富硒猴頭菇中硒含量分布和賦存形態研究

徐聰 周高新 王勇 馬俊 楊柱 劉丙蕊

摘要 研究了富硒猴頭菇中硒的含量分布和賦存形態，結果表明，猴頭菇中總硒含量為205.98 μg/g，其中有機硒含量占總硒的91.39%，而有機硒中最主要的賦存形態為蛋白硒，含量占有機硒的66.18%，其次是多糖硒和其他有機硒，占比分別為18.90%和14.30%，另有少量的核酸硒。

關鍵詞 猴頭菇；硒；含量分布；賦存形態

中圖分類號 TS218? 文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2024）06-0182-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.06.040

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Study on Content Distribution and Combined Forms of Selenium in Selenium-enriched Heircium erinaceus

XU Cong，ZHOU Gao-xin，WANG Yong et al

（Ankang Institute of Agricultural Sciences，Ankang，Shaanxi 725021）

Abstract The content distribution and combined forms of selenium in selenium-enriched Hericium erinaceus were studied.The results showed that the content of total selenium in Hericium erinaceus was 205.98 μg/g，in which the content of organic selenium accounted for 91.39% of the total selenium.The main form of organic selenium was protein selenium，which accounted for organic selenium 66.18%; followed by polysaccharide selenium and other organic selenium，which accounted for organic selenium 18.90% and 14.30% respectively，and there was also a small amount of nucleic acid selenium.

Key words Heircium erinaceus;Selenium;Content distribution;Combined form

硒是人體中重要的微量元素之一［1］，硒能有效提高人體免疫能力［2-3］，預防癌癥和腫瘤等疾病［4］。我國缺硒或低硒地區高達72%，因此科學補硒已成為近年來功能性食品研究熱點。隨著研究深入，人們已經認識到富硒產品不能僅僅追求硒的含量，還需要著重研究硒的形態，因為不同形態的硒有著不同的化學功能和生物活性［5］。其中無機硒毒害性大，且吸收利用率低，但植物通過吸收、利用、轉化土壤中的硒變成有機硒進入食物鏈，成為人類和動物攝入硒的重要來源，因此研究植物對硒的生物富集特點具有重要意義。

猴頭菇自古就是藥食兩用寶庫中的珍品，其性平、味甘、利五臟、助消化、滋補功效［6］，特別是對胃潰瘍、十二指腸潰瘍和神經衰弱等患者有很好的保健效果［7-8］。李好［9］研究表明富硒猴頭菇的抑菌效果和對腸道菌的調節作用明顯優于普通猴頭菇。許偉等［10-12］研究表明猴頭菇硒多糖在抗氧化、增強正常小鼠免疫功能、腫瘤抑制作用方面效果都優于猴頭菇多糖。筆者著重研究有機硒在猴頭菇中的賦存形態和分布規律，這對開發新型補硒資源和尋找具有更強生物活性的功能因子具有重要意義，也為合理開發利用富硒猴頭菇、完善富硒猴頭菇標準提供了科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試材。猴頭菇樣品由安康市農業科學研究院食用菌研究所提供。

1.1.2 儀器。

全能型微波化學工作平臺（TOPEX+，上海屹堯儀器科技發展有限公司）；智能控溫電加熱器（G-400，上海屹堯儀器科技發展有限公司）；原子熒光光度計（AFS-8220，北京吉天儀器公司）；硒編碼特種空心陰極燈；超聲波清洗器（KH5200DE，昆山禾創超聲儀器公司）；優普純水機（UPH-Ⅱ-20T）。

1.1.3 試劑。硒標準溶液［GBW（E）080215］，100 μg/mL，國家標準物質中心；硝酸，優級純，成都科龍化工試劑廠；鹽酸，優級純，洛陽昊華化學試劑有限公司；30%過氧化氫，分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司；三氯乙酸，分析純，上海山浦化工有限公司；試驗用水為優普純水機制備的超純水；器皿使用前用10% HNO3浸泡24 h，超純水沖洗備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品預處理。烘箱75 ℃烘干至恒重，再粉碎、過篩后貯存在干燥器中備用。

1.2.2 總硒含量的測定。硒含量測定采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法［13-14］。

1.2.3 無機硒含量的測定。稱取1.0 g左右菇粉放入50 mL離心管，加入20 mL超純水搖勻，測pH約為6.5。70 ℃水浴振蕩0.5 h后，50 ℃超聲提取20 min，冷卻離心取上清；殘渣再提取一次后合并上清液，用甲苯萃取2次，水相濃縮［15］。再采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法［13-14］測定其中硒含量。

