值變化小于1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.3.4 計算方法

將測得的2 針試樣溶液以及試樣前后2 針標樣溶液中砜吡草唑或異丙隆的峰面積分別平均。試樣中砜吡草唑或異丙隆的質量分數X1(%)按下式計算。

式中：A1為標樣溶液中砜吡草唑或異丙隆峰面積的平均值(mAU)；A2為試樣溶液中砜吡草唑或異丙隆峰面積的平均值(mAU)；m1為砜吡草唑或異丙隆標樣的質量(g)；m2為試樣的質量(g)；Pi為標樣中砜吡草唑或異丙隆的質量分數(%)；f 為標樣稀釋因子(計算異丙隆時f=1；計算砜吡草唑時f=0.1)。

2 結果與討論

2.1 流動相的選擇

分別用不同溶劑比例作為流動相，對試樣進行分離，結果表明：甲醇和水對助劑有很好的分離效果。當甲醇+水=60+40(體積比)作流動相時，砜吡草唑和異丙隆分離效果比較好，峰形好，分離時間短。因此選取甲醇-水混合溶劑體系作為流動相。

2.2 紫外吸收波長的選擇

分別對砜吡草唑和異丙隆進行紫外吸收光譜掃描，如圖2 所示?？梢姡窟敛葸蛟?99.19、225.94 nm 時，有較大吸收峰，而異丙隆在206.85、241.81 nm 有較大吸收峰?？紤]到2 種有效成分配比和吸光度值等綜合因素，選擇220 nm 作為檢測波長。

圖2 異丙隆(左)和砜吡草唑(右)紫外吸收波長圖

2.3 方法線性相關性

砜吡草唑：準確稱取0.05 g(精確到0.0002 g)的砜吡草唑標準品，置于50 mL 容量瓶中，經甲醇定容后，移取5 mL 于25 mL 容量瓶中，甲醇定容，得到質量濃度為0.2 mg/mL 的砜吡草唑標準溶液。再分別移取0.5、4、5、6、10 mL 溶液到10 mL 容量瓶，定容，稀釋成0.01、0.08、0.1、0.12、0.2 mg/mL的標準溶液，按照1.2 的高效液相色譜操作條件分別進樣測定。以砜吡草唑質量濃度為橫坐標，紫外光譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。在設定的質量濃度范圍內，砜吡草唑質量濃度與其相應峰面積之間呈現出較好的線性相關性，其擬合的線性方程為y=95.515 95x-0.013 11，線性相關系數r=0.9999。

異丙?。簻蚀_稱取0.5 g(精確到0.0002 g)的異丙隆標準品于25 mL 容量瓶中，甲醇定容，得到質量濃度為2 mg/mL 的標準溶液。取一定量的該標準溶液，分別稀釋成0.1、0.8、1、1.2、2.0 mg/mL 的標準溶液，按照1.2 的高效液相色譜操作條件分別進樣測定。以異丙隆質量濃度為橫坐標，紫外光譜峰面積為縱坐標繪制標準曲線。在設定的質量濃度范圍內，異丙隆質量濃度與其相應峰面積之間呈現出較好的線性相關性，其擬合的線性方程為y=168.202 44x+1.233 04，線性相關系數r=0.9999。

2.4 方法精密度

準確稱取5 份44%砜吡草唑·異丙隆懸浮劑樣品，在高效液相色譜條件下進行測定，結果如表1所示。砜吡草唑的有效成分平均值為4.0%，標準偏差為0.04%，變異系數為1.07%；異丙隆的有效成分平均值41.1%，標準偏差是0.05%、變異系數為0.1421%，表明該測定方法具有較高的精密度，符合質量控制的基本要求。

表1 方法精密度測定

2.5 方法準確度

在已知含量的44%砜吡草唑·異丙隆懸浮劑樣品中，分別加入不同量的砜吡草唑和異丙隆標準品，在1.2 色譜條件下測定樣品含量，計算回收率，結果如表2 所示。砜吡草唑的平均回收率為99.78%，異丙隆的平均回收率為99.50%，表明該測定方法具有較高的準確度。

表2 方法準確度(回收率)測定

3 結論

本文采用同柱分離方法建立了同時檢測44%砜吡草唑·異丙隆懸浮劑中2 種有效成分的高效液相色譜分析方法，該方法操作簡單、方便、快捷，具有良好分離效果及線性關系，準確度和精密度符合分析方法基本要求，可用于制劑產品中砜吡草唑和異丙隆的定量分析。