1.2.4 有機硒含量。采用差減法，總硒含量減去無機硒含量得有機硒含量。

1.2.5 硒蛋白的提取和測定。稱取2.0 g左右菇粉放入100 mL 離心管，加入40 mL的0.07 mol/L NaOH溶液，提取溫度70 ℃，第1次提取4 h離心收集上清，第2次沉渣加入0.07 mol/L NaOH溶液20 mL，70 ℃下再次提取2 h后取上清，第3次重復第2次步驟。合并上清液，6 mol/L 鹽酸調pH至4.0～4.5，出現沉淀，4 ℃下靜置過夜，離心收集沉淀［16］。采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法［13-14］測定其中硒含量。

1.2.6 多糖硒的提取和測定。稱取3.0 g左右菇粉放入100 mL 離心管，加入50 mL純化水，搖勻后用緩沖液調pH為4.0，加入木瓜蛋白酶、果膠酶、纖維素酶各0.03 g，搖勻50 ℃水浴加熱酶解90 min，80 ℃水浴滅酶10 min。超聲波破碎20 min 后離心取上清液，沉淀20 mL水再次清洗、離心，合并上清液約80 mL。TCA法［17］除去蛋白質后，加入4倍體積的乙醇，4 ℃下靜置過夜，得多糖沉淀，用85%乙醇洗滌2次后，超純水溶解定容至50 mL［18-19］。采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法［13-14］測定其中硒含量。

1.2.7 核酸硒的提取和測定。采用濃鹽法［20］提取后，采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法［13-14］測定其中硒含量。

1.2.8 其他有機硒含量。采用差減法，有機硒含量減去蛋白硒、多糖硒、核酸硒的硒含量所得。

1.3 標準溶液的配制

硒標準使用液配制成濃度為1.0、3.0、5.0、10.0、20.0、30.0 μg/L的梯度標液，繪制標準曲線。

1.4 儀器工作條件

1.4.1 TOPEX+微波化學工作平臺設置。根據屹堯微波消解儀說明書設置TOPEX+消解菇粉的工作條件，具體見表1。

1.4.2 AFS-8220原子熒光光度計工作設置。負高壓270 V；總電流80 mA；輔陰極電流40 mA；載氣流量300 mL/min，屏蔽氣流量800 mL/min；原子化器高度8 mm；測定方式為校準曲線；讀數方式為Peak Area；測量方式為Std.Curve；讀數時間10 s，延遲時間1 s，重復次數2次；載流為10% HCl，還原劑為2% KBH4～0.5% KOH；進樣方式為手動進樣［21］。

2 結果與分析

2.1 標準曲線的繪制及檢出限 在“1.4.2”中設置的工作條件下用“1.3”配制的標準溶液依次測量，以相對熒光強度為縱坐標、硒標準溶液濃度為橫坐標繪制標準曲線，通過儀器工作站得到硒標準曲線的線性回歸方程為y=147.23x+37.78（R2=0.999 8），表明硒在1～30 μg/L與原子熒光強度線性關系良好。根據限量檢測要求，用3б法得出方法檢出限為0.009 mg/kg，滿足檢測要求。

2.2 加標回收試驗

樣品采用標準加入法驗證硒含量測定方法的準確度和精密度，在已知總硒含量本底值為6.256 μg/L的菇粉中分別加入高、中、低3種濃度的硒標準溶液，靜置過夜后按微波消解-氫化物原子熒光光譜法進行處理，獲得回收率和精密度試驗結果，結果見表2。從表2可以看出，平均回收率為86.53%～108.28%，加標后相對標準偏差（RSD）<5%，符合試驗要求。

2.3 重復性試驗

為了驗證該試驗方法的可靠性，稱取7份猴頭菇粉采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法測定總硒含量，得到總硒平均含量為205.98 μg/g，RSD為2.60%，RSD小于5.00%，符合試驗要求。

2.4 精密性試驗

為了驗證測量方法的可靠性，對3份猴頭菇粉總硒含量分別測量了5次，計算RSD，結果見表3。從表3可以看出，RSD均小于5%，符合試驗要求。

2.5 富硒猴頭菇中硒的形態及分布比例 根據“1.2”的試驗方法依次得到了菇粉總硒和各類有機硒的含量，具體結果見表4。從表4可以看出，猴頭菇中大部分硒為有機硒，占總量的91.39%。其中蛋白硒是有機硒中硒的主要賦存形態，占有機硒含量的66.18%，其次是多糖硒，占18.90%，核酸硒占0.62%，其他有機硒占14.30%。

3 結論

猴頭菇中大部分硒為有機硒，占總硒的91.39%，說明猴頭菇是一種較好的富集硒的生物載體，多能為人體安全吸收、利用。其中，蛋白硒是富硒猴頭菇中硒的主要賦存形態，約總硒量的60.48%，占有機硒含量的66.18%。3種有機態硒含量從高到低依次為蛋白硒、多糖硒、核酸硒，這與蛋白質、多糖、核酸3類物質在猴頭菇中含量分布一致。研究猴頭菇中硒的賦存形態，為拓展其在食療保健領域中的應用提供了試驗依據，開發綠色補硒產品，有利于提高其利用價值。

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